【技术实现步骤摘要】
沿阶草AFLP分子指纹图谱库的构建方法及其应用
本专利技术属于植物分子育种领域，涉及一种沿阶草AFLP分子指纹图谱库的构建方法及其应用，尤其涉及到为形态上不便于鉴别的沿阶草提供一种能通过分子指纹图谱库中的遗传标记进行种质鉴别或品种鉴定及品种权保护等方面的鉴定技术。
技术介绍
沿阶草又名麦冬(Ophiopogonjaponicus)，属百合科沿阶草属多年生常绿草本地被或构景植物，也是传统的道地中药，被《神农本草经》列为上品滋阴、润肺清心的中药药材，是我国特有的一种重要的乡土植物，国外日本、越南、朝鲜和印度也有分布。其野生种质资源非常丰富，种类繁多；近年来民间开发利用的力度也很大，由此引起的种质混乱现象也十分严重；沿阶草种质特有的一些遗传性状如矮生性、强耐荫性及药理活性(如含有多糖和高异黄铜类化合物等活性物质)等基因资源的发掘及利用研究也逐渐得到学界业界重视。沿阶草良好地经济效益，友好地环境适应性，使其开发利用前景广阔。鉴于沿阶草的发展前景及目前的使用状况，亟待加强对其种质的鉴别筛选，品种鉴定及品种权的保护等。生物在长期...
【技术保护点】
1.一种引物对组合，其特征在于，所述引物对组合包括九组引物对，所述九组引物对包括引物E-AAG和引物M- CTC、引物E-AAG和引物M-CTT、引物E-AAG和引物M-CTG、引物E-ACG和引物M-CAG、引物E-ACA和引物M-CAC、引物E-ACT和引物M-CAA、引物E-ACT和引物M-CTC、引物E-ACG和引物M-CAC、引物E-ACG和引物M-CAG、引物E-ACG和引物M-CTA、引物M-CAG和引物M-CTT，所述引物E-AAG序列如SEQ ID NO：1所示，所述引物M- CTC序列如SEQ ID NO：2所示；所述引物M-CTT序列如SEQ ID N...
【技术特征摘要】
1.一种引物对组合，其特征在于，所述引物对组合包括九组引物对，所述九组引物对包括引物E-AAG和引物M-CTC、引物E-AAG和引物M-CTT、引物E-AAG和引物M-CTG、引物E-ACG和引物M-CAG、引物E-ACA和引物M-CAC、引物E-ACT和引物M-CAA、引物E-ACT和引物M-CTC、引物E-ACG和引物M-CAC、引物E-ACG和引物M-CAG、引物E-ACG和引物M-CTA、引物M-CAG和引物M-CTT，所述引物E-AAG序列如SEQIDNO：1所示，所述引物M-CTC序列如SEQIDNO：2所示；所述引物M-CTT序列如SEQIDNO：3所示，所述引物E-ACA序列如SEQIDNO：4所示，所述引物M-CAC序列如SEQIDNO：5所示，所述引物E-ACT序列如SEQIDNO：6所示，所述引物M-CAA序列如SEQIDNO：7所示，所述引物E-ACG序列如SEQIDNO：8所示，所述引物M-CAG序列如SEQIDNO：9所示，所述引物M-CTA序列如SEQIDNO：10所示。
2.权利要求1所述的引物对组合在沿阶草种质鉴别或品种鉴定或AFLP分子指纹图谱库的构建中的应用。
3.一种沿阶草AFLP分子指纹图谱库的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）沿阶草不同种质获得：通过收集多点多地区不同种质或品种的沿阶草及通过理化诱变剂诱导体细胞基因突变体胚再生获得不同种质沿阶草，将其种植成沿阶草种质资源圃；
2）沿阶草基因组DNA的提取：在生长季采集不同种质沿阶草的新鲜幼嫩叶片分别装袋带回实验室，采用CTAB法提取DNA；
3）沿阶草AFLP反应体系的建立与优化：将提取的不同种质沿阶草基因组DNA，经过酶切、连接、预扩增、选择性扩增、电泳步骤，得到各个种质的相应条带或指纹图谱，其中具有相同条带的被认为是拥有同样的遗传位点，具有不同大小的条带被认为拥有不同的遗传位点，由此获得沿阶草AFLP分子指纹图谱标记；
4）沿阶草AFLP指纹图谱库及分析：通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染后上测序仪扫描获得AFLP凝胶电泳分离图谱库，通过软件分析获得结果，按照相同迁移位点有扩增带记为1，无带为0的方法记录电泳谱带，并转化为“0、1”原始数据矩阵，进行遗传变异信息统计分析及亲缘关系多态性图谱分析，从而筛选出权利要求1所述的引物对组合从而构建沿阶草AFLP分子指纹图谱库。
4.根据权利要求3所述的沿阶草AFLP分子指纹图谱库的构建方法，其特征在于，所述步骤1）沿阶草包括矮生102、矮生256、黑色6...
【专利技术属性】
技术研发人员：梁慧敏，李晨龙，梁栋，刘艳，白玉梅，夏阳，袁诗宇，翟云菲，
申请(专利权)人：江苏农林职业技术学院，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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