一种环形阻滞探针、含有所述环形阻滞探针的扩增阻碍突变系统及其应用技术方案

本发明专利技术提供了一种环形阻滞探针、含有所述环形阻滞探针的扩增阻碍突变系统及其应用，所述环形阻滞探针按照5’‑3’方向为第一结合序列、环状序列和第二结合序列，所述第一结合序列和第二结合序列互为反向重复序列；所述环形阻滞探针的3’端末1位碱基与模板的野生型位点互补；所述环形阻滞探针的3’末端修饰有阻滞基团；所述环形阻滞探针的环状序列与模板互补。本发明专利技术向扩增阻碍突变系统中加入环形阻滞探针，在PCR开始前环形阻滞探针优先结合在野生型模板上，对野生型模板进行封闭，随后采用特异性引物对突变模板进行PCR扩增，显著提高了PCR扩增的特异性，扩大了线性范围，实现了低频率突变样本的精确定量。

【技术实现步骤摘要】
一种环形阻滞探针、含有所述环形阻滞探针的扩增阻碍突变系统及其应用
本专利技术属于生物
，涉及一种环形阻滞探针、含有所述环形阻滞探针的扩增阻碍突变系统及其应用。
技术介绍
骨髓增殖性肿瘤（MPN）通常伴有JAK2基因1849位（G/T）突变，导致该蛋白第617位的缬氨酸（V）突变为苯丙氨酸（F），从而引起一系列病变。在真性红细胞增多症（PV）患者中，JAK2-V617F突变率约为90%~95%，而在原发性血小板增多症（ET）和原发性骨髓纤维化（PMF）中，JAK2-V617F的突变率约为50%~60%。世界卫生组织（WHO）明确将JAK2-V617F突变作为MPN主要诊断指标之一。随着新药芦可替尼（捷恪卫）的上市，市场上也逐渐有了定量检测JAK2-V617F的需求，通过对该基因突变频率进行定量监测，能够判断药效并建立用药方案，且能够用于监测微小残留病（MRD），具有新的临床意义。扩增阻碍突变系统（ARMS）是指采用3’末端对应于突变位点的引物进行扩增的技术，当引物3’末端与突变位点匹配时，扩增反应发生，当不匹配时，扩增反应受本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种环形阻滞探针，其特征在于，所述环形阻滞探针按照5’-3’方向为第一结合序列、环状序列和第二结合序列，所述第一结合序列和第二结合序列互为反向重复序列；/n所述环形阻滞探针的3’端末1位碱基与模板的野生型位点互补；/n所述环形阻滞探针的环状序列与模板互补；/n所述环形阻滞探针的3’末端修饰有阻滞基团；/n所述环形阻滞探针的3’端末2~末5位含有1~2个错配碱基；/n所述第一结合序列的长度为3~5 bp；/n所述第二结合序列的长度为3~5 bp。/n

【技术特征摘要】
1.一种环形阻滞探针，其特征在于，所述环形阻滞探针按照5’-3’方向为第一结合序列、环状序列和第二结合序列，所述第一结合序列和第二结合序列互为反向重复序列；
所述环形阻滞探针的3’端末1位碱基与模板的野生型位点互补；
所述环形阻滞探针的环状序列与模板互补；
所述环形阻滞探针的3’末端修饰有阻滞基团；
所述环形阻滞探针的3’端末2~末5位含有1~2个错配碱基；
所述第一结合序列的长度为3~5bp；
所述第二结合序列的长度为3~5bp。


2.一种扩增阻碍突变系统，其特征在于，所述扩增阻碍突变系统包括权利要求1所述的环形阻滞探针；
所述扩增阻碍突变系统还包括PCR上游引物和PCR下游引物，所述PCR下游引物的3’端末1位碱基与模板的突变型位点互补；
所述PCR下游引物的3’端末2~末5位含有1~2个错配碱基；
所述环形阻滞探针的Tm值高于所述PCR下游引物的Tm值5~8℃。


3.根据权利要求2所述的扩增阻碍突变系统，其特征在于，所述扩增阻碍突变系统还包括荧光探针。


4.一种核酸检测试剂盒，其特征在于，所述核酸检测试剂盒包括权利要求2或3所述的扩增阻碍突变系统；
所述核酸检测试剂盒还包括PCR缓冲液、DNA聚合酶、UDG酶、dNTP和dUTP。


5.一种核酸检测体系，其特征在于，所述核酸检测体系包括权利要求1所述的环形阻滞探针；
所述核酸检测体系还包括PCR引物对、荧光探针、PCR缓冲液、DNA...

【专利技术属性】
技术研发人员：程雪涛，王洁，焦柔，张亚飞，
申请(专利权)人：迈杰转化医学研究苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32