tRNA-Asp-AUC及其所构建的表达系统和应用技术方案

本发明专利技术属于分子生物学技术领域，具体涉及一种tRNA‑Asp‑AUC及其所构建的表达系统和在提高链霉菌抗生素产量中的应用。本发明专利技术所述的tRNA‑Asp‑AUC核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，tRNA‑Asp‑AUC转入天蓝色链霉菌中能够显著提高天蓝色链霉菌的十一烷基灵菌红素(Undecylprodigiosin)、放线菌紫素(Actinorhodin)和次甲霉素(Methylenomycin)的抗生素产量，tRNA‑Asp‑AUC能够提高天蓝色链霉菌的抗生素产量具有广阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
tRNA-Asp-AUC及其所构建的表达系统和应用
本专利技术属于分子生物学
，具体涉及一种tRNA-Asp-AUC及其所构建的表达系统和在提高链霉菌抗生素产量中的应用。
技术介绍
链霉菌是一类具有分枝丝状体的好氧性革兰氏阳性细菌，是土壤中主要的微生物类群之一。链霉菌是工业微生物中最具有商业应用价值的生物类群之一，自然界中有近70％的抗生素是由链霉菌及其近缘放线菌产生的，链霉菌在其复杂的形态分化过程中所产生的极为丰富的次级代谢产物，在工、农、医等方面具有重要而广泛的应用价值。链霉菌中的抗生素基因属于次生代谢产物基因，大部分抗生素基因处于沉默状态，由于密码子的摆动效应，部分次生代谢产物基因能够实现表达，但是产量普遍不高，本领域的技术人员通常通过菌种筛选、菌种诱变、代谢调控的方式提高链霉菌的抗生素产量。例如，专利号为CN200510015847.8的中国专利技术专利《激光诱变玫瑰孢链霉菌选育达托霉素高产菌株的方法》，该专利技术公开了一种激光诱变玫瑰孢链霉菌选育达托霉素高产菌株的方法，依此方法诱变得到的玫瑰孢链霉菌，同原始菌株相比，发酵单位提高0.5-3.3倍。专利号为CN201110050112.4的中国专利技术专利《一种提高阿维菌素产量的方法及其生产菌株》，该专利技术提供了一种提高阿维菌素产量的方法及生产菌株，其是将阿维链霉菌中编码细胞质外功能亚家族RNA聚合酶σ因子(ECFsubfamilyRNApolymerasesigmafactor)的sig6基因通过基因缺失载体引入阿维链霉菌中，获得缺失sig6基因的重组菌，使其不再合成σ6，从而提高阿维菌素的产量。专利号为CN200910089970.2的中国专利技术专利《提高阿维菌素和/或伊维菌素产量的方法及生产菌株》，该专利技术提供了一种提高阿维菌素和/或伊维菌素产量的方法及生产菌株，其是将阿维链霉菌中编码麦芽糖转运蛋白的malEFG基因通过表达载体引入阿维链霉菌中获得麦芽糖转运蛋白过表达的重组菌，通过该重组菌过量表达麦芽糖转运系统基因来提高麦芽糖的利用效率，以提高阿维菌素和/或伊维菌素的产量。但是由于上述方法均无法从根本解决抗生素基因的沉默问题，所以结果并不理想。本专利技术提供了一种tRNA-Asp-AUC，将所述tRNA-Asp-AUC转入目的链霉菌中，能够显著提高其特定抗生素的产量，具有广阔的应用前景。
技术实现思路
针对上述技术问题，本专利技术提供一种tRNA-Asp-AUC，所述tRNA-Asp-AUC具有SEQIDNO:1所示的核苷酸序列。含有所述tRNA-Asp-AUC的质粒。含有所述tRNA-Asp-AUC的细胞株。所述tRNA-Asp-AUC在提高链霉菌抗生素产量中的应用。所述tRNA-Asp-AUC在提高链霉菌抗生素产量中的应用，所述链霉菌为天蓝色链霉菌。所述tRNA-Asp-AUC在提高链霉菌抗生素产量中的应用，所述抗生素为十一烷基灵菌红素(Undecylprodigiosin)、放线菌紫素(Actinorhodin)和次甲霉素(Methylenomycin)。一种可以有效促进链霉菌抗生素合成的表达系统，所述的表达系统中含有所述tRNA-Asp-AUC的质粒。所述的表达系统在提高链霉菌抗生素产量中的应用。优选地，所述的链霉菌为天蓝色链霉菌。本专利技术的有益效果是：本专利技术提供了一种tRNA-Asp-AUC，所述的tRNA-Asp-AUC能够提高链霉菌抗生素的产生量，用其构建的pSH152-ermE-promoter-tRNA-Asp-AUC载体是一种可以有效促进链霉菌抗生素合成的表达系统，将pSH152-ermE-promoter-tRNA-Asp-AUC载体转入天蓝色链霉菌后，结果显示所述tRNA-Asp-AUC可以明显提高天蓝色链霉菌产生十一烷基灵菌红素(Undecylprodigiosin)、放线菌紫素(Actinorhodin)和次甲霉素(Methylenomycin)的产量。所述的表达系统pSH152-ermE-promoter-tRNA-Asp-AUC可在提高链霉菌抗生素产量中应用。附图说明图1pSH152-ermE-promoter-tRNA-Asp-AUC载体的序列图谱图2pSH152-ermE-promoter-tRNA-Asp-AUC转化至天蓝色链霉菌中抗生素的表达效果图3tRNA-Asp-AUC促进天蓝色链霉菌生产次甲霉素(Methylenomycin)的效果具体实施方式下面通过具体实施例对本专利技术进行详细的阐述，但本专利技术的保护范围并不限于以下实施例，任何本领域的技术人员在本专利技术的基础上，结合本领域公知常识所能想到的技术方案，都属于本专利技术的保护范围。下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。本专利技术中使用的pSH152质粒购自于北京合生基因科技有限公司,大肠杆菌JM109购自于北京全式金生物技术有限公司。下述实施例中用到的培养基：MM培养基(100ml培养基配方)：黄豆粉2g、甘露醇2g、琼脂2g，pH＝7.2-7.4。NA培养基：蛋白胨10g/L、牛肉粉3g/L、氯化钠5g/L。LB培养基：胰蛋白胨10g、酵母提取物5g、NaCl10g，5mol/LNaOH调pH至7.0。实施例一、tRNA-Asp-AUC的序列1.委托上海强耀生物科技有限公司合成tRNA-Asp-AUC的序列，其核苷酸序列如SEQIDNO:1所示。aaggctgtagcgcagaggtcgtcgcgcccacgcatcaagctggaggacgtcggttcgaatccgaccggtcttg实施例二、pSH152-ermE-promoter-tRNA-Asp-AUC载体的构建由于tRNA-Asp-AUC不能自主进入到链霉菌中促使链霉菌表达抗生素，因此，需要将其插入到pSH152载体中，同时，在tRNA-Asp-AUC序列的前端插入ermE-promoter启动子序列，保证tRNA-Asp-AUC被插入到pSH152载体后的能够正常转录，翻译。构建出来的载体为pSH152-ermE-promoter-tRNA-Asp-AUC，具体构建方法如下所述：1.构建pSH152-ermE-promoter-tRNA-Asp-AUC载体(1)引物构建引物pH1:CTGTTGTGGGCACAATCGTGCCGGTTGGTAGG引物pH2:ACCTCTGCGCTACAGCCTTCGCTGGATCCTACCAACC引物pH3:CCAGCGAAGGCTGTAGCGCAGAGGTCGTCGC引物pH4:CAAGACCGGTCGGATTCGAACCGACGTCC(2)PCR扩增取2XMix12.5μL、引物本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种tRNA-Asp-AUC，所述tRNA-Asp-AUC具有SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。/n

【技术特征摘要】
1.一种tRNA-Asp-AUC，所述tRNA-Asp-AUC具有SEQIDNO.1所示的核苷酸序列。


2.含有如权利要求1所述tRNA-Asp-AUC的质粒。


3.含有如权利要求1所述tRNA-Asp-AUC的细胞株。


4.如权利要求1所述tRNA-Asp-AUC在提高链霉菌抗生素产量中的应用。


5.如权利要求4所述tRNA-Asp-AUC在提高链霉菌抗生素产量中的应用，所述链霉菌为天蓝色链霉菌。


6.如权...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈熙明，张昺林，牛军波，张威，陈拓，刘光琇，
申请(专利权)人：中国科学院寒区旱区环境与工程研究所，
类型：发明
国别省市：甘肃;62