一种抗TNF-α类单克隆抗体的层析方法技术

本发明专利技术涉及一种抗TNF‑α类单克隆抗体的层析方法，属于生物技术领域。具体公开了一种TNF‑α类单抗纯化过程中去除宿主蛋白及多聚体的方法。采用离子交换与疏水复合层析的填料，使用低pH缓冲液清除污染物，然后使用更低pH洗脱缓冲液来洗脱目的抗体。本发明专利技术的技术方案，能去除一部分多聚体和大部分宿主蛋白，显著提高抗体纯度，价格更便宜且无proteinA脱落，简单方便，无需调节样品pH值与电导，适合于工艺放大及工业生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及单克隆抗体制备，具体涉及抗TNF-α类单克隆抗体的层析的方法。
技术介绍
抗肿瘤坏死因子α(TNF-α)单克隆抗体(Mc Ab)在临床治疗败血症休克、类风湿性关节炎等疾病中有广泛的应用前景，如英夫利昔单抗(infliximab)、阿达木单抗(adalimumab)、Golimumab都是TNFα类抗体。其中阿达木单抗是全球首个被批准的抗肿瘤坏死因子α(TNFα)全人源单克隆抗体。阿达木单抗可阻止TNFα与其细胞表面受体结合，从而阻断TNFα的生物学活性，最终减轻炎症反应并减少破骨细胞激活，达到控制并缓解症状体征的目的。目前，绝大多数的药厂采用的是CHO(中国仓鼠卵巢)细胞，该细胞是被WHO和FDA认可用于抗体和重组蛋白等生物制品的生产传代细胞。传统纯化方法如中国专利CN 102257006A，公开了通过亲和层析捕获步骤分离和纯化抗体的方法，Protein A柱由于选择性高和去杂质能力强，经常被首选进行抗体捕获，但其价格昂贵、洗脱的低pH易导致高分子聚合物形成、Protein A配基掉落等缺点，使越来越多的研究开始关注用非ProteinA工艺来解决现有问题。阳离子层析作本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗TNF‑α类单克隆抗体的层析方法，包括以下步骤：1)将抗TNF‑α类单抗组合物加载到复合层析材料上；2)用pH 7.0～7.4的第一清洗缓冲液清洗所述复合层析材料；3)用pH低于第一清洗缓冲液的的第二清洗缓冲液清洗所述复合层析材料；4)用pH低于第二清洗缓冲液、含有7～10mM的苯丁酸钠、0.05～0.3M尿素以及1～4％体积含量乙醇的洗脱缓冲液洗脱；其中，所述的抗TNF‑α类单抗组合物pH为6.0～7.0；所述的复合层析材料为离子交换作用和疏水作用的复合介质；所述的污染物包括宿主细胞蛋白。

【技术特征摘要】
2015.03.23 CN 20151012795431.一种抗TNF-α类单克隆抗体的层析方法，包括以下步骤：1)将抗TNF-α类单抗组合物加载到复合层析材料上；2)用pH 7.0～7.4的第一清洗缓冲液清洗所述复合层析材料；3)用pH低于第一清洗缓冲液的的第二清洗缓冲液清洗所述复合层析材料；4)用pH低于第二清洗缓冲液、含有7～10mM的苯丁酸钠、0.05～0.3M尿素以及1～4％体积含量乙醇的洗脱缓冲液洗脱；其中，所述的抗TNF-α类单抗组合物pH为6.0～7.0；所述的复合层析材料为离子交换作用和疏水作用的复合介质；所述的污染物包括宿主细胞蛋白。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤4)为用pH低于第二清洗缓冲液、含有7～9mM的苯丁酸钠、0.05～0.15M尿素以及1～3％体积含量乙醇的洗脱缓冲液洗脱。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤4)为用pH低于第二清洗缓冲液、含有8mM的苯丁酸钠、0.1M...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨辉，马旭通，杨彬，孙文正，李文佳，苏彦景，
申请(专利权)人：广东东阳光药业有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44