鉴别结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌感染的试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种鉴别结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌感染的试剂盒，包括结核分枝杆菌特异性的抗原、分枝杆菌属特异性抗原，及检测T细胞对所述抗原识别的工具。本发明专利技术的鉴别结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌感染的试剂盒，可区分两者感染，相比痰涂片及痰培养法具有更高的灵敏性和特异性以及操作安全性。对医生的临床诊断及用药具有重要的指导意义。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医学检验领域，涉及细胞免疫学检验方法，具体地说，涉及一种鉴别结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌感染的检测试剂盒。
技术介绍
结核病(tuberculosis,TB)是全世界范围内最普遍的慢性传染性疾病之一，主要由结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis,MTB)感染引起，此外其它分枝杆菌尤其是非结核分枝杆菌(nontuberculosismycobacteria,NTM)感染所致大约占临床病例的5％～15％，后者在艾滋病合并结核时比例更高。据统计，全球大约有1/3人口感染了Mtb，其中5％～10％的感染者为结核病患者，每年约有800万～900万新发活动性肺结核病例，200万～300万因结核病而死亡。非结核分枝杆菌(NTM)是分支杆菌属内除MTB和麻风分支杆菌以外的其他结核分支杆菌。迄今共发现154中NTM和13个亚种，仅少部分对人体治病。引起NTM病的常见菌种为鸟—胞内分枝杆菌复合体(Mycobacteriumaviumcomplex或Mycobacteriumavium-intracellularecomplex，MAC)，感染患者多见慢性呼吸系统症状，与肺结核相同，其临床表现容易与MTB感染引起的肺结核病混淆，不易鉴别。而大多数NTM对常用的抗MTB药物均耐药，为此，在临床中结核病治疗前，对MTB和NTM感染的区分和鉴定十分重要。传统方法鉴别NTM时，需要使用分离培养基培养出分枝杆菌菌株后，再利用分子生物学的方法进行鉴定，这样的方法耗时长，且对检测器材要求较高，不利于临床使用。因此，我们缺乏一种可以快速诊断MTB或NTM感染引起的结核病的有效方法。此外，MTB感染率很高，发病率相对较低，但结核潜伏感染(latenttuberculosisinfection,LTBI)者在机体免疫功能降低或其他情况下可转变为结核病患者，且在很大程度上与活动性结核病患者一起成为结核病危险的传染源。LTBI是结核菌感染后的一种亚临床状态，无临床症状、细菌学及放射检查常阴性、结核菌素皮肤试验(tuberculinskintest,TST)即纯蛋白衍生物(purifiedproteinderivative,PPD)试验可呈现阳性。但由于PPD试验不能鉴别自然感染与卡介苗(BCG)接种，其结果可导致MTB感染率调查结果偏高，因此迫切需要研究开发更为特异、可靠的检测方法和试剂。酶联免疫斑点测定(enzymelinkedimmunospotassay,ELISPOT)是近年新建立的一种细胞免疫学检测方法，其基本原理是在ELISA方法基础上建立，可在体外检测抗原(多肽)特异性免疫细胞释放细胞因子(如γ-干扰素等)，是一种基于抗原特异性细胞免疫反应的新型免疫检测技术，已被证明在结核(包括菌阳与菌阴肺结核、肺外结核)诊断、LTBI检测、治疗效果监测等方面有潜在的应用价值。有研究显示该技术不受BCG接种影响，与PPD试验相比具有更高的特异性、能显著提高艾滋病合并结核的检测率。目前，在国外，基于ELISPOT原理、商业化的T-SPOT.TB(OxfordImmunotec,Abingdon,UK)，基于ELISA原理的QuantiFERONTB1Gold(QFT-G)与QuantiFERON-TB1GoldIn-tube(QFT-IT)(Cellestis,Carnegie,Victoria,Australia)的结核γ干扰素释放试验已被多个国家批准使用，在许多欧美国家已被列入LTBI和结核接触者检测指南中；但由于价格较贵而限制了在我国广泛使用，且有数据显示对中国人群的检测有相对较低的敏感性，有研究提示这可能与人群对不同多肽片段的反应表现出一定的种族差异有关；同时，我国研究的几款ELISPOT试剂中的结核多肽多数不是自主研发的。此外，上述所有试剂都是针对MTB感染检测，尚无MTB与NTM感染同时并鉴别检测的ELISPOT报道。
技术实现思路
为了克服现有技术存在的问题，本专利技术提供一种鉴别结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌感染的试剂盒。本专利技术所采用的技术方案为：一种鉴别结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌感染的试剂盒，包括结核分枝杆菌特异性的抗原、分枝杆菌属特异性抗原，及检测T细胞对所述抗原识别的工具。进一步地，所述的试剂盒通过利用结核分枝杆菌特异性的抗原和分枝杆菌属特异性抗原分别与待测的离体T细胞接触，并检测该T细胞释放的细胞因子，鉴定待测样品为结核分枝杆菌或非结核分枝杆菌感染。进一步地，将所述结核分枝杆菌特异性的抗原和分枝杆菌属特异性抗原检测结果进行比较，根据比较结果判断所述待测的离体T细胞为结核分枝杆菌感染或非结核分枝杆菌感染。进一步地，如果所述结核分枝杆菌特异性的抗原和分枝杆菌属特异性抗原检测均呈阳性，则所述待测的离体T细胞为结核分枝杆菌感染；如果如果所述结核分枝杆菌特异性的抗原检测结果呈阴性而所述分枝杆菌属特异性抗原检测结果呈阳性，则所述待测的离体T细胞为非结核分枝杆菌感染。进一步地，所述结核分枝杆菌特异性的抗原包括多肽E6、E7、C14中的一种或几种。进一步地，所述抗原识别的工具包括IFN-γ抗体。进一步地，所述抗原识别的工具检测待测的离体T细胞释放的细胞因子。进一步地，所述T细胞来源于血液、肺泡灌洗液、胸水、脑脊液、淋巴结。进一步地，所述试剂盒还包括阴性对照组和阳性对照组，所述阳性对照组含有PMA和离子霉素。本专利技术的有益效果为：本专利技术利用分枝杆菌属特异性抗原，结合MTB特异性的检测的ELISPOT检测法，可以同时鉴定MTB和NTM感染。本专利技术的鉴别结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌感染的试剂盒，可区分两者感染，相比痰涂片及痰培养法具有更高的灵敏性和特异性以及操作安全性。对医生的临床诊断及用药具有重要的指导意义。为了更好地理解和实施，下面结合附图详细说明本专利技术。附图说明图1为本专利技术的鉴别结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌感染的试剂盒检测孔及对照孔设置、结果示意图，其中，检测1设置MTB特异性E6+E7+C14混合多肽；检测2设置分枝杆菌属特异性混合多肽；对照1：为阳性(PMA+Inomycin)对照；对照2：阴性对照；T1和T2分别为平行对照的T-SPOT.TB。具体实施方式【实施例1】本实施例包括一种鉴别结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌感染的试剂盒请参照图1，本试剂盒包括检测孔、对照孔和平行对照孔，其中的检测试剂设置为：检测1：MTB特异性E6+E7+C14混合多肽检测2：分枝杆菌属特异性混合多肽；对照1：本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种鉴别结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌感染的试剂盒，其特征在于：包括结核分枝杆菌特异性的抗原、分枝杆菌属特异性抗原，及检测T细胞对所述抗原识别的工具。

【技术特征摘要】
1.一种鉴别结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌感染的试剂盒，其特征在于：包括结核分枝杆菌
特异性的抗原、分枝杆菌属特异性抗原，及检测T细胞对所述抗原识别的工具。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：通过利用结核分枝杆菌特异性的抗原和分枝
杆菌属特异性抗原分别与待测的离体T细胞接触，并检测该T细胞释放的细胞因子，鉴定
待测样品为结核分枝杆菌或非结核分枝杆菌感染。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：将所述结核分枝杆菌特异性的抗原和分枝杆
菌属特异性抗原检测结果进行比较，根据比较结果判断所述待测的离体T细胞为结核分枝
杆菌感染或非结核分枝杆菌感染。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，如果所述结核分枝杆菌特异性的抗原和分枝
杆菌属特异性抗原检测均呈阳性，则所述待测的离体T细胞为结核分枝杆...

【专利技术属性】
技术研发人员：赖小敏，李有生，
申请(专利权)人：广州瑞辉生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44