一种B族链球菌鉴别培养基制造技术

一种B族链球菌鉴别培养基，每100ML水中包括以下质量的成分：月示蛋白胨3g，KH2PO40.2g，Na2HPO40.4g，粗制米粉4g，琼脂1.3g，抗生素0.2g，脑-心浸萃液态培养基0.2g，马血清2g。本发明专利技术的培养基可以利用采样的待检拭子直接进行划线检测，相对现有技术需对纯种菌株进行鉴定，本发明专利技术的培养基提高了B群链球菌的检测正确率和检测效率，且本发明专利技术使用方法操作简单，不需要特殊的仪器设备。适合在医院，尤其是基层医疗机构应用，方便了样品的采样工作，同时保证了B群链球菌的检出效果。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种微生物培养基，尤其涉及一种B族链球菌选择性培养基。
技术介绍
B族链球菌(GBS)，又称B群链球菌或无乳链球菌，属于革兰氏阳性菌，是栖息在人体胃肠道和下生殖道的正常菌群，从20世纪70年代以来，GBS逐渐成为新生儿严重感染性疾病的重要致病菌之一，已经引起全世界的广泛关注。GBS感染是引起围产期胎儿宫内感染、新生儿肺炎、败血症、脑膜炎等严重感染的主要原因。可引发早产，胎儿发育迟缓(低出生体重儿)、胎膜早破及晚期流产等严重后果，在围产期医学中占重要地位。目前，在对孕产妇是否携带GBS进行筛查的时候主要有两种方法，第一种是使用检测试剂盒进行快速诊断。但是通过检测试剂盒进行快速诊断对操作的要求和成本均比较高，限制了检测试剂盒的推广应用。第二种，也就是目前最常见的方法，是利用培养基对取得的样品进行培养，然后通过直接观察法、革兰氏染色法、触酶试验、协同溶血(CAMP)试验等判断是否感染GBS。但是孕妇生殖道和直肠有多种细菌存在，而目前的培养基不能有效抑制GBS以外的其他菌的生长，这些细菌生长速度快，常使GBS菌生长受到抑制，造成GBS菌漏检。为此，临床检测中使用现有的B族链球菌鉴别培养基进行B族链球菌鉴定时，需要先对取样的菌株纯化增殖培养，然后才能进行鉴定，这样程序繁琐，且浪费时间和人力。目前临床使用的梅里埃公司的B族链球菌筛查培养基，其主要采用的是底物显色的方法，成本较高，价格贵。
技术实现思路
为了克服现有技术存在的问题，本专利技术提供了一种能够快速鉴定B族链球菌的培养基。本专利技术所采用的技术方案为：一种B族链球菌鉴别培养基，每100ML水中包括以下质量的成分：月示蛋白胨3g，KH2PO40.2g，Na2HPO40.4g，粗制米粉4g，琼脂1.3g，抗生素0.2g，脑-心浸萃液态培养基0.2g，马血清2g。进一步地，所述抗生素包括庆大霉素、萘啶酮酸和两性霉素B。进一步地，所述抗生素在培养基中的的含量分别为：庆大霉素：8×10-4g/ml，萘啶酮酸：10×10-4g/ml，两性霉素B：2×10-4g/ml。进一步地，所述粗制米粉为将糙米粉碎后制成。进一步地，所述培养基的制备方法包括以下步骤：(1)将配方量的粗制米粉、月示蛋白胨、KH2PO4、Na2HPO4、琼脂和脑-心浸萃液态培养基溶于100mL单蒸水，用10mol/L氢氧化钠矫正PH到7.2±0.2；(2)高温高压灭菌、待冷却到60℃左右时移入生物安全柜中；(3)加入抗生素和马血清摇匀，然后将上述液体培养基倾入无菌平皿内，凝固后包装，于4℃保存。本专利技术的有益效果为：本专利技术的B族链球菌鉴别培养基使用粗制米粉而非市售深加工米粉。研究发现，粗制米粉才能使B族链球菌显色。本专利技术的培养基可以利用采样的待检拭子直接进行划线检测，相对现有技术需对纯种菌株进行鉴定，本专利技术的培养基提高了B群链球菌的检测正确率和检测效率，且本专利技术使用方法操作简单，不需要特殊的仪器设备。适合在医院，尤其是基层医疗机构应用，方便了样品的采样工作，同时保证了B群链球菌的检出效果。为了更好地理解和实施，下面详细说明本专利技术。具体实施方式【实施例1】B族链球菌鉴别培养基的配制本实施例中的B族链球菌鉴别培养基，每100ML水中包括以下质量的成分：月示蛋白胨3g，KH2PO40.2g，Na2HPO40.4g，粗制米粉4g，琼脂1.3g，抗生素0.2g，脑-心浸萃液态培养基0.2g，马血清2g。其配制方法为：在锥形瓶中将配方量的粗制米粉、月示蛋白胨、KH2PO4、Na2HPO4、琼脂和脑-心浸萃液态培养基溶于100mL单蒸水，用10mol/L氢氧化钠矫正PH到7.2±0.2；。包扎好放121℃高压锅灭菌20min，待冷却到60℃左右时将锥形瓶移入生物安全柜中。加入抗生素和马血清摇匀，然后将上述液体培养基倾入内径9cm的无菌平皿内，培养基高度约为0.5cm。待凝固后包装，于4℃保存。【实施例2】B族链球菌鉴别培养基的应用试验步骤:待检拭子采用分区划线法接种该培养基。第一区直接用拭子进行划线，第二、三、四区用接种环进行划线；37℃培养18h～24h观察结果。结果判定:典型B族链球菌为橙色菌落，检测时平板上有典型菌落即可报告检出B族链球菌。B族链球菌快速鉴定培养基结果判定表【实施例3】B族链球菌鉴别培养基对其他菌类的抑制作用在本专利技术的培养基平板上接种各种类的细菌和真菌，观察其生长情况如下菌种名称生长情况菌种名称生长情况金黄色葡萄球菌-伤寒沙门菌-甲型链球菌-痢疾杆菌D15-丙型链球菌+大肠埃希菌-绿脓杆菌-轻型白喉杆菌-产气肠杆菌-表皮葡萄球菌-变形杆菌-乙型副伤寒沙门菌-肺炎链球菌-白色念珠菌-菌种未生长用(-)表示；菌种有生长用(+)表示其中，丙型链球菌生长，菌落显白色，不影响观察结果。【实施例4】临床试验于南华大学附属第一医院随机选择19-65岁女性183例，用普通棉拭子采集生殖道的分泌物标本，分别使用本专利技术的B族链球菌鉴别培养基和梅里埃(上海)生物制品有限公司生产的B族链球菌筛查培养基进行检测，对于结果不同组，再使用第三方试剂进行检测。检测结果，本专利技术检出率19.13％(35/183)，对比试剂检测率为21.88％(40/183)的B族链球菌鉴别培养基检出率92％，假阳性率0％。本专利技术并不局限于上述实施方式，如果对本专利技术的各种改动或变形不脱离本专利技术的精神和范围，倘若这些改动和变形属于本专利技术的权利要求和等同技术范围之内，则本专利技术也意图包含这些改动和变形。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种B族链球菌鉴别培养基，其特征在于，每100ML水中包括以下质量的成分：月示蛋白胨3g，KH2PO4 0.2g，Na2HPO4 0.4g，粗制米粉4g，琼脂1.3g，抗生素0.2g，脑‑心浸萃液态培养基0.2g，马血清2g。

【技术特征摘要】
1.一种B族链球菌鉴别培养基，其特征在于，每100ML水中包括以下质量的成分：月示蛋白
胨3g，KH2PO40.2g，Na2HPO40.4g，粗制米粉4g，琼脂1.3g，抗生素0.2g，脑-心浸
萃液态培养基0.2g，马血清2g。
2.根据权利要求1所述的B族链球菌鉴别培养基，其特征在于，所述抗生素包括庆大霉素、
萘啶酮酸和两性霉素B。
3.权利要求2所述的的B族链球菌鉴别培养基，其特征在于，所述抗生素在培养基中的的含
量分别为：庆大霉素：8×10-4g/ml，萘啶酮酸：10×10-4g/ml，两性霉素B：2×...

【专利技术属性】
技术研发人员：赖小敏，李有生，
申请(专利权)人：广州瑞辉生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44