酪蛋白水解肽的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种酪蛋白水解肽的制备方法，包括以下步骤：(1)将酪蛋白用水溶解配置成质量浓度为5‑15wt％的酪蛋白溶液，并调节pH至5‑10；(2)将酶和酶保活剂加入酪蛋白溶液中，在45‑75℃下水解1‑5小时；(3)在85‑100℃水浴下灭酶活5‑15分钟，得到酶解液；(4)调节酶解液的pH值至4‑5等电点沉淀，离心分离；(5)超滤、冻干。本发明专利技术酪蛋白水解肽的制备方法，水解度适中，寡肽含量高，游离氨基酸低，致敏性低，易于消化吸收。本发明专利技术所用的原料中无有害物质，不污染环境，而且本发明专利技术原料来源广泛，制备工艺简单，产品具有提高免疫力、美容养颜、促进细胞生长、抗衰老的作用。

【技术实现步骤摘要】
酪蛋白水解肽的制备方法
本专利技术涉及保健食品
，具体涉及一种酪蛋白水解肽的制备方法。
技术介绍
现代营养学研究发现，人类摄食蛋白质经消化道的酶作用后，大多是以小肽形式消化吸收，肽营养作用的另一新认识是蛋白质在酶解过程中可以产生一些具有特殊生理调节功能的生物活性肽。酪蛋白(casein)是一种富含生物活性序列的蛋白质，在特异性内切酶(如胰蛋白酶等)及类似生理条件下，这些生物活性序列能够被释放，得到具有生物活性的酪蛋白生物活性肽。这些生物活性肽在调节胃肠道运动、调节免疫系统、抗血压升高、抗菌、抗血栓、抗病毒、抗癌、清除自由基和促进矿物元素吸收等方面发挥着重要作用。目前生物活性肽的制备方法主要有三种：(1)提取法，即从自然界的生物体中提取其本身固有的天然活性肽；(2)水解法，即将蛋白质进行水解以获得具有生理功能的生物活性肽；(3)合成法，即应用化学合成的方法来制备生物活性肽。基于不同的目的选择不同的制备方法，不同的制备方法各具优缺点。蛋白质本身就是生物活性肽的前体，选择合适的蛋白酶水解这些多肽链，把具有生物活性的肽段释放出来，从而可制备出具有生理功能的生物活性肽。采用酶法生产活性肽是当前研究的热点。酶法水解具有许多物理、化学改性无可比拟的优点。首先它是一种不完全、不彻底的水解，其产物主要是肽而不是氨基酸；其次是反应的条件温和，反应时间短，效率高，不产生消旋作用，也不破坏氨基酸；再次是产品纯度高，产物易分离，成本低廉等优点；此外，利用蛋白酶来水解蛋白质时，还可以通过选择酶的种类，控制反应条件等措施来得到具有特定生理功能的生物活性肽。本专利技术提供了一种酪蛋白水解肽的制备方法，易于吸收，并且能有效降低酪蛋白中过敏原的含量。
技术实现思路
针对现有技术的不足，本专利技术所要解决的技术问题是提供一种酪蛋白水解肽的制备方法。为实现上述目的，本专利技术所采用的技术解决方案是：一种酪蛋白水解肽的制备方法，包括以下步骤：(1)将酪蛋白用水溶解配置成质量浓度为5-15wt％的酪蛋白溶液，并调节pH至5-10；(2)将酶和酶保活剂加入酪蛋白溶液中，在45-75℃下水解1-5小时；(3)在85-100℃水浴下灭酶活5-15分钟，得到酶解液；(4)调节酶解液的pH值至4-5等电点沉淀，离心分离；(5)超滤、冻干。所述的步骤(1)和步骤(4)中调节pH值可以采用NaOH溶液、HCl溶液等。优选地，所述步骤(2)中酶的加入量为酪蛋白溶液质量的0.5-5％，酶保活剂的加入量为酪蛋白溶液质量的0.1-1％。优选地，所述步骤(2)中的酶为木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、菠萝蛋白酶中一种或多种的混合物。更优选地，所述步骤(2)中的酶由木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、菠萝蛋白酶混合而成，所述木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、菠萝蛋白酶的质量比为(1-3)：(1-3)：(1-3)。优选地，所述步骤(2)中的酶保活剂为壳六糖、异麦芽酮糖醇、壳三糖中一种或多种的混合物。更优选地，所述步骤(2)中的酶保活剂由壳六糖、异麦芽酮糖醇、壳三糖混合而成，所述壳六糖、异麦芽酮糖醇、壳三糖的质量比为(1-3)：(1-3)：(1-3)。优选地，所述步骤(4)中的离心分离转速为2000-5000转/分，时间为20-40分钟。优选地，所述步骤(5)中的超滤为用截留分子量1-10kD的超滤膜超滤。本专利技术酪蛋白水解肽的制备方法，水解度适中，寡肽含量高，游离氨基酸低，致敏性低，易于消化吸收。本专利技术所用的原料中无有害物质，不污染环境，而且本专利技术原料来源广泛，制备工艺简单，产品具有提高免疫力、美容养颜、促进细胞生长、抗衰老的作用。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术做进一步的说明，以下所述，仅是对本专利技术的较佳实施例而已，并非对本专利技术做其他形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的
技术实现思路
加以变更为同等变化的等效实施例。凡是未脱离本专利技术方案内容，依据本专利技术的技术实质对以下实施例所做的任何简单修改或等同变化，均落在本专利技术的保护范围内。实施例中各原料介绍：壳六糖，CAS号：41708-95-6。异麦芽酮糖醇，CAS号：64519-82-0。壳三糖，CAS号：41708-93-4。木瓜蛋白酶，CAS号：9001-73-4，郑州康源化工产品有限公司提供，酶活200U/mg。胰蛋白酶，CAS号：9002-07-7，郑州好兄弟化工产品有限公司提供，酶活200U/mg。菠萝蛋白酶，CAS号：9001-00-7，山东圣协生物科技有限公司提供，酶活200U/mg。实施例1酪蛋白水解肽的制备方法，包括以下步骤：(1)将酪蛋白用去离子水溶解配置成质量浓度为10wt％的酪蛋白溶液(即每100克去离子水溶解10克酪蛋白)，并用2mol/L的氢氧化钠溶液调节pH至7.8；(2)将酶和酶保活剂加入酪蛋白溶液中搅拌混合均匀，其中酶的加入量为酪蛋白溶液质量的1.2％，酶保活剂的加入量为酪蛋白溶液质量的0.6％(即每100克酪蛋白溶液加入酶1.2克、酶保活剂0.6克)，在60℃下水解2小时，得到水解后产物；(3)然后将水解后产物置于95℃水浴下10分钟灭酶活，得到酶解液；(4)用2mol/L的盐酸溶液调节酶解液的pH值至4.6酪蛋白等电点，待沉淀析出后，以3000r/min速度离心30min除去未水解的酪蛋白，得到离心后的上清液；(5)取离心后的上清液用截留分子量6kD的超滤膜超滤，收集滤液，在-30℃下冻干，得到实施例1制备的酪蛋白水解肽。所述步骤(2)中的酶由木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、菠萝蛋白酶按质量比为1：1：1搅拌混合均匀得到。所述步骤(2)中的酶保活剂由壳六糖、异麦芽酮糖醇、壳三糖按质量比为1：1：1搅拌混合均匀得到。实施例2与实施例1基本相同，区别仅仅在于：所述的酶由木瓜蛋白酶、胰蛋白酶按质量比为1：1搅拌混合均匀得到。即可制得实施例2的酪蛋白水解肽。实施例3与实施例1基本相同，区别仅仅在于：所述的酶由木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶按质量比为1：1搅拌混合均匀得到。即可制得实施例3的酪蛋白水解肽。实施例4与实施例1基本相同，区别仅仅在于：所述的酶由胰蛋白酶、菠萝蛋白酶按质量比为1：1搅拌混合均匀得到。即可制得实施例4的酪蛋白水解肽。实施例5与实施例1基本相同，区别仅仅在于：所述的酶保活剂由壳六糖、异麦芽酮糖醇按质量比为1：1搅拌混合均匀得到。即可制得实施例5的酪蛋白水解肽。实施例6与实施例1基本相同，区别仅仅在于：所述的酶保活剂由壳六糖、壳三糖按质量比为1：1搅拌混合均匀得到。即可制得实施例6的酪蛋白水解肽。实施例7与实施例1基本相同，区别仅仅在于：所述的酶保活剂由异麦芽酮糖醇、壳三糖按质量比为1：1搅拌混合均匀得到。即可制得实施例7的酪蛋白水解肽。测试例1对实施例1-7步骤(3)得到的酶解液测试其水解度，具体结果见表1：表1：酪蛋白水解度测试表水解度/％实施例117.60实施例28.30实施例38.76实施例49.89实施例58.18实施例67.65实施例78.12比较实施例1与实施例2-4，实施例1(木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、菠萝蛋白酶)水解度明显高于实施例2-4(木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、菠萝蛋白酶中任意两种复配)。比较实施例1与实施例5-7，实施例1(壳六糖、异麦芽酮糖醇、壳三糖)水解度明显高于实施例2-4(壳六糖、异麦芽酮糖醇、壳三糖本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种酪蛋白水解肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将酪蛋白用水溶解配置成质量浓度为5‑15wt％的酪蛋白溶液，并调节pH至5‑10；(2)将酶和酶保活剂加入酪蛋白溶液中，在45‑75℃下水解1‑5小时；(3)在85‑100℃水浴下灭酶活5‑15分钟，得到酶解液；(4)调节酶解液的pH值至4‑5等电点沉淀，离心分离；(5)超滤、冻干。

【技术特征摘要】
1.一种酪蛋白水解肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将酪蛋白用水溶解配置成质量浓度为5-15wt％的酪蛋白溶液，并调节pH至5-10；(2)将酶和酶保活剂加入酪蛋白溶液中，在45-75℃下水解1-5小时；所述的酶保活剂由壳六糖、异麦芽酮糖醇、壳三糖混合而成，所述壳六糖、异麦芽酮糖醇、壳三糖的质量比为1-3：1-3：1-3；(3)在85-100℃水浴下灭酶活5-15分钟，得到酶解液；(4)调节酶解液的pH值至4-5等电点沉淀，离心分离；(5)超滤、冻干；所述的酶由木瓜蛋白酶、胰蛋...

【专利技术属性】
技术研发人员：张露引，
申请(专利权)人：上海艾苛密进出口有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31