一种蝇蛆多肽的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种蝇蛆多肽的制备方法，该方法包括以下步骤：将蝇蛆研磨成浆，加入适量的水稀释，在80～120℃的条件下加热10min～20min，过滤，降至4℃离心，取上清液，采用透析袋透析，除去分子量为3000Da以下的杂质，得到蝇蛆多肽。本发明专利技术所述方法得到的蝇蛆多肽在80～100℃的高温条件下仍具有较强的抗氧化性，适用作为耐高温抗氧化剂。

【技术实现步骤摘要】
专利
本专利技术涉及来自动物的多肽，具体涉及蝇蛆多肽。
技术介绍
自由基O2-具有生物毒性，可使脂类过氧化，损伤细胞膜，引起多种疾病，促使机体衰老，提前更年期的发生。日常的饮食不健康、日晒、压力、环境污染都能让生物体内的自由基泛滥。机体的抗氧化能力越强，就证明机体生命力越强，寿命越长抗氧化就是任何以低浓度存在就能有效抑制自由基的氧化反应的物质，其作用机理可以是直接作用在自由基，或是间接消耗掉容易生成自由基的物质，防止发生进一步反应。随着人们生活节奏的加快，在日常生活中对于抗氧化剂的要求越来越高，很多工业生产由于找不到适当的耐高温的强抗氧化剂而成本剧增，而我国内外还未曾出现一种具有优质的高温抗性的生物抗氧化剂。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种蝇蛆多肽的制备方法，该方法所得到的蝇蛆多肽具有抗氧化性强的优点。本专利技术解决上述问题的技术方案是：一种蝇蛆多肽的制备方法，该方法包括以下步骤：将蝇蛆研磨成浆，加入适量的水稀释，在80～120℃的条件下加热10min～20min，过滤，降至4℃离心，取上清液，采用透析袋透析，除去分子量为3000Da以下的杂质，得到蝇蛆多肽。上述方案中所述的离心步骤的条件是：转速为12000rpm，离心时间为5～25min。上述方法所述得到的蝇蛆多肽的分子量为20000Da，该多肽在80～100℃的高温条件下仍具有较强的抗氧化性，适用作为耐高温抗氧化剂。<br>本专利技术较现有技术具有以下优点：1、利用蝇蛆不同蛋白对温度的耐受能力，采用80～120℃的温度条件将非目标蛋白致死沉淀，进而提取工艺变得十分简单。2、所得到的蝇蛆多肽可耐80～100℃的高温，可用于生物、医药等领域，市场前景广阔。附图说明图1为提取温度与所得到的蝇蛆多肽抗氧化性的关系曲线。图2为提取加热时间与所得到的蝇蛆多肽抗氧化性的关系曲线。图3为不同提取温度下所得到的蝇蛆多肽的PAGE-SDS凝胶电泳结果图；图中，1～5栏为样品1的电泳效果，6～10栏分别为样品2～6的电泳效果图4为不同提取加热时间所得到的蝇蛆多肽的PAGE－SDS凝胶电泳结果图；图中，1、2栏为样品1的电泳效果，3～6栏为样品2～5的电泳效果，7栏为marker蛋白的电泳效果具体实施方式实施例1将蝇蛆研磨成浆，取浆液50g加入50g蒸馏水稀释，在80℃的条件下加热20min，过滤，降至4℃以12000rpm离心20min，取上清液，采用3000Da透析袋透析除去杂质，得到蝇蛆多肽；将得到蝇蛆多肽冷冻干燥，于－20℃下保存备用。实施例2将蝇蛆研磨成浆，取浆液50g加入50g蒸馏水稀释，在90℃的条件下加热15min，过滤，降至4℃以12000rpm离心20min，取上清液，采用3000Da透析袋透析除去杂质，得到蝇蛆多肽；将得到蝇蛆多肽冷冻干燥，于－20℃下保存备用。实施例3将蝇蛆研磨成浆，取浆液50g加入50g蒸馏水稀释，在100℃的条件下加热10min，过滤，降至4℃以12000rpm离心20min，取上清液，采用3000Da透析袋透析除去杂质，得到蝇蛆多肽；将得到蝇蛆多肽冷冻干燥，于－20℃下保存备用。实施例4(不同温度对蝇蛆多肽纯度的影响及其分子量的测定)4.1试剂的配置：4.1.1.样品缓冲液称取三羟甲基氨基甲烷0.303g、溴酚蓝2mg、十二烷基硫酸钠0.8g，量取盐酸0.189ml、甘油4ml，β-巯基乙醇2ml，混合后加水溶解并稀释至10ml。4.1.2.30％Acr-Bis称取30g丙烯酰胺，0.8g甲叉双丙烯酰胺，加纯水溶解至100ml，待其完全溶解后用滤纸过滤，避光保存。置棕色瓶中，可在4℃存放数月。4.1.3.pH8.8Tris-HCl称取三羟甲基氨基甲烷18.15g，加适量水溶解，用盐酸调pH值至8.8，加水稀释至100ml。4.1.4.pH6.7浓缩胶缓冲液称取三羟甲基氨基甲烷6.05g，加适量水溶解，用盐酸调pH值至6.8，加水稀释至100ml。4.1.5.TEMED(四乙基乙二胺)原液4.1.6.10％AP称取100mg过硫酸铵，加水溶解至1ml。4.1.710g/LSDS称取1g十二烷基硫酸钠，加水溶解至100ml，室温保存。4.1.8.pH8.3Tris-甘氨酸电极缓冲液称取三羟甲基氨基甲烷3g、甘氨酸14.4g、十二烷基硫酸钠1g，加适量水溶解，用盐酸调pH值至8.3，加水稀释至1000ml。4.1.9.考马斯亮蓝R250染色液称取考马斯亮蓝R2501g，加入甲醇200ml、冰醋酸50ml、水250ml混匀。4.1.10.脱色液取甲醇400ml、冰醋酸100ml与水500ml混匀。4.2.实验操作4.2.1.样品制备按实施例1所述方法制备蝇蛆多肽，所不同的是将蝇蛆浆液加蒸馏水稀释后常温保存20min过滤；所得到的蝇蛆多肽0.1g，加入10mL蒸馏水稀作为供试样品1；按实施例1所述方法制备蝇蛆多肽，所不同的是将蝇蛆浆液加蒸馏水稀释后的加热温度分别为60℃、70℃、80℃、90℃和100℃；分别取加热温度为60℃、70℃、80℃、90℃和100℃条件下所得到的蝇蛆多肽0.1g，加入10mL蒸馏水稀，并依次作为供试样品2～6。将各多肽样品与样品缓冲液(10uL+10uL)在一个eppendorf管中混合。放入100℃加热10min，取上清点样。4.2.2.分离胶及浓缩胶的制备将玻璃板、样品梳、Spacer用洗涤剂洗净，用ddH2O冲洗数次，再用乙醇擦拭，晾干；将两块洗净的玻璃板之间加入Spacer，按照Bio-RadMiniⅡ/Ⅲ说明书提示装好玻璃板；按如下体积配制12％分离胶20.0ml，混匀：ddH2O3.3ml；1.5mol/LTris-HClpH＝8.82.5ml；30％Acr-Bis4.0ml；10％SDS200ul；10％AP100ul；TEMED10ul。向玻璃板间灌制分离胶，立即覆一层重蒸水，大约20min后胶即可聚合；按如下体积配制6％浓缩胶3.0ml，混匀：ddH2O5.3mL；1.5mol/LTris-HClpH＝6.82.5mL；30％Acr-Bis2.0mL；10％SDS200ul；10％AP100ul；TEMED10ul。将上层重蒸水倾去，滤纸吸干，灌制浓缩胶，插入样品梳；4.2.3.电泳及结果装好电泳系统，加入电极缓冲液本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种蝇蛆多肽的制备方法，该方法包括以下步骤：将蝇蛆研磨成浆，加入适量的水稀释，在80～120℃的条件下加热10min～20min，过滤，降至4℃离心，取上清液，采用透析袋透析，除去分子量为3000Da以下的杂质，得到蝇蛆多肽。

【技术特征摘要】
1.一种蝇蛆多肽的制备方法，该方法包括以下步骤：将蝇蛆研磨成浆，加入适量的水
稀释，在80～120℃的条件下加热10min～20min，过滤，降至4℃离心，取上清液，采用透
析袋透析，...

【专利技术属性】
技术研发人员：张晟，黄绮薇，王土连，柯徳森，
申请(专利权)人：张晟，
类型：发明
国别省市：广东;44