人胎盘间充质干细胞的分离方法技术

本发明专利技术公开了人胎盘间充质干细胞的分离方法，包括以下步骤：胎盘标本处理，得处理后的胎盘组织，将胎盘组织进行组织消化，得细胞悬液；胎盘间充质干细胞的初步传代培养；胎盘间充质干细胞的进一步分离与培养。本发明专利技术采用HyQTase和DNAse I共同消化，分离到胎盘间充质干细胞，初步培养后，再经微重力及电磁场和声波处理，以及BMP4多次处理，用差速贴壁法除掉上层，向培养瓶中补加无血清培养基和抗氧化剂培养，最终纯度很高；通过对其连续传代过程中的遗传稳定性、细胞表面分子表达情况、细胞形态检测等验证了该细胞的干细胞特性，为胎盘间充质干细胞作为临床应用的种子细胞等提供了材料。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物医学
，具体是涉及。
技术介绍
胎盘间充质干细胞具有采集方便、易于体外培养、扩增和诱导等特性，被认为是干细胞研究的一种理想种子细胞。常规分离方法通常难以获得大量纯度较高胎盘间充质干细胞；应用流式细胞仪分选法或磁珠分选法获得的细胞虽然纯度好，但成本很高。胎盘间充质干细胞在胎盘组织的丰度低，想获得一定数量的原代细胞也需要很多的胎盘组织。现有技术中，胎盘的细胞成分较复杂，尤其是其中的胎盘间充质干细胞具有多向分化潜能以及抑制淋巴细胞增殖的特性，常规离方法通常难以获得大量且纯度较高的胎盘间充质干细胞。
技术实现思路
本专利技术解决的技术问题是针对现有技术存在的缺陷，提供一种，可以达到一次操作即可获得大量、较高纯度的人胎盘间充质干细胞的目的。本专利技术解决上述技术问题的技术方案为:，其特征在于包括以下步骤:(I)胎盘标本处理，得处理后的胎盘组织；将胎盘组织进行组织消化，用15mmol/L三羟甲基氨基甲烷，加入哈特曼-D溶液，调节pH至8.0，作为消化缓冲液，加入终浓度为2.4g/L HyQTase和300U/mL DNase I组成的消化液，取消化液200mL，本文档来自技高网...

【技术保护点】
人胎盘间充质干细胞的分离方法，其特征在于包括以下步骤：(1)胎盘标本处理，得处理后的胎盘组织；将胎盘组织进行组织消化，用15mmol/L三羟甲基氨基甲烷，加入哈特曼‑D溶液，调节pH至8.0，作为消化缓冲液，加入终浓度为2.4g/L HyQTase和300U/mL DNase I组成的消化液，取消化液200mL，将冲洗后的胎盘组织分多次进行消化，每次在37±0.2℃、200r/min恒温气浴摇床消化3min，消化完毕后，220目滤网过滤，收集单细胞，无菌去除HyQTase溶液，用新生牛血清终止消化反应，得到单细胞悬液；(2)胎盘间充质干细胞的初步传代培养：将步骤(1)的单细胞悬液调整单细胞密度...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：夏凡，
申请(专利权)人：夏凡，
类型：发明
国别省市：山东;37