一种含脐带血干细胞衍生液的脂质体混悬液及其制备方法和在化妆品中的应用技术

一种含脐带血干细胞衍生液的脂质体混悬液的制备方法，包括如下步骤：S1：通过剖腹产手术分娩的脐带血获取自体血浆，分离单个核细胞并冷冻备用；S2：将步骤S1制备的物质进行细胞裂解、去除细胞碎片制备脐带血干细胞衍生液；S3：对步骤S2制备的脐带血干细胞衍生液进行质量检测，选取无病毒的脐带血干细胞衍生液；S4：称取卵磷脂、胆固醇、S‑80乳化剂于梨形瓶内混匀后，加入乙醚制备成干膜；再加入吐温80、脐带血干细胞衍生液、磷酸盐缓冲液，制备得含脐带血干细胞衍生液的脂质体混悬液。其优点是：从脐带血中提取脐带血干细胞衍生液，再采用脂质体包裹技术，将脐带血干细胞内的活性因子封装于类脂双分子层内形成微型泡囊体，提高活性因子的稳定性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于护肤品
，具体地说是一种含脐带血干细胞衍生液的脂质体混悬液及其制备方法和在化妆品中的应用。
技术介绍
随着社会生活水平的不断提高，人们对自身美的追求也不断提高，尤其是日常生活护肤美容愈加重视；而市场上所出售的护肤品不具有生物活性，不能从根本上改善表皮细胞的生存环境和新陈代谢，对于外界因素造成的皮肤损害没有修复作用，尤其不适宜皮肤敏感或孕妇使用，再者，其中多含有乙醇、着色剂、铅汞等对人体皮肤有害的物质；脐带血是胎儿娩出、脐带结扎并离断后残留在胎盘和脐带中的血液，脐带血中含有大量的干细胞，干细胞是生命的种子，它会分化成人体的各种细胞——血液细胞，神经细胞，骨骼细胞等等；干细胞是具有自我更新、高度增殖和多项分化潜能的细胞群体，其通过分裂维持自身细胞的特性和数量，也可进一步分化为各种组织细胞，在组织修复等方面发挥积极作用；因此，如何将脐血干细胞应用至护肤品中，同时解决现有技术中，干细胞活性因子在加工、储存、运输过程中，易导致蛋白降解，因子失活的问题，是目前亟待解决的技术问题。
技术实现思路
本专利技术的目的是研制易于皮肤吸收、全面补充细胞营养，使处于休眠、损伤的成纤维干细胞被激活并修复成熟分化大量成纤维细胞，增加胶原分泌，改善皮肤弹性的一种含脐带血干细胞衍生液的脂质体混悬液及其制备方法和在化妆品中的应用；一种含脐带血干细胞衍生液的脂质体混悬液的制备方法，包括如下步骤：S1：通过剖腹产手术分娩的脐带血获取自体血浆，分离单个核细胞并冷冻备用；S2：将步骤S1制备的物质进行细胞裂解、去除细胞碎片制备脐带血干细胞衍生液；S3：对步骤S2制备的脐带血干细胞衍生液进行质量检测，选取无病毒的脐带血干细胞衍生液；S4：按照4:1：0.1～0.5的质量比称取卵磷脂、胆固醇、S-80乳化剂于梨形瓶内混匀后，加入乙醚制备成干膜；再加入吐温80、步骤S3制备的脐带血干细胞衍生液、磷酸盐缓冲液，制备得含脐带血干细胞衍生液的脂质体混悬液。一种通过上述制备方法制备的含脐带血干细胞衍生物的脂质体混悬液。一种上述含脐带血干细胞衍生物的脂质体混悬液在化妆品中的应用。本专利技术一种含脐带血干细胞衍生液的脂质体混悬液及其制备方法和在化妆品中的应用，其优点是：1、从脐带血中提取脐带血干细胞衍生液，再采用脂质体包裹技术，将脐带血干细胞内的活性因子封装于类脂双分子层内形成微型泡囊体，提高活性因子的稳定性；2、由于脐带血干细胞分泌的各种生长因子能渗透到胶原纤维变形断裂的地方，并作用于真皮层的成纤维干细胞，以补充细胞营养，因此，将脐带血干细胞衍生液应用到化妆品当中，可使得处于休眠、损伤的成纤维干细胞被激活、修复并成熟分化大量的成纤维细胞，增加胶原分泌，改善皮肤弹性；3、将脐带血干细胞衍生液制备为脂质体的形式，再应用至化妆品中，便于存储、运输，同时，可增加皮肤纤维原细胞制造的胶原蛋白与纤维原细胞的体积。附图说明图1为脐带血干细胞衍生液的SDS-PAGE蛋白胶电泳图；图中M为未添加脐带血干细胞衍生液的样品，1为脐带血干细胞衍生液；2为含二分之一脐带血干细胞衍生液样品，3为含四分之一脐带血干细胞衍生液样品，图2为不同浓度脐带血细胞衍生液对皮肤生纤维细胞增殖的影响；图3为脐带血细胞衍生液对紫外光损的皮肤成纤维细胞修复的影响且图2、图3中a、b、c、d、e、分别表示如下含义：a、空白对照组，b、培养基阴性对照组，c、1％浓度脐带血细胞衍生液活性成分组，d、3％浓度脐带血细胞衍生液活性成分组，e、10％浓度脐带血细胞衍生液活性成分组；图2中横坐标上的数字表示天数；图4为紫外光损的皮肤成纤维细胞加入各浓度脐带血细胞衍生液24h照片；图5为脐带血细胞衍生液活性成分的透皮吸收能力测定，其中，f为未加入天然促渗剂冰片的脐带血细胞衍生液的上清蛋白浓度；g为加入1‰浓度天然促渗剂冰片的脐带血细胞衍生液的上清蛋白浓度。具体实施方式一种含脐带血干细胞衍生液的脂质体混悬液的制备方法，包括如下步骤：S1：通过剖腹产手术分娩的脐带血获取自体血浆，分离单个核细胞并冷冻备用；优选地，步骤S1中，包括如下步骤：S11：取脐带血于离心管内，离心、灭活补体、水浴，再离心去除纤维蛋白，转移上清液至另一无菌离心管，即获得自体血浆，--20°C保存备用；进一步地，步骤S11中，在2400～2600rpm的转速下离心8～13min后，在53～70℃条件下灭活补体27～35min，再水浴10～20min；进一步地，通过2400～2600rpm的转速离心去除纤维蛋白。S12：加入PBS稀释步骤S13制备的自体血浆；再取稀释后的自体血浆至含聚蔗糖的离心管内1500～2120rpm离心28～35min，离心后吸取白膜层至装有PBS的离心管中，再离心两次以去除血小板，沉淀、重悬，获得单个核细胞血浆重悬液，冷冻备用；优选地，步骤S12中，离心两次具体为：2110rpm*15min第一次洗涤离心，1500rpm*10min第二次洗涤离心；优选地，步骤S12中，冷冻温度为－80℃；S2：将步骤S1制备的物质进行细胞裂解、去除细胞碎片制备脐带血干细胞衍生液；优选地，步骤S2中，包括如下步骤：S21：将步骤S1制备的物质置入37℃水浴锅中充分融化、-80℃环境下冷冻至少1h，重复3～5次，使样品中的细胞完全裂解，释放出细胞内的各种活性物质；S22：将步骤S21经裂解、冻融后的物质离心去除细胞碎片，取上清液过0.22μm滤膜除菌后冷冻备用，获得脐带血干细胞衍生液。优选地，步骤S22中在2400～2600rpm的转速下离心8～13min；优选为2500rpm*10min。优选地，冷冻温度为-80℃。S3：对步骤S2制备的脐带血干细胞衍生液进行质量检测，选取无病毒的脐带血干细胞衍生液；优选地，步骤S3中，所述的质量检测为无菌检测、总蛋白检测等；优选地，步骤S31中，无菌检测为：用无菌水稀释5倍脐带血干细胞衍生液，再将稀释后的脐带血干细胞衍生液涂步无抗性的LB平板和血液琼脂平板，48h后观察结果；S4：按照4:1：0.1～0.5的质量比称取卵磷脂、胆固醇、S-80乳化剂于梨形瓶内混匀后，加入乙醚制备成干膜；再加入吐温80、步骤S3制备的脐带血干细胞衍生液、磷酸盐缓冲液，制备得含脐带血干细胞衍生液的脂质体混悬液。优选地，步骤S4中，加入的吐温80的量与所添加的S-80乳化剂的质量比为1：1～2；优选地，步骤S4中加入的脐带血干细胞衍生液的量为0.1～1ml；优选地，步骤S4中加入的磷酸盐缓冲液的量为2～10ml；优选地，步骤S4中，干膜的制备具体为，加入乙醚后振摇，于旋转蒸发仪上30℃蒸干成膜；优选地，步骤S4中，加入磷酸盐缓冲液后，旋转10～20min，使膜溶解，再超声15～30min使溶液透明，加入PBS至10.00ml后，置入-20℃环境下12h以上后取出，使其自然融化后再超声5～10min，即获得含脐带血干细胞衍生液的脂质体混悬液；进一步地，加入PBS的pH为6.5。以下就实施例对上述方法作进一步说明：实施例一：一种含脐带血干细胞衍生液的脂质体混悬液的制备方法，包括如下步骤：S1：采集剖腹产手术分娩的脐带血(每份约100～200ml)；每管30ml平均分装到1支50ml离心管中离心2500rpm*10min，快本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种含脐带血干细胞衍生液的脂质体混悬液的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：S1：通过剖腹产手术分娩的脐带血获取自体血浆，分离单个核细胞并冷冻备用；S2：将步骤S1制备的物质进行细胞裂解、去除细胞碎片制备脐带血干细胞衍生液；S3：对步骤S2制备的脐带血干细胞衍生液进行质量检测，选取无病毒的脐带血干细胞衍生液；S4：按照4:1：0.1～0.5的质量比称取卵磷脂、胆固醇、S‑80乳化剂于梨形瓶内混匀后，加入乙醚制备成干膜；再加入吐温80、步骤S3制备的脐带血干细胞衍生液、磷酸盐缓冲液，制备得含脐带血干细胞衍生液的脂质体混悬液。

【技术特征摘要】
1.一种含脐带血干细胞衍生液的脂质体混悬液的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：S1：通过剖腹产手术分娩的脐带血获取自体血浆，分离单个核细胞并冷冻备用；S2：将步骤S1制备的物质进行细胞裂解、去除细胞碎片制备脐带血干细胞衍生液；S3：对步骤S2制备的脐带血干细胞衍生液进行质量检测，选取无病毒的脐带血干细胞衍生液；S4：按照4:1：0.1～0.5的质量比称取卵磷脂、胆固醇、S-80乳化剂于梨形瓶内混匀后，加入乙醚制备成干膜；再加入吐温80、步骤S3制备的脐带血干细胞衍生液、磷酸盐缓冲液，制备得含脐带血干细胞衍生液的脂质体混悬液。2.根据权利要求1所述一种含脐带血干细胞衍生液的脂质体混悬液的制备方法，其特征在于：步骤S1中，包括如下步骤：S11：取脐带血于离心管内，离心、灭活补体、水浴，再离心去除纤维蛋白，转移上清液至另一无菌离心管，即获得自体血浆，--20℃保存备用；S12：加入PBS稀释步骤S13制备的自体血浆；再取稀释后的自体血浆至含聚蔗糖的离心管内1500～2120rpm离心28～35min，离心后吸取白膜层至装有PBS的离心管中，再离心两次以去除血小板，沉淀、重悬，获得单个核细胞血浆重悬液，冷冻备用。3.根据权利要求2所述一种含脐带血干细胞衍生液的脂质体混悬液的制备方法，其特征在于：步骤S11中，在2400～2600rpm的转速下离心8～13min后，在53～70℃条件下灭活补体27～35min，再水浴10～20min。4.根据权利要求2所述一种含脐带血干细胞衍生液的脂质体混悬液的制备方法，其特征在于：步骤S...

【专利技术属性】
技术研发人员：姚惟琦，武栋成，袁冰，
申请(专利权)人：武汉汉密顿生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42