本发明专利技术提供了一组评价人脐带间充质干细胞制剂生物学特性的方法，该方法包括诱导分化、免疫调控和抗炎作用三个方面。通过对人脐带间充质干细胞进行三系分化鉴定、免疫调控能力和抗炎作用实验，综合评价人脐带间充质干细胞制剂的生物学特性，为其临床应用及疗效评价提供依据。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于细胞生物学，具体涉及评价人脐带间充质干细胞制剂生物学特性的方法。
技术介绍
1、人脐带间充质干细胞（umbilical mesenchymal stem cells, uc-mscs）是一类具有自我更新能力和多向分化潜能的成体干细胞，是目前临床应用研究较多的一类干细胞。人脐带间充质干细胞通过多向分化与旁分泌作用发挥组织再生与损伤保护作用，而间充质干细胞独特的免疫调节功能也是其临床应用的基础之一。人脐带间充质干细胞相比其他来源的间充质干细胞具有诸多优势，如免疫原性更低、扩增速率更快、分化潜能更强等；尤其是人脐带间充质干细胞取材容易，无道德伦理争议，能够大量产业化扩增存储而被广泛关注。近年来，人脐带间充质干细胞在移植物抗宿主病、系统性红斑狼疮、糖尿病及其并发症等自身免疫相关性疾病的治疗中的应用引起了人们的广泛关注。然而，用人脐带间充质干细胞治疗自身免疫相关性疾病时，存在着个体差异和治疗效果不稳定的问题，所以需要一种评价人脐带间充质干细胞制剂生物学有效性的方法，在临床应用前对干细胞进行筛选。
2、目前，国际细胞治疗协会（isct）规定间充质干细胞需满足3点要求：①在标准培养条件下黏附于塑料制品生长；②体外能分化为成骨细胞、脂肪细胞及软骨细胞；③表达cd105、cd73及cd90，不表达cd45、cd34、cd14（或cd11b）、cd19和hla-dr。这些条件是目前国内外公认的鉴定间充质干细胞的标准。但该方法无法有效评价间充质干细胞的生物学特性，也就无法评估人脐带间充质干细胞制剂的可能临床疗效。
>3、因此，迫切需要一种能够有效评价人脐带间充质干细胞制剂生物学特性的方法，来研究人脐带间充质干细胞制剂在临床上运用的生物学有效性。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一组评价人脐带间充质干细胞制剂生物学特性的检测方法。人脐带间充质干细胞（uc-mscs）是一种多能干细胞，具有强大的增殖能力和免疫调节功能，可以分化成骨细胞、脂肪细胞和软骨细胞等多种细胞类型。uc-mscs可以从健康足月分娩的新生儿脐带中分离得到，具有取材方便、无损伤、无污染、无免疫排斥等优点，因此被广泛应用于组织工程、细胞治疗和基因治疗等领域。然而，目前还缺乏一种快速有效的方法来评价uc-mscs制剂的生物学特性，从而预测其在临床应用中的治疗效果。
2、本专利技术采用自主分离技术分离uc-mscs，在满足国际细胞治疗协会（isct）规定的三个条件标准下，设计了一组基于体外直接接触共培养的检测方法。该方法通过流式细胞仪检测uc-mscs对人外周血单个核细胞（pbmcs）增殖的抑制率，以及elisa检测共培养体系中淋巴细胞分泌的炎症因子水平，从而评价uc-mscs制剂的免疫调节水平。该方法具有操作简便、结果直观、灵敏度高等特点，可以作为筛选uc-mscs制剂生物学有效性的一种有效手段，为其临床应用提供参考依据。
3、为了实现本专利技术的目的，采用以下技术方案：第一方面，本专利技术提供了一种评价人脐带间充质干细胞制剂生物学有效性的检测方法，其特征在于包括以下步骤：按照isct规定的三个条件标准分离和鉴定uc-mscs，即：①贴壁生长；②表达cd73、cd90和cd105等表面标志物，不表达cd34、cd45、hla-dr等表面标志物；③具有向成骨、脂肪和软骨方向分化的潜能；uc-mscs进行细菌，真菌，支原体检测；取志愿者外周血，提取pbmcs；建立促进pbmcs增殖的方法；将扩增培养的p5代uc-mscs与pha刺激后的pbmcs按照不同比例混合，并在37℃、5%co2条件下共培养48小时；检测共培养体系中淋巴细胞分泌的炎症因子水平。
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【技术保护点】
1.一种综合评价人脐带间充质干细胞制剂生物学特性的方法。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：鉴定干细胞的分化潜能、对免疫细胞的调节能力、分泌特定细胞因子，判断人脐带间充质干细胞制剂的生物学特性。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：本专利技术提供了一组综合评价人脐带间充质干细胞制剂生物学特性的检测方法，该方法基于UC-MSCs和PBMCs的体外直接接触共培养，能够直观地反映UC-MSCs对免疫细胞增殖和炎症因子分泌的调节作用，从而评价UC-MSCs制剂的免疫调节水平。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：本专利技术采用流式细胞仪检测UC-MSCs对PBMCs增殖的抑制率，该方法具有操作简便、结果客观、灵敏度高等特点，可以快速准确地测定UC-MSCs制剂的免疫抑制能力。
5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：本专利技术采用ELISA检测共培养体系中淋巴细胞分泌的炎症因子水平，该方法具有特异性强、灵敏度高、重复性好等特点，可以全面地评价UC-MSCs制剂对免疫细胞功能的影响。
6.根据权利要求2-3所述的应用，其特征在于：UC-MSCs和PBMCs的体外直接接触共培养72小时。
7.根据权利要求4所述的用于评价人脐带间充质干细胞制剂，其特征在于：所述人脐带间充质干细胞制剂能够降低促炎因子TNF-α的表达水平，表现出较好的抗炎作用。
8.根据权利要求2-6所述的用于评价人脐带间充质干细胞制剂，其特征在于：所述的干细胞制剂为第5代的人脐带间充质干细胞制剂。
9.根据权利要求2-8所述的用于评价人脐带间充质干细胞制剂，其特征在于：提供了一种筛选UC-MSCs制剂生物学有效性的有效手段，为其临床应用提供参考依据，可以提高其在治疗各种免疫相关疾病中的效果。
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【技术特征摘要】
1.一种综合评价人脐带间充质干细胞制剂生物学特性的方法。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：鉴定干细胞的分化潜能、对免疫细胞的调节能力、分泌特定细胞因子，判断人脐带间充质干细胞制剂的生物学特性。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：本发明提供了一组综合评价人脐带间充质干细胞制剂生物学特性的检测方法，该方法基于uc-mscs和pbmcs的体外直接接触共培养，能够直观地反映uc-mscs对免疫细胞增殖和炎症因子分泌的调节作用，从而评价uc-mscs制剂的免疫调节水平。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：本发明采用流式细胞仪检测uc-mscs对pbmcs增殖的抑制率，该方法具有操作简便、结果客观、灵敏度高等特点，可以快速准确地测定uc-mscs制剂的免疫抑制能力。
5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：本发明采...
【专利技术属性】
技术研发人员：肖欢，向娥，胡芹，饶巍，
申请(专利权)人：武汉汉密顿生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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