测定癌症对表皮生长因子受体靶向性治疗反应性的方法技术

本发明专利技术涉及测定癌症对表皮生长因子受体靶向性治疗反应性的方法。本发明专利技术涉及癌症对表皮生长因子受体(EGFR)治疗的反应性的方法。在优选的实施方案中，在erbB1基因的激酶结构域中的至少一个变异的存在赋予对酪氨酸激酶抑制剂gefitinib的敏感性。因而，对于这些突变的诊断测定将允许向那些最有可能对药物起反应的患者施用gefitinib、erlotinib和其它酪氨酸激酶抑制剂。

【技术实现步骤摘要】
测定癌症对表皮生长因子受体靶向性治疗反应性的方法本申请是申请日为2005年3月31日，申请号为201210028631.5的、专利技术名称和本专利技术相同的专利技术专利申请的分案申请。对相关申请的交叉参考本申请在35U.S.C.119(e)之下要求递交于2004年3月31日的美国临时申请系列号：60/558,218，递交于2004年4月9日的美国临时申请系列号：60/561,095，递交于2004年4月27日的美国临时申请系列号：60/565,753，递交于2004年4月27日的美国临时申请系列号：60/565,985，递交于2004年5月25日的美国临时申请系列号：60/574,035，递交于2004年6月7日的美国临时申请系列号：60/577,916和递交于2004年7月29日的美国临时申请系列号：60/592,287的权益，在此将其内容全部并入作为参考。政府支持本专利技术由国立卫生研究院(NIH)奖助金号RO1CA092824，P50CA090578，PO195281，和1K12CA87723-01支持，美国政府具有其某些权益。
和
技术介绍
上皮细胞癌症，例如，前列腺癌、乳癌、结肠癌、肺癌、胰癌、卵巢癌、脾癌、睾丸癌、胸腺癌等，是特征为上皮细胞异常、加速生长的疾病。这种加速的生长最初引发肿瘤形成。最后，还能够发生向不同器官位点的转移。尽管已经在各种癌症的诊断和治疗上取得了一些进展，但这些疾病仍然导致显著的死亡率。肺癌是工业化国家中主要的癌症死亡原因。根据细胞在显微镜下如何显现，将在肺中开始的癌症分成两种主要类型，非小细胞肺癌和小细胞肺癌。非小细胞肺癌(鳞状细胞癌，腺癌，和大细胞癌)一般比小细胞肺癌更慢地传播到其它器官。大约75％的肺癌病例被分类为非小细胞肺癌(例如，腺癌)，而其它25％为小细胞肺癌。非小细胞肺癌(NSCLC)是在美国、日本和西欧癌症死亡的主要原因。对于患有进行性疾病的患者来说，化疗在存活上提供了最适度的益处，但代价是显著的毒性，这强调了对治疗剂的需要，所述治疗剂特异性靶向脂导肿瘤生长的关键遗传损伤(SchillerJH等，NEnglJMed，346：92-98，2002)。表皮生长因子受体(EGFR)是170千道尔顿(kDa)的膜结合蛋白，其表达于上皮细胞的表面上。EGFR是蛋白质酪氨酸激酶的生长因子受体家族的成员，所述激酶是一类细胞周期调控分子(W.J.Gullick等，1986，CancerRes.，46：285-292)。EGFR当它的配体(EGF或TGF-α)结合细胞外结构域时被激活，导致受体细胞内酪氨酸激酶结构域的自体磷酸化(S.Cohen等，1980，J.Biol.Chem.，255：4834-4842；A.B.Schreiber等，1983，J.Biol.Chem.，258：846-853)。EGFR是促进生长的癌基因，erbB或ErbB1的蛋白产物，但是该基因是一种家族的成员，即原癌基因的ERBB家族，其据信在许多人类癌症的发生和发展中发挥重要作用。特别地，已经在乳腺、膀胱、肺、头、颈和胃癌以及胶质母细胞瘤中观察到EGFR表达的提高。癌基因的ERBB家族编码四种，结构相关的跨膜受体，即，EGFR，HER-2/neu(erbB2)，HER-3(erbB3)和HER-4(erbB4)。临床上，已经报道肿瘤中的ERBB癌基因扩增和/或受体过表达与疾病复发和患者不良预后，以及与治疗中的反应性有关(L.Harris等，1999，Int.J.Biol.Markers，14：8-15；和J.Mendelsohn和J.Baselga，2000，Oncogene，19：6550-6565)。EGFR由三个主要结构域组成，即，细胞外结构域(ECD)，其被糖基化并且包含配体结合性穴和两个半胱氨酸富集区；一个短的跨膜结构域，和一个具有固有酪氨酸激酶活性的细胞内结构域。所述跨膜区将配体结合结构域连接到细胞内结构域上。氨基酸和DNA序列分析，以及EGFR的非糖基化形式的研究表明EGFR的蛋白质主链具有132kDa的质量，具有1186个氨基酸残基氨基酸残基(A.L.Ullrich等，1984，Nature，307：418-425；J.Downward等，1984，Nature，307：521-527；C.R.Carlin等，1986，Mol.Cell.Biol.，6：257-264；和F.L.V.Mayes和M.D.Waterfield，1984，TheEMBOJ.，3：531-537)。EGF或TGF-α与EGFR结合激活信号转导途径并导致细胞增殖。EGFR的二聚体化，构象变化以及内化作用作用来传递细胞同信号，导致细胞生长调控(G.Carpenter和S.Cohen，l979，Ann.Rev.Biochem.，48：193-216)。影响生长因子受体功能，或导致受体和/或配体过表达的遗传变化导致细胞增殖。此外，已经确定EGFR在细胞分化、细胞运动性增强，蛋白质分泌，新血管形成，入侵，转移和癌细胞对化疗剂和放射的耐受性中发挥作用。(M.-J.Oh等，2000，Clin.CancerRes.，6：4760-4763)。已经鉴定了多种EGFR的抑制剂，包括多种已经进行临床试验用于治疗各种癌症。近期的概述，见deBono，J.S.和Rowinsky，E.K.(2002)，″TheErbBreceptorFamily：ATherapeuticTargetForCancer″，TrendsinMolecularMedicine，8，S19-26。在癌症的治疗中对于治疗性干预有希望的一组靶标包括HER-激酶axis的成员。它们在实体上皮肿瘤，例如，前列腺、肺和乳腺肿瘤中经常上调，并且在胶质母细胞瘤中也上调。表皮生长因子受体(EGFR)是HER-激酶axis的成员，并且已经是开发几种不同癌症疗法的靶标选择。EGFR酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)是这些疗法之一，因为酪氨酸残基的可逆性磷酸化是EGFR途径激活所必需的。换句话说，EGFR-TKIs阻抑对促进和/或维持细胞信号途径负责的细胞表面受体，所述信号途径诱导肿瘤细胸生长和分裂。具体地，据信这些抑制剂干扰EGFR激酶结构域，称为HER-1。更有希望的EGFR-TKIs为三个系列的化合物：喹唑啉类、吡啶并嘧啶类和吡咯并嘧啶类。在临床开发中两种更先进的化合物包括Gefitinib(由AstraZenecaUKLtd.开发的化合物ZD1839；商品名IRESSA；下文为″IRESSA″)和Erlotinib(由Genentech，Inc.andOSIPharmaceuticals，Inc.开发的化合物OSI-774；商品名TARCEVA；下文为″TARCEVA″)；二者都产生了令人鼓舞的临床结果。用IRESSA和TARCEVA进行常规的癌症治疗都包括每天口服不超过500mg的各自化合物。在2003年5月，当IRESSA被批准用于治疗晚期非小细胞肺癌患者时，它在这些产品中成为第一个进入美国市场的。IRESSA是一种口服活性喹唑啉，其通过直接抑制EGFR分子上的酪氨酸激酶磷酸化而起作用。它竞争三磷酸腺苷(ATP)结合位点，导致HER-激酶axis的抑制。I本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种试剂盒，其包含：a.设计来退火到EGFR激酶结构域的外显子19或21内部的核酸区域上的至少一种探针；b.进行退火反应所必需的产物和试剂；和c.说明书，其中所述探针在选择性结合条件下特异性结合到在erbB1基因中的外显子19或21中包含至少一个变异的核酸序列上，其中所述变异为导致EGFR基因的外显子19中的框内删除的突变，其由导致氨基酸改变的在密码子746‑753内的删除组成，所述氨基酸改变包含至少SEQ ID NO.512中第747、748和749位的亮氨酸、精氨酸和谷氨酸的删除，或其中所述变异为导致氨基酸改变的外显子21内的取代，所述氨基酸改变由序列SEQ ID NO.512的858位以精氨酸取代亮氨酸(L858R)组成。

【技术特征摘要】
2004.03.31 US 60/558218;2004.04.09 US 60/561095;201.一种试剂盒，其包含：a.设计来通过退火到EGFR激酶结构域的外显子21的边界或内部的核酸区域上检测变异的至少一对引物，其中所述引物对通过等位基因特异性扩增来特异性扩增在EGFR基因中的外显子21中包含变异的核酸序列，其中所述变异为导致下述的突变导致氨基酸改变的外显子21内的取代，所述氨基酸改变由序列SEQIDNO:512的858位以精氨酸取代亮氨酸(L858R)组成；b.进行PCR扩增所必需的产物和试剂；和c.说明书。2.一种试剂盒，其包含：a.设计来检测EGFR激酶结构域的外显子21中的变异的至少一种核酸探针，其中所述核酸探针检测EGFR基因中的外显子21中的至少一个变异，其中所述变异为导致下述的突变导致氨基酸改变的外显子21内的取代，所述氨基酸改变由序列SEQIDNO:512的858位以精氨酸取代亮氨酸(L858R)组成，其中所述检测基于与核苷酸变异...

【专利技术属性】
技术研发人员：DW贝尔，DA哈伯，PA贾恩，BE约翰逊，TJ林奇，M迈耶森，JG佩茨，WR塞勒斯，JE塞特尔曼，R索德拉，
申请(专利权)人：综合医院公司，达纳法伯癌症协会有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US