拮抗性抗肿瘤坏死因子受体超家族抗体制造技术

本发明专利技术涉及拮抗性TNFR2多肽，如抗体及其抗原结合片段；以及这些多肽用于抑制调控性T细胞(T

【技术实现步骤摘要】
拮抗性抗肿瘤坏死因子受体超家族抗体
专利

[0001]本专利技术涉及能够拮抗肿瘤坏死因子受体2的多肽，如抗体及其抗原结合片段。本专利技术的多肽可用于调节调控性T细胞的活性，以及上调T效应细胞的活性并直接调节表面致癌基因，如用于治疗细胞增殖病症和感染性疾病的免疫疗法领域中。
[0002]专利技术背景
[0003]使用天然存在的和遗传工程化的T淋巴细胞是用于改善各种人类病理的突出范式。例如，虽然用于治疗癌症的传统治疗平台包括手术切除肿瘤块、放射疗法和施用化学治疗剂(Shewach,Chem.Rev.,109:2859
‑
2861,2009)，但是过去十年见证了过继性免疫疗法应用于癌症治疗方案中的再现。随着嵌合抗原受体(CAR
‑
T)疗法的出现，已经出现了向患者输注自体和同种异体肿瘤反应性T细胞的新方法(June,J.Clin.Invest.,117:1466
‑
1476,2007)。CAR
‑
T疗法利用适应性免疫响应的资源以促进癌细胞细胞毒性并根除肿瘤物质。过继性免疫疗法中的常见基序是使用T细胞，所述T细胞表现出在展示不同肿瘤抗原的细胞中选择性地加强细胞毒性的能力。这种技术的实例包括施用肿瘤浸润性淋巴细胞(Dudley等人,J.Immunother.,26:332
‑
342,2003)，以及已经遗传重新工程化以便表现出与肿瘤特异性抗原的反应性的自体或同种异体T细胞(Yee等人,PNAS.,99:16168
‑
16173,2002)。
[0004]尽管基于T淋巴细胞的癌症免疫疗法具有前景，但这种治疗平台的开发一直受免疫系统遏制自身细胞上固定的免疫攻击的自然倾向阻碍。与所有有核人细胞一样，癌细胞表达I类主要组织相容性复合物(MHC)蛋白，所述蛋白将这些细胞与外来细胞区分开来。为了防止细胞自相残杀，已经进化出调控性T细胞(T
‑
reg细胞)，所述调控T细胞遏制表现出针对“自身”MHC抗原的反应性的T细胞的活性。T
‑
reg细胞代表异质类T细胞，所述T细胞可基于其独特的表面蛋白呈递来区分。最容易理解的T
‑
reg细胞群体包括CD4+、CD25+、FoxP3+T
‑
reg细胞和CD17+T
‑
reg细胞。这些细胞介导自身反应性T细胞的遏制的确切机制是正在进行的研究的主题，但是已经显示某些类别的T
‑
reg细胞抑制靶T细胞中诱导增殖的细胞因子IL
‑
2的产生，并且可另外地凭借CD25(IL
‑
2受体的亚结构域)对IL
‑
2的亲和力螯合来自自身反应细胞的IL
‑
2(Josefowicz等人,Ann.Rev.Immun.,30:531
‑
564,2012)。
[0005]虽然T
‑
reg细胞在维持外周耐受中起重要作用，但构成这些细胞调节自身反应性T细胞活性的能力的基础的相同生物化学特征也用于通过遏制肿瘤反应性T淋巴细胞的活性来破坏过继性免疫疗法和天然免疫响应。T
‑
reg细胞活性的化学调节剂的开发已经成为许多药理学研究的主题，因为获得能够抑制T
‑
reg介导的T细胞遏制的剂可极大地提高过继性癌症免疫疗法的范围和功效，以及提高免疫系统根除引起感染性疾病的病原生物体的能力。
[0006]已经在T
‑
reg细胞表面上鉴定了肿瘤坏死因子受体(TNFR)亚型1和2作为决定细胞命运的信号转导分子。例如，TNFR1的活化加强了半胱天冬酶信号传导级联并终止于T
‑
reg细胞凋亡，而TNFR2的活化通过有丝分裂原活化的蛋白激酶(MAPK)信号传导途径诱导信号传导，其协调通过TRAF2/3信号传导和NFκB介导的促进逃避细胞凋亡和细胞增殖的基因的转录。由于其在指导细胞存活和生长中的作用，TNFR2代表了用于防止肿瘤反应性T淋巴细
胞的免疫检测的有吸引力的靶标。因此，目前需要用于靶向细胞增殖病症(如癌症)和多种感染性疾病的治疗中的能够阻止T
‑
reg细胞存活和增殖的疗法。

技术实现思路

[0007]本专利技术提供了拮抗性肿瘤坏死因子受体2(TNFR2)多肽，如单链多肽、抗体以及其抗原结合片段。本专利技术的拮抗性TNFR2多肽特异性地结合人TNFR2内含有KCRPG序列(SEQ ID NO:19)的一个或多个残基的表位或非人灵长类动物(例如，野牛或牛，如本文所描述)的TNFR2中的等效表位，并且不会特异性地结合人TNFR2内的KCSPG基序(SEQ ID NO:12)的残基或非人灵长类动物的TNFR2中的等效表位。本文所述的多肽(例如，单链多肽、抗体以及其抗原结合片段)可用于治疗多种病理，包括癌症和感染性疾病。
[0008]本专利技术的拮抗性TNFR2多肽如此描述，因为它们表现出抑制T
‑
reg细胞的增殖和/或促进T
‑
reg细胞的死亡的能力。本专利技术的拮抗性TNFR2多肽可抑制表达TNFR2和致癌基因的癌细胞的增殖和/或促进所述癌细胞的死亡。本专利技术的拮抗性TNFR2多肽可允许T效应细胞(如细胞毒性CD8+T细胞)的相互扩增。例如，这可能由于T
‑
reg细胞增殖和活性的减弱而发生。本专利技术的拮抗性TNFR2多肽可直接扩增T效应细胞，如CD8+细胞毒性T细胞。因此，本专利技术的TNFR2多肽作为拮抗剂的名称是指它们减弱表达T
‑
reg和TNFR2的癌细胞的增殖和活性的能力，并且为清楚起见不表示T效应细胞响应的拮抗作用。
[0009]本文公开了能够特异性地结合人TNFR2的多肽，如单链多肽、抗体或其抗原结合片段，所述多肽含有互补决定区
‑
重链1(CDR
‑
H1)和源自TNFR2抗体的CDR
‑
H2以及具有氨基酸序列JZ1JZ2Z4JZ3JZ5(J)2Z5Z2Z5、JZ1JZ2Z4Z3Z5(J)2Z5Z2Z5(J)2、JRJDGJSJY(J)2FDJ(SEQ ID NO:278)、JRJDGSY(J)2FD(J)3(SEQ ID NO:279)、QZ1VZ2Z4YZ3SZ5WYZ5Z2Z5(SEQ ID NO:265)或AZ1DZ2Z4Z3Z5SPZ5Z2Z5WG(SEQ ID NO:266)的CDR
‑
H3，其中
[0010]每个J独立地是天然存在的氨基酸；
[0011]每个Z1独立地是含有在生理pH下的阳离子侧链的天然存在的氨基酸，如赖氨酸、精氨酸和组氨酸；
[0012]每个Z2独立地是含有在生理pH下的阴离子侧链的天然存在的氨基酸，如天冬氨酸和谷氨酸；
[0013]每个Z3独立地是含有在生理pH下的极性不带电荷的侧链的天然存在的氨基酸，如丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺和谷氨酰胺；
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种能够特异性地结合人肿瘤坏死因子受体2(TNFR2)的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含互补决定区
‑
重链3(CDR
‑
H3)，所述CDR
‑
H3具有以下氨基酸序列：(a)JRJDGSY(J)2FD(J)3(SEQ ID NO:279)；(b)AZ1DZ2Z4Z3Z5SPZ5Z2Z5WG(SEQ ID NO:266)；或(c)ARDDGSYSPFDYWG(SEQ ID NO:259)，或者相对于所述序列具有至多两个氨基酸取代的氨基酸序列；其中每个J独立地是天然存在的氨基酸；每个Z1独立地是包含在生理pH下的阳离子侧链的天然存在的氨基酸；每个Z2独立地是包含在生理pH下的阴离子侧链的天然存在的氨基酸；每个Z3独立地是包含在生理pH下的极性不带电荷的侧链的天然存在的氨基酸；每个Z4独立地是甘氨酸或丙氨酸；并且每个Z5独立地是包含疏水性侧链的天然存在的氨基酸。2.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中在所述CDR
‑
H3存在下，所述抗体或其抗原结合片段能够特异性地结合包含LRKCRPGFGVA(SEQ ID NO:285)或VVCKPCAPGTFSN(SEQ ID NO:286)的氨基酸序列的肽。3.如权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段，其中在所述CDR
‑
H3存在下，所述抗体或其抗原结合片段能够特异性地结合SEQ ID NO:7的氨基酸142
‑
149(KCRPGFGV)或氨基酸161
‑
169(CKPCAPGTF)内的表位。4.如权利要求1
‑
3中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述CDR
‑
H3具有氨基酸序列ARDDGSYSPFDYWG(SEQ ID NO:259)。5.如权利要求1
‑
3中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述CDR
‑
H3具有氨基酸序列ARDDGSYSPFDYFG(SEQ ID NO:284)。6.如权利要求1
‑
5中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段还包含以下区(CDR)中的一个或多个或全部：(a)CDR
‑
H1，所述CDR
‑
H1具有氨基酸序列GJTF(J)2YJ(SEQ ID NO:277)；(b)CDR
‑
H2，所述CDR
‑
H2具有氨基酸序列(J)5GSJ；(c)CDR
‑
L1，所述CDR
‑
L1具有氨基酸序列(J)5Y；(d)CDR
‑
L2，所述CDR
‑
L2具有氨基酸序列(J)2S；以及(e)CDR
‑
L3，所述CDR
‑
L3具有氨基酸序列(J)3Y(J)4T；其中每个J独立地是天然存在的氨基酸。7.如权利要求1
‑
5中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段还包含以下区(CDR)中的一个或多个或全部：(a)CDR
‑
H1，所述CDR
‑
H1具有氨基酸序列Z4YZ3Z5TDZ5X；(b)CDR
‑
H2，所述CDR
‑
H2具有氨基酸序列VDPEYZ4Z3T(SEQ ID NO:264)；(c)CDR
‑
L1，所述CDR
‑
L1具有氨基酸序列QNINKZ5(SEQ ID NO:268)；(d)CDR
‑
L2，所述CDR
‑
L2具有氨基酸序列TYZ3或YTZ3；以及(e)CDR
‑
L3，所述CDR
‑
L3具有氨基酸序列CLQZ5VNLXZ3(SEQ ID NO:271)；其中每个Z1独立地是包含在生理pH下的阳离子侧链的氨基酸；
每个Z2独立地是包含在生理pH下的阴离子侧链的氨基酸；每个Z3独立地是包含在生理pH下的极性不带电荷的侧链的氨基酸；每个Z4独立地是甘氨酸或丙氨酸；每个Z5独立地是包含疏水性侧链的氨基酸；以及每个X独立地是亮氨酸或异亮氨酸。8.如权利要求1
‑
5中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段还包含以下区(CDR)中的一个或多个或全部：(a)CDR
‑
H1，所述CDR
‑
H1具有氨基酸序列GYTFTDYX(SEQ ID NO:257)，或者相对于所述序列具有至多两个氨基酸取代的氨基酸序列；(b)CDR
‑
H2，所述CDR
‑
H2具有氨基酸序列VDPEYGST(SEQ ID NO:258)，或者相对于所述序列具有至多两个氨基酸取代的氨基酸序列；(c)CDR
‑
L1，所述CDR
‑
L1具有氨基酸序列QNINKY(SEQ ID NO:260)，或者相对于所述序列具有至多两个氨基酸取代的氨基酸序列；(d)CDR
‑
L2，所述CDR
‑
L2具有氨基酸序列TYS或YTS；以及(e)CDR
‑
L3，所述CDR
‑
L3具有氨基酸序列CLQYVNLXT(SEQ ID NO:261)，或者相对于所述序列具有至多两个氨基酸取代的氨基酸序列；其中每个X独立地是亮氨酸或异亮氨酸。9.如权利要求6
‑
8中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含以下区(CDR)中的一个或多个或全部：(a)CDR
‑
H1，所述CDR
‑
H1具有氨基酸序列GYTFTDYX(SEQ ID NO:257)；(b)CDR
‑
H2，所述CDR
‑
H2具有氨基酸序列VDPEYGST(SEQ ID NO:258)；(c)CDR
‑
L1，所述CDR
‑
L1具有氨基酸序列QNINKY(SEQ ID NO:260)；(d)CDR
‑
L2，所述CDR
‑
L2具有氨基酸序列TYS或YTS；以及(e)CDR
‑
L3，所述CDR
‑
L3具有氨基酸序列CLQYVNLXT(SEQ ID NO:261)；其中每个X独立地是亮氨酸或异亮氨酸。10.如权利要求9所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述CDR
‑
H1具有氨基酸序列GYTFTDYL(SEQ ID NO:274)。11.如权利要求9所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述CDR
‑
H1具有氨基酸序列GYTFTDYI(SEQ ID NO:275)。12.如权利要求9
‑
11中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述CDR
‑
L2具有氨基酸序列TYS。13.如权利要求9
‑
11中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述CDR
‑
L2具有氨基酸序列YTS。14.如权利要求9
‑
13中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述CDR
‑
L3具有氨基酸序列CLQYVNLLT(SEQ ID NO:272)。15.如权利要求9
‑
13中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述CDR
‑
L3具有氨基酸序列CLQYVNLIT(SEQ ID NO:273)。16.如权利要求9
‑
15中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含含与所述CDR
‑
L2的N
‑
末端结合的氨基酸序列LLIR(SEQ ID NO:262)的框架
区。17.如权利要求9
‑
16中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含含与所述CDR
‑
L2的C
‑
末端结合的氨基酸序列TLE的框架区。18.如权利要求1
‑
17中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段不包含以下区(CDR)中的一个或多个：(a)CDR
‑
H1，所述CDR
‑
H1具有氨基酸序列GFTFSSY(SEQ ID NO:23)；(b)CDR
‑
H2，所述CDR
‑
H2具有氨基酸序列SSGGSY(SEQ ID NO:24)；(c)CDR
‑
L1，所述CDR
‑
L1具有氨基酸序列SASSSVYYMY(SEQ ID NO:26)；(d)CDR
‑
L2，所述CDR
‑
L2具有氨基酸序列STSNLAS(SEQ ID NO:27)；(e)CDR
‑
L3，所述CDR
‑
L3具有氨基酸序列QQRRNYPYT(SEQ ID NO:28)；(f)CDR
‑
L1，所述CDR
‑
L1包含氨基酸序列RASKSVSTSGYSYMH(SEQ ID NO:29)；(g)CDR
‑
L2，所述CDR
‑
L2包含氨基酸序列LASNLES(SEQ ID NO:30)；以及(h)CDR
‑
L3，所述CDR
‑
L3包含氨基酸序列QHSRELPRT(SEQ ID NO:31)。19.如权利要求1
‑
18中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含非天然恒定区。20.如权利要求19所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述非天然恒定区是人恒定区。21.如权利要求1
‑
18中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段缺乏Fc结构域的全部或一部分，缺乏天然Fc结构域的全部或一部分，或者完全缺乏Fc结构域。22.如权利要求1
‑
21中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段以小于约100nM的K
D
特异性地结合至包含SEQ ID NO:11、19、20和34
‑
117中任一者的氨基酸序列的肽，并且不结合包含SEQ ID NO:7的氨基酸56
‑
60(KCSPG)的肽。23.如权利要求1
‑
22中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段特异性地结合包含SEQ ID NO:7的氨基酸142
‑
146(KCRPG)中的一个或多个的肽，并且不结合包含SEQ ID NO:7的氨基酸56
‑
60(KCSPG)的肽。24.如权利要求1
‑
23中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段抑制TNFR2信号传导。25.如权利要求1
‑
24中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段抑制选自由CHUK、NFKBIE、NFKBIA、MAP3K11、TRAF2、TRAF3、relB以及cIAP2/BIRC3组成的组的一种或多种基因的表达。26.如权利要求1
‑
25中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段抑制NFκB活化。27.如权利要求1
‑
26中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段能够减少或抑制T
‑
reg细胞的增殖。28.如权利要求1
‑
27中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段能够减少或抑制表达TNFR2的癌细胞的增殖。29.如权利要求28所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述癌细胞选自由以下组成的组：T细胞淋巴瘤细胞，如霍奇金氏或皮肤非霍奇金氏淋巴瘤细胞；卵巢癌细胞；结肠癌细胞；多发性骨髓瘤细胞；以及肾细胞癌细胞。
30.如权利要求1
‑
29中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段能够减少或抑制骨髓源性抑制细胞的增殖。31.如权利要求1
‑
30中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段不需要TNFα来减少或抑制T
‑
reg细胞的增殖。32.如权利要求1
‑
31中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段促进T效应细胞的增殖。33.一种鉴别TNFR2拮抗剂抗体或其抗原结合片段的方法，所述方法包括：(a)使抗体或其片段的异质混合物暴露于肽，所述肽具有ID NO:285或286的氨基酸序列，或相对于所述序列具有至多两个氨基酸取代的氨基酸序列；以及(b)保留特异性地结合所述肽的抗体或其片段并除去不特异性地结合所述肽的抗体或其片段，从而产生包含至少一种所述TNFR2拮抗剂抗体或其抗原结合片段的富集的抗体混合物。34.如权利要求33所述的方法，其中所述方法包括确定所述富集的抗体混合物中的所述抗体或其抗原结合片段中的一种或多种的氨基酸序列。35.如权利要求33或34所述的方法，其中所述肽结合至表面。36.如权利要求33
‑
35中任一项所述的方法，其中所述抗体或其抗原结合片段在噬菌体、细菌细胞或酵母细胞的表面上表达。37.如权利要求33
‑
35中任一项所述的方法，其中所述抗体或其抗原结合片段被表达为与核糖体非共价结合或与mRNA或cDNA共价结合的一条或多条多肽链。38.如权利要求33
‑
37中任一项所述的方法，其中所述肽与可检测标记缀合。39.如权利要求38所述的方法，其中所述可检测标记选自由荧光分子、表位标签和放射性标记组成的组。40.如权利要求39所述的方法，其中所述荧光分子选自由以下组成的组：绿色荧光蛋白、青色荧光蛋白、黄色荧光蛋白、红色荧光蛋白、藻红蛋白、别藻蓝蛋白、赫斯特、4',6
‑
二脒基
‑2‑
苯基吲哚(DAPI)、碘化丙啶、荧光素、香豆素、罗丹明、四甲基罗丹明和花菁。41.如权利要求39所述的方法，其中所述表位标签选自由以下组成的组：麦芽糖结合蛋白、谷胱甘肽
‑
S
‑
转移酶、聚
‑
组氨酸标签、FLAG
‑
标签、myc
‑
标签、人流感血凝素(HA)标签、生物素和链霉亲和素。42.如权利要求33
‑
41中任一项所述的方法，其中步骤(a)和(b)顺序地重复一次或多次。43.一种产生TNFR2拮抗剂抗体或其抗原结合片段的方法，所述方法包括：用肽免疫非人哺乳动物，所述肽包含SEQ ID NO:285或286的序列，或相对于所述序列具有至多两个氨基酸取代的氨基酸序列；以及收集包含所述TNFR2拮抗剂抗体或其抗原结合片段的血清。44.如权利要求43所述的方法，其中所述非人哺乳动物选自由以下组成的组：兔、小鼠、大鼠、山羊、豚鼠、仓鼠、马和绵羊。45.一种抗体或其抗原结合片段，其通过如权利要求33
‑
44中任一项所述的方法产生。46.如权利要求1
‑
32和45中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段选自由以下组成的组：单克隆抗体或其抗原结合片段、多克隆抗体或其抗原结合片段、人源化抗体或其抗原结合片段、灵长类化抗体或其抗原结合片段、双特异性抗体
或其抗原结合片段、多特异性抗体或其抗原结合片段、双重可变免疫球蛋白结构域、单价抗体或其抗原结合片段、嵌合抗体或其抗原结合片段、单链Fv分子(scFv)、双抗体、三抗体、纳米抗体、抗体样蛋白支架、结构域抗体、Fv片段、Fab片段、F(ab
’
)2分子以及串联scFv(taFv)。47.如权利要求46所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段是F(ab
’
)2分子。48.如权利要求1
‑
32、45和46中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段具有选自由以下组成的组的同种型：IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。49.如权利要求1
‑
32和45
‑
48中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体与治疗剂缀合。50.如权利要求49所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述治疗剂是细胞毒性剂。51.一种能够特异性地结合人TNFR2的单链多肽，其中所述单链多肽包含CDR
‑
H1、CDR
‑
H2和CDR
‑
H3，其中所述CDR
‑
H3包含以下氨基酸序列：(a)JRJDGSY(J)2FD(J)3(SEQ ID NO:279)；(b)AZ1DZ2Z4Z3Z5SPZ5Z2Z5WG(SEQ ID NO:266)；或(c)ARDDGSYSPFDYWG(SEQ ID NO:259)，或者相对于所述序列具有至多两个氨基酸取代的氨基酸序列；其中每个J独立地是天然存在的氨基酸；每个Z1独立地是包含在生理pH下的阳离子侧链的天然存在的氨基酸；每个Z2独立地是包含在生理pH下的阴离子侧链的天然存在的氨基酸；每个Z3独立地是包含在生理pH下的极性不带电荷的侧链的天然存在的氨基酸；每个Z4独立地是甘氨酸或丙氨酸；并且每个Z5独立地是包含疏水性侧链的天然存在的氨基酸。52.如权利要求51所述的单链多肽，其中所述CDR
‑
H1和CDR
‑
H2来自能够特异性地结合SEQ ID NO:7的氨基酸70
‑
180内的表位的抗TNFR2抗体。53.如权利要求52所述的单链多肽，其中所述CDR
‑
H1和CDR
‑
H2来自能够特异性地结合SEQ ID NO:7的氨基酸142
‑
149(KCRPGFGV)内的表位的抗TNFR2抗体。54.如权利要求52所述的单链多肽，其中所述CDR
‑
H1和CDR
‑
H2来自能够特异性地结合SEQ ID NO:7的氨基酸137
‑
144(CAPLRKCR)内的表位的抗TNFR2抗体。55.如权利要求52所述的单链多肽，其中所述CDR
‑
H1和CDR
‑
H2来自能够特异性地结合SEQ ID NO:7的氨基酸161
‑
169(CKPCAPGTF)内的表位的抗TNFR2抗体。56.如权利要求52所述的单链多肽，其中所述CDR
‑
H1和CDR
‑
H2来自能够特异性地结合SEQ ID NO:7的氨基酸80
‑
86(DSTYTQL)、91
‑
98(PECLSCGS)和116
‑
123(RICTCRPG)内的表位的抗TNFR2抗体。57.如权利要求51
‑
56中任一项所述的单链多肽，其中在所述CDR
‑
H3存在下，所述抗体或其抗原结合片段能够特异性地结合包含LRKCRPGFGVA(SEQ ID NO:285)或VVCKPCAPGTFSN(SEQ ID NO:286)的氨基酸序列的肽。58.如权利要求51
‑
57中任一项所述的单链多肽，其中所述CDR
‑
H3具有氨基酸序列ARDDGSYSPFDYWG(SEQ ID NO:259)。
59.如权利要求51
‑
57中任一项所述的单链多肽，其中所述CDR
‑
H3具有氨基酸序列ARDDGSYSPFDYFG(SEQ ID NO:284)。60.如权利要求51
‑
59中任一项所述的单链多肽，其中所述CDR
‑
H1具有氨基酸序列：(a)GJTF(J)2YJ(SEQ ID NO:277)；(b)Z4YZ3Z5TDZ5X；或(c)GYTFTDYX(SEQ ID NO:257)，或者相对于所述序列具有至多两个氨基酸取代的氨基酸序列；其中每个J独立地是天然存在的氨基酸；每个Z1独立地是包含在生理pH下的阳离子侧链的天然存在的氨基酸；每个Z2独立地是包含在生理pH下的阴离子侧链的天然存在的氨基酸；每个Z3独立地是包含在生理pH下的极性不带电荷的侧链的天然存在的氨基酸；每个Z4独立地是甘氨酸或丙氨酸；并且每个Z5独立地是包含疏水性侧链的天然存在的氨基酸；并且每个X独立地是亮氨酸或异亮氨酸。61.如权利要求60所述的单链多肽，其中所述CDR
‑
H1具有氨基酸序列GYTFTDYX(SEQ ID NO:257)。62.如权利要求61所述的单链多肽，其中所述CDR
‑
H1具有氨基酸序列GYTFTDYL(SEQ ID NO:274)。63.如权利要求61所述的单链多肽，其中所述CDR
‑
H1具有氨基酸序列GYTFTDYI(SEQ ID NO:275)。64.如权利要求51
‑
63中任一项所述的单链多肽，其中所述CDR
‑
H2具有氨基酸序列：(a)(J)5GSJ；(b)VDPEYZ4Z3T(SEQ ID NO:264)；或(c)VDPEYGST(SEQ ID NO:258)，或者相对于所述序列具有至多两个氨基酸取代的氨基酸序列；其中每个J独立地是天然存在的氨基酸；每个Z1独立地是包含在生理pH下的阳离子侧链的天然存在的氨基酸；每个Z2独立地是包含在生理pH下的阴离子侧链的天然存在的氨基酸；每个Z3独立地是包含在生理pH下的极性不带电荷的侧链的天然存在的氨基酸；每个Z4独立地是甘氨酸或丙氨酸；并且每个Z5独立地是包含疏水性侧链的天然存在的氨基酸。65.如权利要求64所述的单链多肽，其中所述CDR
‑
H2具有氨基酸序列VDPEYGST(SEQ ID NO:258)。66.如权利要求51
‑
65中任一项所述的单链多肽，其中所述单链多肽还包含以下CDR中的一个或多个或全部：(a)CDR
‑
L1，所述CDR
‑
L1具有氨基酸序列(J)5Y；(b)CDR
‑
L2，所述CDR
‑
L2具有氨基酸序列(J)2S；以及(c)CDR
‑
L3，所述CDR
‑
L3具有氨基酸序列(J)3Y(J)4T。其中每个J独立地是天然存在的氨基酸。
67.如权利要求51
‑
65中任一项所述的单链多肽，其中所述单链多肽还包含以下CDR中的一个或多个或全部：(a)CDR
‑
L1，所述CDR
‑
L1具有氨基酸序列QNINKZ5(SEQ ID NO:268)；(b)CDR
‑
L2，所述CDR
‑
L2具有氨基酸序列TYZ3或YTZ3；以及(c)CDR
‑
L3，所述CDR
‑
L3具有氨基酸序列CLQZ5VNLXZ3(SEQ ID NO:271)；其中每个Z1独立地是包含在生理pH下的阳离子侧链的氨基酸；每个Z2独立地是包含在生理pH下的阴离子侧链的氨基酸；每个Z3独立地是包含在生理pH下的极性不带电荷的侧链的氨基酸；每个Z4独立地是甘氨酸或丙氨酸；每个Z5独立地是包含疏水性侧链的氨基酸；以及每个X独立地是亮氨酸或异亮氨酸。68.如权利要求51
‑
65中任一项所述的单链多肽，其中所述单链多肽还包含以下CDR中的一个或多个或全部：(a)CDR
‑
L1，所述CDR
‑
L1具有氨基酸序列QNINKY(SEQ ID NO:260)，或者相对于所述序列具有至多两个氨基酸取代的氨基酸序列；(b)CDR
‑
L2，所述CDR
‑
L2具有氨基酸序列TYS或YTS；以及(c)CDR
‑
L3，所述CDR
‑
L3具有氨基酸序列CLQYVNLXT(SEQ ID NO:261)，或者相对于所述序列具有至多两个氨基酸取代的氨基酸序列；其中每个X独立地是亮氨酸或异亮氨酸。69.如权利要求66
‑
68中任一项所述的单链多肽，其中所述CDR
‑
L2具有氨基酸序列TYS。70.如权利要求66
‑
68中任一项所述的单链多肽，其中所述CDR
‑
L2具有氨基酸序列YTS。71.如权利要求66
‑
70中任一项所述的单链多肽，其中所述CDR
‑
L3具有氨基酸序列CLQYVNLLT(SEQ ID NO:272)。72.如权利要求66
‑
70中任一项所述的单链多肽，其中所述CDR
‑
L3具有氨基酸序列CLQYVNLIT(SEQ ID NO:273)。73.如权利要求66
‑
72中任一项所述的单链多肽，其中所述单链多肽包含含与所述CDR
‑
L2的N
‑
末端结合的氨基酸序列LLIR(SEQ ID NO:262)的框架区。74.如权利要求66
‑
72中任一项所述的单链多肽，其中所述单链多肽包含含与所述CDR
‑
L2的C
‑
末端结合的氨基酸序列TLE的框架区。75.如权利要求51
‑
74中任一项所述的单链多肽，其中所述单链多肽不包含以下CDR中的一个或多个：(a)CDR
‑
H1，所述CDR
‑
H1具有氨基酸序列GFTFSSY(SEQ ID NO:23)；(b)CDR
‑
H2，所述CDR
‑
H2具有氨基酸序列SSGGSY(SEQ ID NO:24)；以及(c)CDR
‑
L1，所述CDR
‑
L1具有氨基酸序列SASSSVYYMY(SEQ ID NO:26)；(d)CDR
‑
L2，所述CDR
‑
L2具有氨基酸序列STSNLAS(SEQ ID NO:27)；(e)CDR
‑
L3，所述CDR
‑
L3具有氨基酸序列QQRRNYPYT(SEQ ID NO:28)；(f)CDR
‑
L1，所述CDR
‑
L1具有氨基酸序列RASKSVSTSGYSYMH(SEQ ID NO:29)；(g)CDR
‑
L2，所述CDR
‑
L2具有氨基酸序列LASNLES(SEQ ID NO:30)；以及(h)CDR
‑
L3，所述CDR
‑
L3具有氨基酸序列QHSRELPRT(SEQ ID NO:31)。
76.一种构建体，其包含第一多肽结构域和第二多肽结构域，其中所述第一多肽结构域和所述第二多肽结构域各自独立地包含如权利要求51
‑
75中任一项所述的单链多肽。77.如权利要求76所述的构建体，其中所述第一多肽结构域和所述第二多肽结构域通过共价接头结合。78.如权利要求77所述的构建体，其中所述共价接头包含酰胺键。79.如权利要求77所述的构建体，其中所述共价接头包含二硫键。80.一种多核苷酸，其编码如权利要求1
‑
32中任一项所述的抗体或其抗原结合片段。81.一种多核苷酸，其编码如权利要求51
‑
75中任一项所述的单链多肽。82.一种多核苷酸，其编码如权利要求76
‑
79中任一项所述的构建体。83.一种载体，其包含如权利要求80
‑
82中任一项所述的多核苷酸。84.如权利要求83所述的载体，其中所述载体是表达载体。85.如权利要求84所述的载体，其中所述表达载体是真核表达载体。86.如权利要求83所述的载体，其中所述载体是病毒载体。87.如权利要求86所述的载体，其中所述病毒载体选自由以下组成的组：腺病毒(Ad)、逆转录病毒、痘病毒、腺相关病毒、杆状病毒、单纯疱疹病毒和牛痘病毒。88.如权利要求87所述的载体，其中所述腺病毒是血清型5、26、35或48腺病毒。89.如权利要求87所述的载体，其中所述逆转录病毒是γ
‑
逆转录病毒或慢病毒。90.如权利要求87所述的载体，其中所述牛痘病毒是修饰的牛痘安卡拉(MVA)。91.一种分离的宿主细胞，其包含如权利要求83
‑
90中任一项所述的载体。92.如权利要求91所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞是原核细胞。93.如权利要求91所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞是真核细胞。94.如权利要求93所述的宿主细胞，其中所述真核细胞是哺乳动物细胞。95.如权利要求94所述的宿主细胞，其中所述哺乳动物细胞是CHO细胞。96.一种药物组合物，其包含如权利要求1
‑
32和45
‑
50中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、如权利要求51
‑
75中任一项所述的单链多肽或如权利要求76
‑
79中任一项所述的构建体和药学上可接受的载体或赋形剂。97.如权利要求96所述的药物组合物，其中所述组合物还包含额外治疗剂。98.如权利要求97所述的药物组合物，其中所述额外治疗剂是免疫治疗剂。99.如权利要求98所述的药物组合物，其中所述免疫治疗剂选自由以下组成的组：抗CTLA
‑
4剂、抗PD
‑
1剂、抗PD
‑
L1剂、抗PD
‑
L2剂、TNF
‑
α交联剂、TRAIL交联剂、抗CD27剂、抗CD30剂、抗CD40剂、抗4
‑
1BB剂、抗GITR剂、抗OX40剂、抗TRAILR1剂、抗TRAILR2剂、抗TWEAKR剂、塔革雷汀、干扰素
‑
α、氯倍他索、Peg干扰素、泼尼松、罗米地辛、贝沙罗汀、甲氨蝶呤、曲安西龙乳膏、抗趋化因子、伏立诺他和/或加巴喷丁。100.一种产生如权利要求1
‑
32中任一项所述的抗体或其抗原结合片段的方法，所述方法包括：在宿主细胞中表达编码所述抗体或其抗原结合片段的多核苷酸，以及从宿主细胞培养基中回收所述抗体或其抗原结合片段。101.一种产生如权利要求51
‑
75中任一项所述的单链多肽的方法，所述方法包括：在宿主细胞中表达编码所述单链多肽的多核苷酸，以及从宿主细胞培养基中回收所述单链多肽。
102.一种产生如权利要求76
‑
79中任一项所述的构建体的方法，所述方法包括：在宿主细胞中表达编码所述构建体的多核苷酸，以及从宿主细胞培养基中回收所述构建体。103.一种抑制人中由调控性T细胞介导的免疫响应的方法，所述方法包括向所述人施用如权利要求1
‑
32和45
‑
50中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、如权利要求51
‑
75中任一项所述单链多肽、如权利要求76
‑
79中任一项所述的构建体、如权利要求80
‑
82中任一项所述的多核苷酸、如权利要求83
‑
90中任一项所述的载体、如权利要求91和93
‑
95中任一项所述的宿主细胞或如权利要求96
‑
99中任一项所述的药物组合物。104.一种治疗人的细胞增殖病症的方法，所述方法包括向所述人施用如权利要求1
‑
32和45
‑
50中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、如权利要求51
‑
75中任一项所述单链多肽、如权利要求76
‑
79中任一项所述的构建体、如权利要求80
‑
82中任一项所述的多核苷酸、如权利要求83
‑
90中任一项所述的载体、如权利要求91和93
‑
95中任一项所述的宿主细胞或如权利要求96
‑
99中任一项所述的药物组合物。105.如权利要求104所述的方法，其中所述细胞增殖病症是选自由以下组成的组的癌症：白血病、淋巴瘤、肝癌、骨癌、肺癌、脑癌、膀胱癌、胃肠癌、乳腺癌、贲门癌、宫颈癌、子宫癌、头颈癌、胆囊癌、喉癌、唇癌和口腔癌、眼癌、黑色素瘤、胰腺癌、前列腺癌、结肠直肠癌、睾丸癌以及喉癌。106.如权利要求104所述的方法，其中所述细胞增殖病症是选自由以下组成的组的癌症：急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、肾上腺皮质癌、AIDS相关淋巴瘤、原发性CNS淋巴瘤、肛门癌、阑尾癌、星形细胞瘤、非典型畸胎瘤/横纹肌样瘤、基底细胞癌、胆管癌、肝外癌、尤文肉瘤家族、骨肉瘤和恶性纤维组织细胞瘤、中枢神经系统胚胎肿瘤、中枢神经系统生殖细胞肿瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、支气管肿瘤、伯基特淋巴瘤、类癌肿瘤、原发性淋巴瘤、脊索瘤、慢性骨髓增生性肿瘤、结肠癌、肝外胆管癌、原位导管癌(DCIS)、子宫内膜癌、室管膜瘤、食道癌、成感觉神经母细胞瘤、颅外生殖细胞肿瘤、性腺外生殖细胞肿瘤、输卵管癌、骨纤维组织细胞瘤、胃肠类癌肿瘤、胃肠间质肿瘤(GIST)、睾丸生殖细胞肿瘤、妊娠滋养细胞疾病、神经胶质瘤、儿童脑干神经胶质瘤、毛细胞白血病、肝细胞癌、朗格汉斯细胞组织细胞增生症、霍奇金淋巴瘤、下咽癌、胰岛细胞肿瘤、胰腺神经内分泌肿瘤、威尔姆斯肿瘤和其他儿童肾脏肿瘤、朗格汉斯细胞组织细胞增生症、小细胞肺癌、皮肤T细胞淋巴瘤、眼内黑色素瘤、梅克尔细胞癌、间皮瘤、转移性鳞状颈癌、中线道癌、多发性内分泌瘤形成综合征、多发性骨髓瘤/浆细胞肿瘤、骨髓增生异常综合征、鼻腔和副鼻窦癌、鼻咽癌、成神经细胞瘤、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、非小细胞肺癌(NSCLC)、上皮性卵巢癌、生殖细胞卵巢癌、低恶性潜能卵巢癌、胰腺神经内分泌肿瘤、乳头瘤病、副神经节瘤、副鼻窦和鼻腔癌、甲状旁腺癌、阴茎癌、咽癌、嗜铬细胞瘤、垂体肿瘤、胸膜肺母细胞瘤、原发性腹膜癌、直肠癌、成视网膜细胞瘤、横纹肌肉瘤、唾液腺癌、卡波济肉瘤、横纹肌肉瘤、塞扎里综合征、小肠癌、软组织肉瘤、喉癌、胸腺瘤和胸腺癌、甲状腺癌、肾盂和输尿管移行细胞癌、尿道癌、子宫内膜子宫癌、子宫肉瘤、阴道癌、外阴癌以及瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症。107.一种治疗人的感染性疾病的方法，所述方法包括向所述人施用如权利要求1
‑
32和45
‑
50中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、如权利要求51
‑
75中任一项所述单链多肽、如权利要求76
‑
79中任一项所述的构建体、如权利要求80
‑
82中任一项所述的多核苷酸、如
权利要求83
‑
90中任一项所述的载体、如权利要求91和93
‑
95中任一项所述的宿主细胞或如权利要求96
‑
99中任一项所述的药物组合物。108.如权利要求107所述的方法，其中所述感染性疾病由选自由以下组成的组的一种或多种因子引起：病毒、细菌、真菌或寄生虫。109.如权利要求108所述的方法，其中所述感染性疾病由选自由以下组成的组的病毒引起：丙型肝炎病毒、黄热病病毒、凯丹姆病毒、科萨努尔森林病病毒、兰加特病毒、鄂木斯克出血热病毒、波瓦森病毒、皇家农场病毒、喀什病毒、蜱传脑炎病毒、纽多佛病毒、索夫吉病毒、跳跃病病毒、根岸病毒、米班病毒、索马里兹礁病毒、秋列尼病毒、阿罗阿病毒、登革病毒、凯杜古病毒、卡西帕科利病毒、库坦戈病毒、日本脑炎病毒、墨累谷脑炎病毒、圣路易斯脑炎病毒、乌苏图病毒、西尼罗河病毒、雅温德病毒、科科贝拉病毒、巴加扎病毒、伊利乌斯病毒、以色列火鸡脑脊膜脑脊髓炎病毒、恩塔亚病毒、坦布苏病毒、寨卡病毒、班齐病毒、博博衣病毒、边山病毒、朱格拉病毒、萨沃亚病毒、赛皮克病毒、乌干达S病毒、韦塞尔斯布朗病毒、黄热病毒、恩德培蝙蝠病毒、横须贺病毒、阿波依病毒、牛骨山脊病毒、胡蒂亚帕病毒、摩多克病毒、萨尔别霍病毒、圣帕利塔病毒、布卡拉沙蝙蝠病毒、凯里岛病毒、达卡尔蝙蝠病毒、蒙大拿鼠耳蝙蝠脑白质炎病毒、金边蝙蝠病毒、里约布拉沃病毒、塔马纳蝙蝠病毒、细胞融合因子病毒、伊皮病毒、拉沙病毒、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)、莫巴拉病毒、莫佩亚病毒、阿马帕里病毒、弗莱克索病毒、瓜纳里托病毒、胡宁病毒、拉蒂诺病毒、马邱波病毒、奥利华斯病毒、巴拉那病毒、皮钦德病毒、皮里陶病毒、萨比亚病毒、塔卡里伯病毒、太米阿米病毒、怀特沃特阿罗约病毒、查帕雷病毒、卢约病毒、汉坦病毒、辛诺柏病毒、道格比病毒、布尼奥罗病毒、裂谷热病毒、拉克罗斯病毒、加利福尼亚脑炎病毒、克里米亚
‑
刚果出血热(CCHF)病毒、埃博拉病毒、马尔堡病毒、委内瑞拉马脑炎病毒(VEE)、东方马脑炎病毒(EEE)、西方马脑炎病毒(WEE...

【专利技术属性】
技术研发人员：DL福斯特曼，
申请(专利权)人：综合医院公司，
类型：发明
国别省市：