拮抗性抗肿瘤坏死因子受体超家族抗体制造技术

披露了拮抗性TNFR超家族多肽，如抗体及其抗原结合片段，以及这些多肽用于抑制调节性T细胞(T

【技术实现步骤摘要】
拮抗性抗肿瘤坏死因子受体超家族抗体


[0001]本专利技术涉及能够拮抗肿瘤坏死因子受体超家族成员如肿瘤坏死因子受体2的多肽，如抗体及其抗原结合片段。本专利技术的多肽可以用于调整调节性T细胞的活性，例如在免疫治疗领域中用于治疗细胞增殖性障碍和传染性疾病。

技术介绍

[0002]天然存在和基因工程化的T淋巴细胞的使用是用于改善各种人类病理学的一个突出的范例。例如，尽管用于治疗癌症的传统治疗平台包括肿瘤块的手术切除、放射疗法以及化学治疗剂的施用(Shewach，Chem.Rev.[化学评论]，109:2859
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2861，2009)，但近十年来已经见证了过继性免疫治疗的应在癌症治疗方案中的复兴。随着嵌合抗原受体(CAR
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T)治疗的出现，已经出现了向患者输注自体和同种异体肿瘤反应性T细胞的新方法(June，J.Clin.Invest.[临床研究杂志]，117:1466
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1476，2007)。CAR
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T疗法利用获得性免疫应答的资源以促进癌细胞细胞毒性并根除肿瘤物质。过继性免疫治疗中的一个常见主题是使用T细胞，这些T细胞在显示不同肿瘤抗原的细胞中表现出选择性地增强细胞毒性的能力。这种技术的实例包括肿瘤浸润淋巴细胞(Dudley等人，J.Immunother.[免疫治疗杂志]，26:332
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342，2003)以及自体或同种异体T细胞的施用，这些T细胞已被遗传地重新工程化以表现出与肿瘤特异性抗原的反应性(Yee等人，PNAS.[美国国家科学院院刊]，99:16168
‑
16173，2002)。
[0003]尽管存在基于T淋巴细胞的癌症免疫治疗的希望，但是该治疗平台的发展受到免疫系统抑制对自身细胞的免疫攻击的自然倾向的阻碍。与所有有核人类细胞一样，癌细胞表达将这些细胞与外来细胞区分开的I类主要组织相容性复合体(MHC)蛋白。为了防止细胞自相残杀，已经进化出调节性T细胞(T
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reg细胞)，其抑制对“自身”MHC抗原表现出反应性的T细胞的活性。T
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reg细胞代表了一种异质类型的T细胞，它们可以基于其独特的表面蛋白呈递来区分。T
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reg细胞的最好理解的群体包括CD4+、CD25+、FoxP3+T
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reg细胞和CD17+T
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reg细胞。这些细胞介导自体反应性T细胞的抑制的确切机制是正在进行的研究的主题，尽管已经显示某些类型的T
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reg细胞抑制靶T细胞中增殖诱导性细胞因子IL
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2的产生并且可以借助CD25(IL
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2受体的亚结构域)对IL
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2的亲和力另外地从自体反应性细胞中隔离IL
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2(Josefowicz等人，Ann.Rev.Immun.[免疫学年度评论]，30:531
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564，2012)。
[0004]尽管T
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reg细胞在维持外周耐受中发挥重要作用，但是构成这些细胞调节自体反应性T细胞活性的能力的相同生物化学特征也通过抑制肿瘤反应性T淋巴细胞的活性来破坏过继性免疫治疗和天然免疫应答。T
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reg细胞活性的化学调节剂的发展一直是许多药理学研究的主题，因为获得能够抑制T
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reg介导的T细胞抑制的药剂可以极大地改善过继性癌症免疫治疗的范围和功效，并且提高免疫系统根除引起传染性疾病的致病生物体的能力。
[0005]已经在T
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reg细胞表面上将肿瘤坏死因子受体(TNFR)亚型1和2鉴定为决定细胞命运的信号转导分子。例如，TNFR1的活化增强半胱天冬酶信号级联并终止于T
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reg凋亡，而TNFR2的活化通过丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号传导途径诱导信号传导，该信号传导途
径通过TRAF2/3和NFκB介导的基因的转录而策划信号传导，该基因的转录促进细胞凋亡逃逸和细胞增殖。由于其在指导细胞存活和生长中的作用，TNFR2代表了用于阻止肿瘤反应性T淋巴细胞的免疫检测的有吸引力的靶标。因此，目前需要能够阻止T
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reg细胞存活和增殖的疗法，用于靶向细胞增殖性障碍如癌症和各种各样的传染性疾病的治疗。

技术实现思路

[0006]本专利技术提供了拮抗性肿瘤坏死因子受体2(TNFR2)抗体及其抗原结合片段，如特异性结合人TNFR2内的含有KCRPG序列(SEQ ID NO:19)的一个或多个残基的表位或在非人灵长类动物(例如野牛或牛，如本文所述)的TNFR2中的等效表位的那些，以及不特异性结合人TNFR2内的含有KCSPG序列(SEQ ID NO:12)的表位或非人灵长类动物的TNFR2中的等效表位的那些。此外，本专利技术的特征在于抑制其他TNFR超家族成员的活性的抗体及其抗原结合片段，如以反平行二聚体构型结合这些蛋白质的抗体及其抗原结合片段。本文所述的抗体及其抗原结合片段可以用于治疗各种病症，包括癌症和传染性疾病。
[0007]本文披露了能够特异性结合人TNFR2的多肽(如单链多肽、抗体或其抗原结合片段)，所述多肽包含互补决定区
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重链1(CDR
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H1)和源自中性TNFR2抗体的CDR
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H2以及具有以下氨基酸序列的CDR
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H3：JZ1JZ2Z4JZ3JZ5(J)2Z5Z2Z5、JZ1JZ2Z4Z3Z5(J)2Z5Z2Z5(J)2、JRJDGJSJY(J)2FDJ(SEQ ID NO:278)、JRJDGSY(J)2FD(J)3(SEQ ID NO:279)、QZ1VZ2Z4YZ3SZ5WYZ5Z2Z5(SEQ ID NO:265)或AZ1DZ2Z4Z3Z5SPZ5Z2Z5WG(SEQ ID NO:266)，其中
[0008]每个J独立地是天然存在的氨基酸；
[0009]每个Z1独立地是在生理pH下含有阳离子侧链的天然存在的氨基酸，如赖氨酸、精氨酸和组氨酸；
[0010]每个Z2独立地是在生理pH下含有阴离子侧链的天然存在的氨基酸，如天冬氨酸和谷氨酸；
[0011]每个Z3独立地是在生理pH下含有极性不带电荷的侧链的天然存在的氨基酸，如丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺和谷氨酰胺；
[0012]每个Z4独立地是甘氨酸或丙氨酸；并且
[0013]每个Z5独立地是含有疏水性侧链的天然存在的氨基酸，如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸和甲硫氨酸、色氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸。如在本文中在多肽公式的背景下使用的，下标符号中的数字字符指明在公式中存在的前面氨基酸的量，并且上标符号中的数字字符指明在公式中存在的前面氨基酸的类型。
[0014]本文披露了能够特异性结合人TNFR2的多肽，如单链多肽、抗体或其抗原结合片段。所述多肽(例如抗体及其抗原结合片段)可以含有以下CDR中的一个或多个或全部：
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种能够特异性结合人TNFR2的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含以下CDR：(a)具有氨基酸序列GJTF(J)2Y(SEQ ID NO:276)或GJTF(J)2YJ(SEQ ID NO:277)的CDR
‑
H1；(b)具有氨基酸序列(J)3GSJ或(J)5GSJ的CDR
‑
H2；(c)具有氨基酸序列JRJDGJSJY(J)2FDJ(SEQ ID NO:278)或JRJDGSY(J)2FD(J)3(SEQ ID NO:279)的CDR
‑
H3；(d)具有氨基酸序列(J)9Y或(J)5Y的CDR
‑
L1；(e)具有氨基酸序列(J)6S或(J)2S的CDR
‑
L2；以及(f)具有氨基酸序列(J)5Y(J)2T或(J)3Y(J)4T的CDR
‑
L3；其中每个J独立地是天然存在的氨基酸，并且所述抗体或其抗原结合片段包含非天然恒定区。2.一种能够特异性结合人TNFR2的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含以下CDR：(a)具有氨基酸序列Z4FZ3Z5SSZ5或Z4YZ3Z5TDZ5X的CDR
‑
H1；(b)具有氨基酸序列SSGZ4Z3Y(SEQ ID NO:263)或VDPEYZ4Z3T(SEQ ID NO:264)的CDR
‑
H2；(c)具有氨基酸序列QZ1VZ2Z4YZ3SZ5WYZ5Z2Z5(SEQ ID NO:265)或AZ1DZ2Z4Z3Z5SPZ5Z2Z5WG(SEQ ID NO:266)的CDR
‑
H3；(d)具有氨基酸序列SASSSVYYMZ5(SEQ ID NO:267)或QNINKZ5(SEQ ID NO:268)的CDR
‑
L1；(e)具有氨基酸序列STSNLAZ3(SEQ ID NO:269)、TYZ3或YTZ3的CDR
‑
L2；以及(f)具有氨基酸序列QQRRNZ5PYZ3(SEQ ID NO:270)或CLQZ5VNLXZ3(SEQ ID NO:271)的CDR
‑
L3；其中每个Z1独立地是在生理pH下包含阳离子侧链的氨基酸；每个Z2独立地是在生理pH下包含阴离子侧链的氨基酸；每个Z3独立地是在生理pH下包含极性不带电荷的侧链的氨基酸；每个Z4独立地是甘氨酸或丙氨酸；每个Z5独立地是包含疏水性侧链的氨基酸；每个X独立地是亮氨酸或异亮氨酸，并且所述抗体或其抗原结合片段包含非天然恒定区。3.一种能够特异性结合人TNFR2的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含以下CDR：(a)具有氨基酸序列GFTFSSY(SEQ ID NO:23)、GYTFTDYX(SEQ ID NO:257)或相对于所述序列具有多达两个氨基酸取代的氨基酸序列的CDR
‑
H1；(b)具有氨基酸序列SSGGSY(SEQ ID NO:24)、VDPEYGST(SEQ IDNO:258)或相对于所述序列具有多达两个氨基酸取代的氨基酸序列的CDR
‑
H2；(c)具有氨基酸序列QRVDGYSSYWYFDV(SEQ ID NO:25)、ARDDGSYSPFDYWG(SEQ ID NO:259)或相对于所述序列具有多达两个氨基酸取代的氨基酸序列的CDR
‑
H3；
(d)具有氨基酸序列SASSSVYYMY(SEQ ID NO:...

【专利技术属性】
技术研发人员：DL福斯特曼，
申请(专利权)人：综合医院公司，
类型：发明
国别省市：