ROR1结合蛋白及其用途制造技术

本发明专利技术涉及疾病治疗领域，具体而言，本发明专利技术涉及抗ROR1的抗体或其抗原结合片段，编码它们的核酸分子，制备它们的方法。本发明专利技术的抗ROR1抗体或其抗原结合片段对ROR1具有高特异性和高亲和力，能够有效结合ROR1并介导杀伤ROR1表达细胞。因此，本发明专利技术进一步涉及包含所述抗体或其抗原结合片段的药物组合物，以及其在制备药物中的用途，所述药物用于预防和/或治疗肿瘤。治疗肿瘤。治疗肿瘤。

【技术实现步骤摘要】
ROR1结合蛋白及其用途


[0001]本专利技术属于治疗性单克隆抗体领域，更具体地，本专利技术涉及一种针对ROR1的抗体；还涉及所述抗体在治疗疾病中的用途。
技术背景
[0002]受体酪氨酸激酶(receptor tyrosine kinase,RTKs)是作用于细胞因子、生长因子、激素和其他信号分子受体的一种多基团跨膜蛋白，在多种细胞过程中起重要作用，包括生长、分化、血管生成以及多种癌症的发展进程。受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(receptor tyrosine kinase
‑
like orphan receptor 1,ROR1)是受体RTKs家族成员之一，其与生长因子受体的酪氨酸激酶结构域具有很高的同源性,低表达于胚胎发育过程中,而高表达于多种实体和血液恶性肿瘤中，包括各类白血病、非霍奇金淋巴瘤、乳腺癌、卵巢癌、黑色素瘤、肺腺癌等。因此，ROR1是一种具有广谱抗癌潜力的新药靶点。
[0003]近几年，靶向ROR1的基因工程抗体都已经被陆续的开发用于肿瘤免疫治疗的研究中，包括单链片段可变抗体(single
‑
chain fragment variables,scFvs)、嵌合抗体(chimeric antibody)、Fab类抗体、抗体药物偶联物(antibody
‑
drug conjugate,ADC)、嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)和双特异性抗体(bispecific antibody,BiAb)等。目前，研究进展较快的抗ROR1单抗为Oncternal Therapeutics公司的cirmtuzumab，其临床数据具有良好的抗癌效果，可以较好的抑制慢性白血病肿瘤细胞的增殖抑制、迁移和存活。
[0004]现暂无靶向ROR1抗体药物上市，因此，发展具有更高的特异性、更低的毒副作用、更优的临床药效、更方便给药方式的的抗靶向ROR1抗体是迫切而必要的，这将给患者提供更多的用药选择。

技术实现思路

[0005]在本申请中，专利技术人开发了具有优良性质的鼠源抗体，其能够特异性识别/结合ROR1，而不结合ROR2。在此基础上，专利技术人又付出了大量的创造性劳动，对该鼠源抗体进行了深入的研究和改造，从而开发了该鼠源抗体的高亲和力嵌合抗体，具有用于预防和治疗肿瘤的潜力。
[0006]本专利技术的抗体
[0007]在一个方面，本专利技术提供了一种能够特异性结合ROR1的抗体或其抗原结合片段。
[0008]在一些实施方案中，本专利技术提供了一种能够特异性结合ROR1胞外结构域(ECD)的抗体或其抗原结合片段。
[0009]在一些实施方案中，其中所述抗体或其抗原结合片段包含如下的互补决定区(CDRs)：
[0010](a)SEQ ID NO：1所示的重链可变区(VH)中含有的CDR
‑
H1、CDR
‑
H2以及CDR
‑
H3；和/或
[0011]SEQ ID NO：2所示的轻链可变区(VL)中含有的CDR
‑
L1、CDR
‑
L2以及CDR
‑
L3；
[0012]或
[0013](b)SEQ ID NO：3所示的重链可变区(VH)中含有的CDR
‑
H1、CDR
‑
H2以及CDR
‑
H3；和/或
[0014]SEQ ID NO：4所示的轻链可变区(VL)中含有的CDR
‑
L1、CDR
‑
L2以及CDR
‑
L3；
[0015]或
[0016](c)SEQ ID NO：5所示的重链可变区(VH)中含有的CDR
‑
H1、CDR
‑
H2以及CDR
‑
H3；和/或
[0017]SEQ ID NO：6所示的轻链可变区(VL)中含有的CDR
‑
L1、CDR
‑
L2以及CDR
‑
L3；
[0018]或
[0019](d)SEQ ID NO：7所示的重链可变区(VH)中含有的CDR
‑
H1、CDR
‑
H2以及CDR
‑
H3；和/或
[0020]SEQ ID NO：8所示的轻链可变区(VL)中含有的CDR
‑
L1、CDR
‑
L2以及CDR
‑
L3；
[0021]或
[0022](e)SEQ ID NO：9所示的重链可变区(VH)中含有的CDR
‑
H1、CDR
‑
H2以及CDR
‑
H3；和/或
[0023]SEQ ID NO：10所示的轻链可变区(VL)中含有的CDR
‑
L1、CDR
‑
L2以及CDR
‑
L3；
[0024]或
[0025](f)SEQ ID NO：11所示的重链可变区(VH)中含有的CDR
‑
H1、CDR
‑
H2以及CDR
‑
H3；和/或
[0026]SEQ ID NO：12所示的轻链可变区(VL)中含有的CDR
‑
L1、CDR
‑
L2以及CDR
‑
L3；
[0027]或
[0028](g)SEQ ID NO：13所示的重链可变区(VH)中含有的CDR
‑
H1、CDR
‑
H2以及CDR
‑
H3；和/或
[0029]SEQ ID NO：14所示的轻链可变区(VL)中含有的CDR
‑
L1、CDR
‑
L2以及CDR
‑
L3；
[0030]或
[0031](h)下述重链可变区(VH)中含有的CDR
‑
H1、CDR
‑
H2以及CDR
‑
H3，和/或下述轻链可变区(VL)中含有的CDR
‑
L1、CDR
‑
L2以及CDR
‑
L3，其中，所述重链可变区(VH)和/或轻链可变区(VL)与(a)至(g)任一所述的重链可变区和/或轻链可变区相比，至少一个CDR含有突变，所述突变为一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)；优选地，所述的置换为保守置换。
[0032]在某些优选的实施方案中，所述CDR根据Kabat，IMGT，Chothia或AbM编号系统定义；优选地，所述抗体或其抗原结合片段的VH和/或VL中包括来自人或鼠的免疫球蛋白的构架区(FRs)，优选地，所述抗体或其抗原结合片段结合人R本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.特异性结合ROR1的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段包含如下的互补决定区(CDRs)：(a)SEQ ID NO：1所示的重链可变区(VH)中含有的CDR
‑
H1、CDR
‑
H2以及CDR
‑
H3；和/或SEQ ID NO：2所示的轻链可变区(VL)中含有的CDR
‑
L1、CDR
‑
L2以及CDR
‑
L3；或(b)SEQ ID NO：3所示的重链可变区(VH)中含有的CDR
‑
H1、CDR
‑
H2以及CDR
‑
H3；和/或SEQ ID NO：4所示的轻链可变区(VL)中含有的CDR
‑
L1、CDR
‑
L2以及CDR
‑
L3；或(c)SEQ ID NO：5所示的重链可变区(VH)中含有的CDR
‑
H1、CDR
‑
H2以及CDR
‑
H3；和/或SEQ ID NO：6所示的轻链可变区(VL)中含有的CDR
‑
L1、CDR
‑
L2以及CDR
‑
L3；或(d)SEQ ID NO：7所示的重链可变区(VH)中含有的CDR
‑
H1、CDR
‑
H2以及CDR
‑
H3；和/或SEQ ID NO：8所示的轻链可变区(VL)中含有的CDR
‑
L1、CDR
‑
L2以及CDR
‑
L3；或(e)SEQ ID NO：9所示的重链可变区(VH)中含有的CDR
‑
H1、CDR
‑
H2以及CDR
‑
H3；和/或SEQ ID NO：10所示的轻链可变区(VL)中含有的CDR
‑
L1、CDR
‑
L2以及CDR
‑
L3；或(f)SEQ ID NO：11所示的重链可变区(VH)中含有的CDR
‑
H1、CDR
‑
H2以及CDR
‑
H3；和/或SEQ ID NO：12所示的轻链可变区(VL)中含有的CDR
‑
L1、CDR
‑
L2以及CDR
‑
L3；或(g)SEQ ID NO：13所示的重链可变区(VH)中含有的CDR
‑
H1、CDR
‑
H2以及CDR
‑
H3；和/或SEQ ID NO：14所示的轻链可变区(VL)中含有的CDR
‑
L1、CDR
‑
L2以及CDR
‑
L3；或(h)下述重链可变区(VH)中含有的CDR
‑
H1、CDR
‑
H2以及CDR
‑
H3，和/或下述轻链可变区(VL)中含有的CDR
‑
L1、CDR
‑
L2以及CDR
‑
L3；，其中，所述重链可变区(VH)和/或轻链可变区(VL)与(a)至(g)任一所述的重链可变区和/或轻链可变区相比，至少一个CDR含有突变，所述突变为一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)；优选地，所述的置换为保守置换；优选地，所述CDR根据Kabat，IMGT，Chothia或AbM编号系统定义；优选地，所述抗体或其抗原结合片段结合人ROR1。2.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段包含：(1)下述重链可变区(VH)和/或轻链可变区(VL)，其中CDR按IMGT编号系统定义：(a)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:15所示的CDR
‑
H1，序列为SEQ ID NO:16所示的CDR
‑
H2，序列为SEQ ID NO:17所示的CDR
‑
H3；和/或，包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:18所示的CDR
‑
L1，序列为SEQ ID NO:19所示的CDR
‑
L2，序列为SEQ ID NO:20所示的CDR
‑
L3；或(b)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:39所示的CDR
‑
H1，序列为
SEQ ID NO:40所示的CDR
‑
H2，序列为SEQ ID NO:41所示的CDR
‑
H3；和/或，包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:42所示的CDR
‑
L1，序列为SEQ ID NO:43所示的CDR
‑
L2，序列为SEQ ID NO:44所示的CDR
‑
L3；或(c)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:63所示的CDR
‑
H1，序列为SEQ ID NO:64所示的CDR
‑
H2，序列为SEQ ID NO:65所示的CDR
‑
H3；和/或，包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:66所示的CDR
‑
L1，序列为SEQ ID NO:67所示的CDR
‑
L2，序列为SEQ ID NO:68所示的CDR
‑
L3；或(d)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:87所示的CDR
‑
H1，序列为SEQ ID NO:88所示的CDR
‑
H2，序列为SEQ ID NO:89所示的CDR
‑
H3；和/或，包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:90所示的CDR
‑
L1，序列为SEQ ID NO:91所示的CDR
‑
L2，序列为SEQ ID NO:92所示的CDR
‑
L3；或(e)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:111所示的CDR
‑
H1，序列为SEQ ID NO:112所示的CDR
‑
H2，序列为SEQ ID NO:113所示的CDR
‑
H3；和/或，包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:114所示的CDR
‑
L1，序列为SEQ ID NO:115所示的CDR
‑
L2，序列为SEQ ID NO:116所示的CDR
‑
L3；或(f)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:135所示的CDR
‑
H1，序列为SEQ ID NO:136所示的CDR
‑
H2，序列为SEQ ID NO:137所示的CDR
‑
H3；和/或，包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:138所示的CDR
‑
L1，序列为SEQ ID NO:139所示的CDR
‑
L2，序列为SEQ ID NO:140所示的CDR
‑
L3；或(g)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:159所示的CDR
‑
H1，序列为SEQ ID NO:160所示的CDR
‑
H2，序列为SEQ ID NO:161所示的CDR
‑
H3；和/或，包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:162所示的CDR
‑
L1，序列为SEQ ID NO:163所示的CDR
‑
L2，序列为SEQ ID NO:164所示的CDR
‑
L3；或(2)下述重链可变区(VH)和/或轻链可变区(VL)，其中CDR按AbM编号系统定义：(a)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:21所示的CDR
‑
H1，序列为SEQ ID NO:22所示的CDR
‑
H2，序列为SEQ ID NO:23所示的CDR
‑
H3；和/或，包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:24所示的CDR
‑
L1，序列为SEQ ID NO:25所示的CDR
‑
L2，序列为SEQ ID NO:26所示的CDR
‑
L3；或(b)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:45所示的CDR
‑
H1，序列为SEQ ID NO:46所示的CDR
‑
H2，序列为SEQ ID NO:47所示的CDR
‑
H3；和/或，包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:48所示的CDR
‑
L1，序列为SEQ ID NO:49所示的CDR
‑
L2，序列为SEQ ID NO:50所示的CDR
‑
L3；
或(c)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:69所示的CDR
‑
H1，序列为SEQ ID NO:70所示的CDR
‑
H2，序列为SEQ ID NO:71所示的CDR
‑
H3；和/或，包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:72所示的CDR
‑
L1，序列为SEQ ID NO:73所示的CDR
‑
L2，序列为SEQ ID NO:74所示的CDR
‑
L3；或(d)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:93所示的CDR
‑
H1，序列为SEQ ID NO:94所示的CDR
‑
H2，序列为SEQ ID NO:95所示的CDR
‑
H3；和/或，包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:96所示的CDR
‑
L1，序列为SEQ ID NO:97所示的CDR
‑
L2，序列为SEQ ID NO:98所示的CDR
‑
L3；或(e)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:117所示的CDR
‑
H1，序列为SEQ ID NO:118所示的CDR
‑
H2，序列为SEQ ID NO:119所示的CDR
‑
H3；和/或，包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:120所示的CDR
‑
L1，序列为SEQ ID NO:121所示的CDR
‑
L2，序列为SEQ ID NO:122所示的CDR
‑
L3；或(f)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:141所示的CDR
‑
H1，序列为SEQ ID NO:142所示的CDR
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H2，序列为SEQ ID NO:143所示的CDR
‑
H3；和/或，包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:144所示的CDR
‑
L1，序列为SEQ ID NO:145所示的CDR
‑
L2，序列为SEQ ID NO:146所示的CDR
‑
L3；或(g)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:165所示的CDR
‑
H1，序列为SEQ ID NO:166所示的CDR
‑
H2，序列为SEQ ID NO:167所示的CDR
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H3；和/或，包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:168所示的CDR
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L1，序列为SEQ ID NO:169所示的CDR
‑
L2，序列为SEQ ID NO:170所示的CDR
‑
L3；或(3)下述重链可变区(VH)和/或轻链可变区(VL)，其中CDR按Kabat编号系统定义：(a)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:27所示的CDR
‑
H1，序列为SEQ ID NO:28所示的CDR
‑
H2，序列为SEQ ID NO:29所示的CDR
‑
H3；和/或，包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:30所示的CDR
‑
L1，序列为SEQ ID NO:31所示的CDR
‑
L2，序列为SEQ ID NO:32所示的CDR
‑
L3；或(b)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:51所示的CDR
‑
H1，序列为SEQ ID NO:52所示的CDR
‑
H2，序列为SEQ ID NO:53所示的CDR
‑
H3；和/或，包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:54所示的CDR
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L1，序列为SEQ ID NO:55所示的CDR
‑
L2，序列为SEQ ID NO:56所示的CDR
‑
L3；或(c)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:75所示的CDR
‑
H1，序列为SEQ ID NO:76所示的CDR
‑
H2，序列为SEQ ID NO:77所示的CDR
‑
H3；和/或，
包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:78所示的CDR
‑
L1，序列为SEQ ID NO:79所示的CDR
‑
L2，序列为SEQ ID NO:80所示的CDR
‑
L3；或(d)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:99所示的CDR
‑
H1，序列为SEQ ID NO:100所示的CDR
‑
H2，序列为SEQ ID NO:101所示的CDR
‑
H3；和/或，包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:102所示的CDR
‑
L1，序列为SEQ ID NO:103所示的CDR
‑
L2，序列为SEQ ID NO:104所示的CDR
‑
L3；或(e)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:123所示的CDR
‑
H1，序列为SEQ ID NO:124所示的CDR
‑
H2，序列为SEQ ID NO:125所示的CDR
‑
H3；和/或，包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:126所示的CDR
‑
L1，序列为SEQ ID NO:127所示的CDR
‑
L2，序列为SEQ ID NO:128所示的CDR
‑
L3；或(f)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:147所示的CDR
‑
H1，序列为SEQ ID NO:148所示的CDR
‑
H2，序列为SEQ ID NO:149所示的CDR
‑
H3；和/或，包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:150所示的CDR
‑
L1，序列为SEQ ID NO:151所示的CDR
‑
L2，序列为SEQ ID NO:152所示的CDR
‑
L3；或(g)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:171所示的CDR
‑
H1，序列为SEQ ID NO:172所示的CDR
‑
H2，序列为SEQ ID NO:173所示的CDR
‑
H3；和/或，包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:174所示的CDR
‑
L1，序列为SEQ ID NO:175所示的CDR
‑
L2，序列为SEQ ID NO:176所示的CDR
‑
L3；或(4)下述重链可变区(VH)和/或轻链可变区(VL)，其中CDR按Chothia编号系统定义：(a)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:33所示的CDR
‑
H1，序列为SEQ ID NO:34所示的CDR
‑
H2，序列为SEQ ID NO:35所示的CDR
‑
H3；和/或，包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:36所示的CDR
‑
L1，序列为SEQ ID NO:37所示的CDR
‑
L2，序列为SEQ ID NO:38所示的CDR
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L3；或(b)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:57所示的CDR
‑
H1，序列为SEQ ID NO:58所示的CDR
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H2，序列为SEQ ID NO:59所示的CDR
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H3；和/或，包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:60所示的CDR
‑
L1，序列为SEQ ID NO:61所示的CDR
‑
L2，序列为SEQ ID NO:62所示的CDR
‑
L3；或(c)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:81所示的CDR
‑
H1，序列为SEQ ID NO:82所示的CDR
‑
H2，序列为SEQ ID NO:83所示的CDR
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H3；和/或，包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:84所示的CDR
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L1，序列为SEQ ID NO:85所示的CDR
‑

【专利技术属性】
技术研发人员：田海军，陈扬徳，张盈华，朱志强，吴文慧，
申请(专利权)人：科纳思药业有限公司，
类型：发明
国别省市：