一种HIF-1α纳米抗体、检测试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种HIF

【技术实现步骤摘要】
一种HIF
‑1α
纳米抗体、检测试剂盒及其应用


[0001]本专利技术属于属于生物工程
，涉及一种HIF
‑
1α纳米抗体、检测试剂盒及其应用。

技术介绍

[0002]肿瘤细胞的恶性程度表现为肿瘤细胞的无限增殖能力和转移特性。肿瘤细胞快速增殖，其需氧量也增加，但由于氧气弥散的减少，肿瘤细胞处于低氧微环境，因此，低氧是肿瘤微环境的显著特征之一，能够促进并提高肿瘤的侵袭性。在低氧微环境中，肿瘤干/祖细胞及其子代通过诱导低氧区血管形成化较差的肿瘤细胞出现更具侵略性和生存优势的基因表型，肿瘤干细胞/祖细胞及其后代在疾病进展和转移过程中常发生低氧，HIF
‑
1α和HIF
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2α的表达上调和活性增强。相关研究显示，肿瘤组织中HIF
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1α的高表达增加了肿瘤细胞的侵袭能力。已有研究表明，可通过调节结直肠癌、卵巢癌、胰腺癌、肝癌、胃癌组织中的HIF
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1α水平，降低癌细胞的迁移和侵袭能力。然而目前存在检测HIF
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1α表达不准确的问题，急需开发一种能够准确检测HIF
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1α表达的试剂。
[0003]骆驼科动物(羊驼、骆驼)和软骨鱼体内的一种天然缺失重链但仍然具有生物活性的特异性抗体称单域抗体，单域抗体的抗原结合位点(VHH)具有独立的抗原识别能力，独立表达的VHH又被称为纳米抗体。纳米抗体因具有分子量小，结构简单，理化性质稳定等优点，使其能够穿过动物机体内的一些保护性屏障进入发病部位发挥作用，能够结合一些隐蔽的抗原表位等特性。然而针对检测HIF
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1α表达水平的纳米抗体几乎还未有报道。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种HIF
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1α纳米抗体、检测试剂盒及其应用，HIF
‑
1α纳米抗体与HIF
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1α具有较高的特异性结合能力，为准确检测细胞中HIF
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1α表达水平提供了基础。
[0005]本专利技术提供了一种HIF
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1α纳米抗体，氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。
[0006]优选的，编码所述HIF
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1α纳米抗体的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。
[0007]本专利技术提供了所述的HIF
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1α纳米抗体在制备结合HIF
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1α蛋白的试剂或试剂盒中的应用。
[0008]优选的，所述HIF
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1α纳米抗体的试剂或试剂盒的检测技术包括以下一种或几种方法：免疫组织化学方法、Western Blotting、ELISA法、免疫荧光染色和胶体金免疫亲和层析法。
[0009]本专利技术提供了一种基于Western Blotting法检测HIF
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1α表达的试剂盒，包括以下组分：
[0010]所述HIF
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1α纳米抗体、HRP Anti His
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Tag Mouse和检测试剂。
[0011]优选的，所述检测试剂包括一抗稀释液、二抗稀释液、电转移缓冲液、WB洗脱液、WB封闭液、硝酸纤维素膜、蛋白染色试剂、蛋白电泳上样缓冲液、显色剂、SDS
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PAGE凝胶制备用
试剂和细胞裂解液。
[0012]本专利技术提供了一种基于免疫组织化学法检测检测HIF
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1α表达的试剂盒，包括以下组分：
[0013]所述HIF
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1α纳米抗体、HRP Anti His
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Tag Mouse、检测用试剂。
[0014]优选的，所述检测用试剂包括固定剂、缓冲液和显色剂。
[0015]本专利技术提供了一种HIF
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1α纳米抗体，所述HIF
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1α纳米抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。本专利技术利用噬菌体展示技术能将表达的外源多肽或蛋白以融合蛋白的形式展示在噬菌体的表面，进而通过亲和富集法筛选表达有特异性蛋白质的噬菌体，得到HIF
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1α纳米抗体。本专利技术所述HIF
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1α纳米抗体具有分子量小、理化特征稳定、亲和力高和结构简单易于表达和纯化的特点，并且较同批筛选的纳米抗体具有较高的特异性结合HIF
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1α的能力，可用于免疫组织化学和Western Blotting法检测组织中HIF
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1α的表达，在疾病的诊断与治疗中有较大的应用前景。
附图说明
[0016]图1为本专利技术提供的Western Blotting对纯化的HIF
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1α纳米抗体检测结果；
[0017]图2为本专利技术提供的Western Blot法用HIF
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1α纳米抗体检测脑组织中HIF
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1α蛋白的表达检测结果；
[0018]图3为本专利技术提供的免疫组织化学法用HIF
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1α纳米抗体检测小鼠睾丸组织中HIF
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1α表达分布结果。
具体实施方式
[0019]本专利技术提供了一种HIF
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1α纳米抗体，所述HIF
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1α纳米抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示：ESGGGLVQPGGSLRPSCAASGFTFSMYVMRWYRQAPGKERELVASVADDGNSTIFADSVKGRFTISRDNAKNTIHLEMNSLKPEDTADYYCNALNKYDYRIQKWGKGTLVTVSS。
[0020]在本专利技术中，编码所述HIF
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1α纳米抗体的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示：GAGTCGGGAGGAGGCTTGGTGCAACCTGGGGGGTCTCTGAGACCCTCCTGTGCCGCCTCCGGATTCACCTTCAGTATGTATGTCATGAGGTGGTACCGTCAGGCTCCAGGGAAGGAGCGCGAGTTGGTCGCCTCTGTTGCTGATGATGGAAATAGCACAATCTTTGCGGACTCCGTAAAGGGACGATTCACCATCTCCAGAGACAATGCCAAGAACACGATACATCTAGAAATGAACAGCCTGAAACCTGAGGACACGGCCGATTATTACTGCAACGCGCTGAATAAGTACGACTACCGTATACAGAAGTGGGGCAAAGGGACCCTAGTCACCGTCTCCTCA。
[0021]在本专利技术中，所述HIF
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1α纳米抗体的筛选方法，优选包括以下步骤：
[0022]1)将黑素瘤纳米库进行第一轮淘洗，得到B16
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HIF
‑
1α
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VHH1；
[0023]所述第一轮淘洗的HIF本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种HIF
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1α纳米抗体，其特征在于，所述HIF
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1α纳米抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。2.根据权利要求1所述的HIF
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1α纳米抗体，其特征在于，编码所述HIF
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1α纳米抗体的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。3.权利要求1或2所述的HIF
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1α纳米抗体在制备结合HIF
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1α蛋白的试剂或试剂盒中的应用。4.权利要求3所述的应用，其特征在于，所述HIF
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1α纳米抗体的试剂或试剂盒的检测技术包括以下一种或几种方法：免疫组织化学方法、Western Blotting、ELISA法、免疫荧光染色和胶体金免疫亲和层析法。5.一种基于Western Blotting法检测HIF
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【专利技术属性】
技术研发人员：何金鑫，李佳敏，范瑞文，
申请(专利权)人：山西农业大学，
类型：发明
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