特异性结合CD33的嵌合抗原受体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及细胞免疫治疗领域，具体而言，本发明专利技术涉及特异性结合CD33的抗体或其抗原结合片段以及包含所述抗体或其抗原结合片段的嵌合抗原受体(CAR)及偶联物。本发明专利技术还涉及编码这种CAR的序列和表达载体，包括这种CAR的经改造的免疫细胞以及制备这种经改造的免疫细胞的方法。本发明专利技术还涉及这些抗体，偶联物，CAR和经改造的免疫细胞如T细胞、NK细胞用于治疗急性髓系白血病(AML)、慢性髓系白血病(CML)、骨髓增生异常综合征(MDS)等髓系恶性肿瘤和恶性淋巴瘤的用途及方法。性淋巴瘤的用途及方法。性淋巴瘤的用途及方法。

【技术实现步骤摘要】
特异性结合CD33的嵌合抗原受体及其应用


[0001]本专利技术涉及细胞免疫治疗领域，具体而言，本专利技术涉及特异性结合 CD33的抗体或其抗原结合片段以及包含所述抗体或其抗原结合片段的嵌合 抗原受体(CAR)及偶联物。本专利技术还涉及编码这种CAR的序列和表达载体， 包括这种CAR的经改造的免疫细胞以及制备这种经改造的免疫细胞的方法。 本专利技术还涉及这些抗体、偶联物、CAR和经改造的免疫细胞如T细胞、NK 细胞用于治疗急性髓系白血病(AML)、慢性髓系白血病(CML)、骨髓增 生异常综合征(MDS)等髓系恶性肿瘤和恶性淋巴瘤的用途及方法。

技术介绍

[0002]AML是一种常见的血液恶性肿瘤，是国内高发的恶性肿瘤之一，发病 率为1.6～2.3/10万人，而且有逐年增加的趋势，可发生于任何年龄，起病急 骤，进展迅速，自然存活期6月
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1年，已成为严重威胁人生命健康的一种凶 险性疾病。随着联合化疗、HSCT、靶向治疗的广泛展开，该病的缓解率较 以往有了显著提高，但整体长期生存率仍未达到预期目标，主要面临着化疗 耐药及缓解后早期本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.能够特异性结合CD33的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：(1a)如下三个根据Kabat编号系统所定义的重链CDRs：序列为SEQ ID NO：3或其变体的CDR
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H1；序列为SEQ ID NO：4或其变体的CDR
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H2；序列为SEQ ID NO：5或其变体的CDR
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H3；和/或，如下三个根据Kabat编号系统所定义的轻链CDRs：序列为SEQ ID NO：6或其变体的CDR
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L1；序列为SEQ ID NO：7或其变体的CDR
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L2；序列为SEQ ID NO：8或其变体的CDR
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L3；或(1b)如下三个根据IMGT编号系统所定义的重链CDRs：序列为SEQ ID NO：9或其变体的CDR
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H1；序列为SEQ ID NO：10或其变体的CDR
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H2；序列为SEQ ID NO：11或其变体的CDR
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H3；和/或，如下三个根据IMGT编号系统所定义的轻链CDRs：序列为SEQ ID NO：12或其变体的CDR
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L1；序列为SEQ ID NO：13或其变体的CDR
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L2；序列为SEQ ID NO：8或其变体的CDR
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L3；或(2a)如下三个根据Kabat编号系统所定义的重链CDRs：序列为SEQ ID NO：16或其变体的CDR
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H1；序列为SEQ ID NO：17或其变体的CDR
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H2；序列为SEQ ID NO：18或其变体的CDR
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H3；和/或，如下三个根据Kabat编号系统所定义的轻链CDRs：序列为SEQ ID NO：19或其变体的CDR
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L1；序列为SEQ ID NO：20或其变体的CDR
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L2；序列为SEQ ID NO：21或其变体的CDR
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L3；或(2b)如下三个根据IMGT编号系统所定义的重链CDRs：序列为SEQ ID NO：22或其变体的CDR
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H1；序列为SEQ ID NO：23或其变体的CDR
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H2；序列为SEQ ID NO：24或其变体的CDR
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H3；和/或，如下三个根据IMGT编号系统所定义的轻链CDRs：序列为SEQ ID NO：25或其变体的CDR
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L1；序列为SEQ ID NO：26或其变体的CDR
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L2；序列为SEQ ID NO：21或其变体的CDR
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L3；或(3a)如下三个根据Kabat编号系统所定义的重链CDRs：序列为SEQ ID NO：29或其变体的CDR
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H1；序列为SEQ ID NO：30或其变体的CDR
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H2；序列为SEQ ID NO：31或其变体的CDR
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H3；和/或，如下三个根据Kabat编号系统所定义的轻链CDRs：序列为SEQ ID NO：32或其变体的CDR
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L1；序列为SEQ ID NO：33或其变体的CDR
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L2；序列为SEQ ID NO：34或其变体的CDR
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L3；或(3b)如下三个根据IMGT编号系统所定义的重链CDRs：序列为SEQ ID NO：35或其变体的CDR
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H1；序列为SEQ ID NO：36或其变体的CDR
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H2；序列为SEQ ID NO：37或其变体的CDR
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H3；和/或，如下三个根据IMGT编号系统所定义的轻链CDRs：序列为SEQ ID NO：38或其变体的CDR
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L1；序列为SEQ ID NO：39或其变体的CDR
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L2；序列为SEQ ID NO：34或其变体的CDR
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L3；或(4a)如下三个根据Kabat编号系统所定义的重链CDRs：序列为SEQ ID NO：42或其变体的CDR
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H1；序列为SEQ ID NO：43或其变体的CDR
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H2；序列为SEQ ID NO：44或其变体的CDR
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H3；和/或，如下三个根据Kabat编号系统所定义的轻链CDRs：序列为SEQ ID NO：45或其变体的CDR
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L1；序列为SEQ ID NO：46或其变体的CDR
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L2；序列为SEQ ID NO：47或其变体的CDR
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L3；或
(4b)如下三个根据IMGT编号系统所定义的重链CDRs：序列为SEQ ID NO：48或其变体的CDR
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H1；序列为SEQ ID NO：49或其变体的CDR
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H2；序列为SEQ ID NO：50或其变体的CDR
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H3；和/或，如下三个根据IMGT编号系统所定义的轻链CDRs：序列为SEQ ID NO：51或其变体的CDR
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L1；序列为SEQ ID NO：39或其变体的CDR
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L2；序列为SEQ ID NO：47或其变体的CDR
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L3；其中，(1a)、(1b)、(2a)、(2b)、(3a)、(3b)、(4a)、(4b)任一项中所述的变体与其所源自的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)；优选地，所述的置换是保守置换；优选地，所述抗体或其抗原结合片段还包括来自人的构架区(FRs)；优选地，所述抗体或其抗原结合片段特异性结合人CD33。2.权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段包含：(a)如下六个根据Kabat编号系统所定义的重链和轻链CDRs：序列为SEQ ID NO：3或其变体的CDR
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H1；序列为SEQ ID NO：4或其变体的CDR
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H2；序列为SEQ ID NO：5或其变体的CDR
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H3；序列为SEQ ID NO：6或其变体的CDR
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L1；序列为SEQ ID NO：7或其变体的CDR
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L2；序列为SEQ ID NO：8或其变体的CDR
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L3；或(b)如下六个根据IMGT编号系统所定义的重链和轻链CDRs：序列为SEQ ID NO：9或其变体的CDR
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H1；序列为SEQ ID NO：10或其变体的CDR
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H2；序列为SEQ ID NO：11或其变体的CDR
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H3；序列为SEQ ID NO：12或其变体的CDR
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L1；序列为SEQ ID NO：13或其变体的CDR
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L2；序列为SEQ ID NO：8或其变体的CDR
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L3；其中，(a)或(b)中所述的变体与其所源自的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)；优选地，所述的置换是保守置换；优选地，所述抗体或其抗原结合片段包含：具有如SEQ ID NO:1所示的序列或其变体的VH和/或具有如SEQ ID NO:2所示的序列或其变体的VL；其中，所述变体与其所源自的序列相比具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性，或者与其所源自的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)；优选地，所述的置换是保守置换。3.权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段包含：(a)如下六个根据Kabat编号系统所定义的重链和轻链CDRs：序列为SEQ ID NO：16或其变体的CDR
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H1；序列为SEQ ID NO：17或其变体的CDR
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H2；序列为SEQ ID NO：18或其变体的CDR
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H3；序列为SEQ ID NO：19或其变体的CDR
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L1；序列为SEQ ID NO：20或其变体的CDR
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L2；序列为SEQ ID NO：21或其变体的CDR
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L3；或(b)如下六个根据IMGT编号系统所定义的重链和轻链CDRs：序列为SEQ ID NO：22或其变体的CDR
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H1；序列为SEQ ID NO：23或其变体的CDR
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H2；序列为SEQ ID NO：24或其变体的CDR
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H3；序列为SEQ ID NO：25或其变体的CDR
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L1；序列为SEQ ID NO：26或其变体的CDR
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L2；序列为SEQ ID NO：21或其变体的CDR
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L3；其中，(a)或(b)中所述的变体与其所源自的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)；优选地，所述的置换是保守置
换；优选地，所述抗体或其抗原结合片段包含：具有如SEQ ID NO:14所示的序列或其变体的VH和/或具有如SEQ ID NO:15所示的序列或其变体的VL；其中，所述变体与其所源自的序列相比具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性，或者与其所源自的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)；优选地，所述的置换是保守置换。4.权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段包含：(a)如下六个根据Kabat编号系统所定义的重链和轻链CDRs：序列为SEQ ID NO：29或其变体的CDR
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H1；序列为SEQ ID NO：30或其变体的CDR
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H2；序列为SEQ ID NO：31或其变体的CDR
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H3；序列为SEQ ID NO：32或其变体的CDR
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L1；序列为SEQ ID NO：33或其变体的CDR
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L2；序列为SEQ ID NO：34或其变体的CDR
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L3；或(b)如下六个根据IMGT编号系统所定义的重链和轻链CDRs：序列为SEQ ID NO：35或其变体的CDR
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H1；序列为SEQ ID NO：36或其变体的CDR
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H2；序列为SEQ ID NO：37或其变体的CDR
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H3；序列为SEQ ID NO：38或其变体的CDR
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L1；序列为SEQ ID NO：39或其变体的CDR
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L2；序列为SEQ ID NO：34或其变体的CDR
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L3；其中，(a)或(b)中所述的变体与其所源自的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)；优选地，所述的置换是保守置换；优选地，所述抗体或其抗原结合片段包含：具有如SEQ ID NO:27所示的序列或其变体的VH和/或具有如SEQ ID NO:28所示的序列或其变体的VL；其中，所述变体与其所源自的序列相比具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性，或者与其所源自的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)；优选地，所述的置换是保守置换。5.权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段包含：(a)如下六个根据Kabat编号系统所定义的重链和轻链CDRs：序列为SEQ ID NO：42或其变体的CDR
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H1；序列为SEQ ID NO：43或其变体的CDR
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H2；序列为SEQ ID NO：44或其变体的CDR
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H3；序列为SEQ ID NO：45或其变体的CDR
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L1；序列为SEQ ID NO：46或其变体的CDR
‑
L2；序列为SEQ ID NO：47或其变体的CDR
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L3；或(b)如下六个根据IMGT编号系统所定义的重链和轻链CDRs：序列为SEQ ID NO：48或其变体的CDR
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H1；序列为SEQ ID NO：49或其变体的CDR
‑
H2；序列为SEQ ID NO：50或其变体的CDR
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H3；序列为SEQ ID NO：51或其变体的CDR
‑
L1；序列为SEQ ID NO：39或其变体的CDR
‑
L2；序列为SEQ ID NO：47或其变体的CDR
‑
L3；其中，(a)或(b)中所述的变体与其所源自的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)；优选地，所述的置换是保守置换；
优选地，所述抗体或其抗原结合片段包含：具有如SEQ ID NO:40所示的序列或其变体的VH和/或具有如SEQ ID NO:41所示的序列或其变体的VL；其中，所述变体与其所源自的序列相比具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性，或者与其所源自的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)；优选地，所述的置换是保守置换。6.权利要求1
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5任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段选自骆驼Ig、IgNAR、Fab片段、Fab'片段、F(ab)'2片段、F(ab)'3片段、单链抗体(例如scFv、di
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scFv或(scFv)2)、微型抗体、双功能抗体、三功能抗体、四功能抗体、二硫键稳定的Fv蛋白(dsFv)和单结构域抗体(sdAb，纳米抗体)。7.权利要求1
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6任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段是单链抗体，例如scFv、di
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scFv或(scFv)2；优选地，所述抗体或其抗原结合片段包含：(1)具有如SEQ ID NO:1所示的序列或其变体的VH
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连接子
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具有如SEQ ID NO:2所示的序列或其变体的VL；或具有如SEQ ID NO:2所示的序列或其变体的VL
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连接子
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具有如SEQ ID NO:1所示的序列或其变体的VH；或(2)具有如SEQ ID NO:14所示的序列或其变体的VH
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连接子
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具有如SEQ ID NO:15所示的序列或其变体的VL；或具有如SEQ ID NO:15所示的序列或其变体的VL
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连接子
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具有如SEQ ID NO:14所示的序列或其变体的VH；或(3)具有如SEQ ID NO:27所示的序列或其变体的VH
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连接子
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具有如SEQ ID NO:28所示的序列或其变体的VL；或具有如SEQ ID NO:28所示的序列或其变体的VL
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连接子
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具有如SEQ ID NO:27所示的序列或其变体的VH；或(4)具有如SEQ ID NO:40所示的序列或其变体的VH
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连接子
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具有如SEQ ID NO:41所示的序列或其变体的VL；或具有如SEQ ID NO:41所示的序列或其变体的VL
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连接子
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具有如SEQ ID NO:40所示的序列或其变体的VH；其中，所述变体与其所源自的序列相比具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性，或者与其所源自的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)；优选地，所述的置换是保守置换；其中，所述连接子为多肽；优选地，所述连接子包含一个或几个(例如1个...

【专利技术属性】
技术研发人员：常建辉，罗永华，朱雁林，宋婷玉，余超恒，王潇东，田海军，王晶翼，
申请(专利权)人：科纳思药业有限公司，
类型：发明
国别省市：