小鼠抗兔CD5单克隆抗体及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种小鼠抗兔CD5单克隆抗体及其应用，涉及生物技术领域。本发明专利技术提供的小鼠抗兔CD5单克隆抗体，所述小鼠抗兔CD5单克隆抗体的可变区包括：具有特定氨基酸序列的互补决定区CDR1

【技术实现步骤摘要】
小鼠抗兔CD5单克隆抗体及其应用


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其是涉及一种小鼠抗兔CD5单克隆抗体及其应用。

技术介绍

[0002]流式细胞分选具有可以通过不同荧光标记进行高通量细胞分选的特点，能够在短时间对几十万到几千万的细胞群进行分选，通过B细胞表面膜结合免疫球蛋白和特异性荧光标记抗原筛选得到的靶B细胞，进行分离及体外单细胞RNA提取和扩增，得到重组抗体序列信息，可以大大提高从免疫动物中得到特定抗原抗体序列的速度。因此，基于流式细胞分选进行单个B细胞分离的抗体开发方案能够提高抗体开发效率。
[0003]目前，单个B细胞体外培养、通过微流控技术进行单个B细胞筛选是常用的两种单个B细胞分选方案，这两种方式都不需要通过筛选T细胞，获得抗原结合阳性的B细胞。因此，开发基于流式细胞分选进行兔单个B细胞分离的抗体开发方案需要使用相应的兔T细胞分选标志物抗体，从而保证获得的B细胞纯度。其次，目前也有报道的小鼠抗兔CD5单克隆抗体，但基本掌握在国外公司(如BD，Bio
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Rad等)，因此基于小鼠杂交瘤技术开发自主的抗兔CD5抗体需求迫切。
[0004]有鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0005]本专利技术的第一目的在于提供一种小鼠抗兔CD5单克隆抗体。
[0006]本专利技术的第二目的在于提供上述小鼠抗兔CD5单克隆抗体在CD5+T细胞群分选中的应用。
[0007]本专利技术的第三目的在于提供一种CD5+T细胞群的标记物。
[0008]本专利技术的第四目的在于提供一种杂交瘤细胞。
[0009]本专利技术的第五目的在于提供一种小鼠抗兔CD5单克隆抗体的制备方法。
[0010]第一方面，本专利技术提供了一种小鼠抗兔CD5单克隆抗体，所述小鼠抗兔CD5单克隆抗体的可变区包括：具有如SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的互补决定区CDR1
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VH、具有如SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的互补决定区CDR2
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VH、具有如SEQ ID NO.3所示氨基酸序列的互补决定区CDR3
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VH、具有如SEQ ID NO.4所示氨基酸序列的互补决定区CDR1
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VL、具有如SEQ ID NO.5所示氨基酸序列的互补决定区CDR2
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VL和具有如SEQ ID NO.6所示氨基酸序列的互补决定区CDR3
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VL。
[0011]作为进一步技术方案，所述可变区包括具有如SEQ ID NO.7所示氨基酸序列的重链可变区VH。
[0012]作为进一步技术方案，所述可变区包括具有如SEQ ID NO.8所示氨基酸序列的轻链可变区VL。
[0013]第二方面，本专利技术提供了上述小鼠抗兔CD5单克隆抗体在CD5+T细胞群分选中的应用。
[0014]作为进一步技术方案，所述CD5+T细胞群包括兔外周血淋巴细胞中的CD5+T细胞群。
[0015]第三方面，本专利技术提供了一种CD5+T细胞群的标记物，所述标记物包括上述小鼠抗兔CD5单克隆抗体和荧光染料；
[0016]所述小鼠抗兔CD5单克隆抗体与荧光染料偶联。
[0017]作为进一步技术方案，所述荧光染料包括iFluor488或iFluor594。
[0018]第四方面，本专利技术提供了一种杂交瘤细胞，所述杂交瘤细胞表达上述小鼠抗兔CD5单克隆抗体。
[0019]作为进一步技术方案，所述杂交瘤细胞由小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞融合得到；
[0020]所述小鼠脾细胞表达所述小鼠抗兔CD5单克隆抗体。
[0021]第五方面，本专利技术提供了上述小鼠抗兔CD5单克隆抗体的制备方法，包括：在小鼠腹腔内培养上述杂交瘤细胞，然后分离得到所述小鼠抗兔CD5单克隆抗体。
[0022]与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
[0023]本专利技术提供了一种小鼠抗兔CD5单克隆抗体，经专利技术人研究发现，该单克隆抗体特异性强，灵敏度高，能够特异性识别CD5+T细胞群，进而用于CD5+T细胞群的分选。
附图说明
[0024]为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0025]图1为实施例1提供的SDS
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PAGE结果；
[0026]图2为实施例4提供的兔CD4的过表达细胞株WB结果；
[0027]图3为实施例4提供的兔CD5的过表达细胞株WB结果；
[0028]图4为实施例4提供的兔CD4的过表达细胞株FC结果；
[0029]图5为实施例4提供的兔CD5的过表达细胞株FC结果；
[0030]图6为实施例5提供的流式检测结果；
[0031]图7为实施例9提供的流式竞争实验结果；
[0032]图8为实施例9提供的流式效价实验结果。
具体实施方式
[0033]下面将结合实施方式和实施例对本专利技术的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施方式和实施例仅用于说明本专利技术，而不应视为限制本专利技术的范围。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
[0034]需要说明的是，抗体的“可变区”或“可变结构域”是指抗体的重链或轻链的氨基端
结构域。重链的可变结构域可以被称为“VH”。轻链的可变结构域可以被称为“VL”。这些结构域通常是抗体的最可变的部分，并含有抗原结合位点。轻链或重链可变区由被三个称为“互补决定区”或“CDR”的高变区打断的构架区构成。抗体的构架区，即构成要件轻链和重链的组合的构架区，起到定位和对齐CDR的作用，所述CDR主要负责与抗原的结合。
[0035]“构架”或“FR”区意味着抗体可变结构域的排除被定义为CDR的那些区域之外的区域。每个抗体可变结构域构架可以被进一步细分成被CDR分隔开的毗邻区域(FR1、FR2、FR3和FR4)。
[0036]通常情况下，重链和轻链的可变区VL/VH可由以下编号的CDR与FR按如下组合排列连接获得：FR1
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CDR1
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FR2
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CDR2
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FR3
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CDR3
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FR4。
[0037]在本专利技术中，CDR1
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VH、CDR2
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VH和CDR3
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VH分别指重链可变区的三个高变区，相应的，CDR1
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VL、CDR2本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种小鼠抗兔CD5单克隆抗体，其特征在于，所述小鼠抗兔CD5单克隆抗体的可变区包括：具有如SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的互补决定区CDR1
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VH、具有如SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的互补决定区CDR2
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VH、具有如SEQ ID NO.3所示氨基酸序列的互补决定区CDR3
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VH、具有如SEQ ID NO.4所示氨基酸序列的互补决定区CDR1
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VL、具有如SEQ ID NO.5所示氨基酸序列的互补决定区CDR2
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VL和具有如SEQ ID NO.6所示氨基酸序列的互补决定区CDR3
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VL。2.根据权利要求1所述的小鼠抗兔CD5单克隆抗体，其特征在于，所述可变区包括具有如SEQ ID NO.7所示氨基酸序列的重链可变区VH。3.根据权利要求1所述的小鼠抗兔CD5单克隆抗体，其特征在于，所述可变区包括具有如SEQ ID NO.8所示氨基酸序列的轻链可变区VL。4.权利要求1
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【专利技术属性】
技术研发人员：权利要求书一页说明书一四页序列表电子公布附图四页，
申请(专利权)人：杭州华安生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：