一种抗ephA2的单域抗体及其用途制造技术

本发明专利技术属于免疫学领域，涉及一种抗ephA2的单域抗体及其用途。所述的单域抗体由重链构成，重链包括SEQ ID NO:43

【技术实现步骤摘要】
一种抗ephA2的单域抗体及其用途


[0001]本专利技术涉及能够与ephA2特异性结合的单域抗体(以下，其缩写为“ephA2单域抗体”)，以及含有该单域抗体作为有效成分的药物组合物，及其药物治疗用途。

技术介绍

[0002]Eph受体和相应的Eph受体相互作用(ephrin)配体共同构成了具有多种功能的关键细胞信号网络。酪氨酸激酶EphA2属于Eph受体家族，在肿瘤组织中大量产生，而在大多数正常成人组织中发现的水平相对较低，表明其在癌症治疗中的潜在应用。同时，几种靶向EphA2的化合物已经在临床研究中进行了评估和测试，尽管临床成功有限。
[0003]EphA2，以前已知为ECK，是在成人上皮细胞中表达的130KD的跨膜受体酪氨酸激酶。见Lindberg等人(1990)Mol.Cell.Biol.10:6316
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6324。EphA2是受体酪氨酸激酶Eph家族的一名成员，该家族的独特之处在于它们识别锚定在相邻细胞细胞膜上的配体，已知为肝配蛋白。见Bartley等人(1994)Nature368:558
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560。人的EphA2受体的序列在文献中所知。它含有534个氨基酸的胞外结构域，24个氨基酸的跨膜结构域，以及418个氨基酸的含有酪氨酸激酶结构域的胞质结构域。
[0004]EphA2在多种癌细胞中过量表达，例如，在乳腺癌、前列腺癌、肺癌、以及结肠癌和浸润性黑色素瘤(aggressive melanomas)中，但是在这些相同组织的非癌性损伤中没有过量表达的报道。见，例如，Rosenberg等人(1997)Am.J.Physiol.273:G824
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G832；Easty等人(1995)Int.J.Cancer 60:129
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136；Walker
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Daniels等人(1999)Prostate 41:275
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280；Zantek等人(1999)Cell Growth&Differ.10:629
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638；Zantek等人(2001)Clin.CancerRes.7:3640
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3648；Zelniski等人(2001)Cancer Res.61:2301
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2306；WO01/121172；和WO01/12840。

技术实现思路

[0005]本专利的专利技术目的是提供一种能够与ephA2特异性结合的单域抗体及其用途。
[0006]本专利技术的第一方面提供了抗ephA2的单域抗体，所述的单域抗体由重链构成，重链包括SEQ ID NO:43
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SEQ ID NO:48任意一条所示的重链CDR1、SEQ ID NO:49
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SEQ ID NO:54任意一条所示的重链
[0007]CDR2和SEQ ID NO:55
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SEQ ID NO:60任意一条所示的重链CDR3。
[0008]优选地，所述的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3的氨基酸序列为下述(1)
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(7)的一种：
[0009](1)SEQ ID NO:43所示的CDR1，SEQ ID NO:49所示的CDR2，SEQ ID NO:58所示的CDR3；
[0010](2)SEQ ID NO:44所示的CDR1，SEQ ID NO:52所示的CDR2，SEQ ID NO:56所示的CDR3；
[0011](3)SEQ ID NO:44所示的CDR1，SEQ ID NO:51所示的CDR2，SEQ ID NO:56所示的
CDR3；
[0012](4)SEQ ID NO:45所示的CDR1，SEQ ID NO:54所示的CDR2，SEQ ID NO:57所示的CDR3；
[0013](5)SEQ ID NO:46所示的CDR1，SEQ ID NO:50所示的CDR2，SEQ ID NO:55所示的CDR3；
[0014](6)SEQ ID NO:47所示的CDR1，SEQ ID NO:49所示的CDR2，SEQ ID NO:59所示的CDR3；
[0015](7)SEQ ID NO:48所示的CDR1，SEQ ID NO:53所示的CDR2，SEQ ID NO:60所示的CDR3。
[0016]以上CDR组合(1)
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(4)依次与单域抗体1F7、2A1、2C6、2C1对应，CDR组合(5)对应单域抗体1D8、2A5、2B7、2E7，CDR组合(6)
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(7)分别与单域抗体3A11、3C1对应。
[0017]上述所有序列，可以替换为与该序列具有“至少80％同源性”的序列或仅一个或少数几个氨基酸替换的序列；优选为“至少85％同源性”，更优选为“至少90％同源性”，更优选为“至少95％同源性”，最优选为“至少98％同源性”。
[0018]在一个实施方案中，其中所述重链CDR1、CDR2和CDR3的任何一个或多个CDR中，一个至五个任意氨基酸残基可以分别用其保守氨基酸取代。具体地，所述重链CDR1中，1至5个氨基酸残基可由其保守氨基酸替换；所述重链CDR2中，1至5个氨基酸残基可由其保守氨基酸替换；所述重链CDR3中，1至5个氨基酸残基可由其保守氨基酸替换。
[0019]如本文所用，术语“序列同源性”表示两个(核苷酸或氨基酸)序列在比对中在相同位置处具有相同残基的程度，并且通常表示为百分数。优选地，同源性在被比较的序列的整体长度上确定。因此，具有完全相同序列的两个拷贝具有100％同源性。
[0020]在一些实施例中，与前述序列相比仅仅替换一个或少数几个氨基酸的序列，例如，包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个保守氨基酸取代，也可以实现专利技术目的。这些变异形式包括(但并不限于)：一个或多个(通常为1
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50个，较佳地1
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30个，更佳地1
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20个，最佳地1
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10个)氨基酸的缺失、插入和/或取代，以及在C末端和/或N末端添加一个或数个(通常为20个以内，较佳地为10个以内，更佳地为5个以内)氨基酸。实际上，在确定两个氨基酸序列之间的序列同源性程度或在确定单域抗体中的CDR1、CDR2和CDR3组合时，技术人员可以考虑所谓的“保守”氨基酸取代，在取代情况下，所述取代将优选为保守氨基酸取代。所述保守氨基酸，其通常可以被描述为氨基酸残基被具有相似化学结构的另一个氨基酸残基替代的氨基酸取代，并且该取代对多肽的功能、活性或其它生物学性质几乎没有或基本上没有影响。所述保守氨基酸取代在本领域是通用的，例如保守氨基酸取代是以下(a)
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(d)组内的一个或少数几个氨基酸被同一组内另一个或少数几个氨基酸所取代：(a)极性带负电残基及其不带电酰胺：Asp、Asn、Glu、Gln；(b)极性带正电残基：本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗ephA2的单域抗体，其特征在于：所述的单域抗体由重链构成，重链包括SEQ ID NO:43
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SEQ ID NO:48任意一条所示的重链CDR1、SEQ ID NO:49
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SEQ ID NO54任意一条所示的重链CDR2和SEQ ID NO:55
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SEQ ID NO:60任意一条所示的重链CDR3。2.根据权利要求1所述的ephA2的单域抗体，其特征在于：所述的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3的氨基酸序列为下述(1)
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(7)的一种：(1)SEQ ID NO:43所示的CDR1，SEQ ID NO:49所示的CDR2，SEQ ID NO:58所示的CDR3；(2)SEQ ID NO:44所示的CDR1，SEQ ID NO:52所示的CDR2，SEQ ID NO:56所示的CDR3；(3)SEQ ID NO:44所示的CDR1，SEQ ID NO:51所示的CDR2，SEQ ID NO:56所示的CDR3；(4)SEQ ID NO:45所示的CDR1，SEQ ID NO:54所示的CDR2，SEQ ID NO:57所示的CDR3；(5)SEQ ID NO:46所示的CDR1，SEQ ID NO:50所示的CDR2，SEQ ID NO:55所示的CDR3；(6)SEQ ID NO:47所示的CDR1，SEQ ID NO:49所示的CDR2，SEQ ID NO:59所示的CDR3；(7)SEQ ID NO:48所示的CDR1，SEQ ID NO:53所示的CDR2，SEQ ID NO:60所示的CDR3。3.根据权利要求1所述的抗ephA2的单域抗体，其特征在于：所述的单域抗体还包括框架区FR；所述框架区FR包括FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列；框架区FR的氨基酸序列分别为：SEQ ID NO:21
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27中的任意一条所示的FR1或FR1的变体，所述FR1的变体在所述FR1中包含至多5个氨基酸的替换；SEQ ID NO:28
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33中的任意一条所示的FR2或FR2的变体，所述FR2的变体在所述FR2中包含至多5个氨基酸的替换；SEQ ID NO:34
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【专利技术属性】
技术研发人员：苏志鹏，王乐飞，孟巾果，张云，
申请(专利权)人：南京融捷康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：