抗HVEM抗体、制备方法及其用途技术

本发明专利技术涉及抗体技术领域，具体涉及抗HVEM抗体或其片段的制备以及它们的用途。本发明专利技术要解决的技术问题是提供一系列BTLA阻断型抗HVEM抗体或其片段。本发明专利技术的抗HVEM抗体具有良好的亲和力、特异性和功能活性，可以阻断BTLA与HVEM的结合，促进T细胞的活化，在癌症治疗方面具有应用潜力。面具有应用潜力。面具有应用潜力。

【技术实现步骤摘要】
抗HVEM抗体、制备方法及其用途


[0001]本专利技术涉及抗体
，具体涉及抗HVEM的抗体及其片段、制备法以及它们的用途。

技术介绍

[0002]抗体是由重链和轻链共同组成的生物大分子，由B淋巴细胞分泌，在机体的体液免疫中发挥重要作用。抗体分子的重链或轻链分别由可变区和恒定区组成，可变区主要发挥靶抗原结合作用，恒定区主要发挥免疫调控效应。根据空间结构和氨基酸序列特征，抗体可分为IgG、IgM、IgE、IgA、IgD等，并且重链和轻链也可进一步细分为多个亚型。比如，人IgG重链可分为IgG1、IgG2、IgG3和IgG4，轻链可分为κ和λ。由于抗体可以特异、高效地结合靶分子或靶细胞，调控靶分子下游的信号通路，或者通过免疫效应杀伤靶细胞，因此抗体可以开发为药物用于疾病治疗。当前，抗体已经发展成为一种重要的生物技术药物，其中单克隆抗体占据了绝大部分，这其中又以IgG型抗体为主，因此通常所说的单克隆抗体往往指的是IgG型抗体。
[0003]IgG型抗体分子是由2条重链和2条轻链通过链间二硫键构成的四聚体，分子量约150kD。根据结构和功能特征，抗体分子可分为可变区和和恒定区，其中可变区主要发挥抗原结合作用，而恒定区主要发挥免疫学效应和转运等功能。抗体的可变区可进一步分为互补决定区CDR和框架区FR，其中重链或轻链各含有3个CDR区(重链VH
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CDR1、VH
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CDR2、VH
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CDR3，轻链VL
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CDR1、VL
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CDR2、VL
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CDR3。)和CDR区两侧的4个FR区(FR1、FR2、FR3、FR4)。CDR区形成的loop环是抗体分子与抗原结合的主要部位，FR区则通过空间折叠形成CDR区的支撑结构。抗体对不同抗原分子的特异性识别主要是通过6个CDR区(VH
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CDR1、2、3和VL
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CDR1、2、3)的氨基酸多态性以及loop环的构象多态性共同实现。由于不同抗体FR区的结构相似度较高，因此当把某一株抗体的CDR区去替换其他抗体分子的CDR区后，如果不同抗体分子之间的FR区匹配合适，那么替换前后CDR区构象变化较小，因此替换后形成的新可变区仍可以保留抗原结合能力，这种特点是CDR移植(CDR grafting)技术的基础。鼠源抗体的CDR区可以通过CDR移植技术去替换人源抗体的CDR，从而与人FR区重组成为人源化抗体(humanized antibody)，如果人
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鼠抗体之间的FR区匹配合适，那么就仍可以保留抗原的结合能力。
[0004]杂交瘤技术是目前抗体发现过程中的重要技术。抗原免疫小鼠后，小鼠B细胞在淋巴组织发育形成生发中心，经过体细胞高频突变(SHM)，抗体亲和力得以逐步提高。分离小鼠脾细胞，在体外与小鼠骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤，通过测定杂交瘤细胞培养上清中的抗体活性，可以筛选到产生目标抗体的杂交瘤。杂交瘤细胞经过亚克隆后逐渐单克隆化，提取亚克隆细胞的mRNA进行抗体可变区基因测序，可以分析出抗体可变区的氨基酸序列。目前，上市的多数抗体是由杂交瘤技术筛选所获得的。由于杂交瘤技术来源的抗体分子是在小鼠体内完成亲和力成熟过程，那些与小鼠自身蛋白有交叉反应性的B细胞在小鼠骨髓内经过“阴性选择”而被清除，因此抗体分子可有效减少与自身蛋白或其相似蛋白的非特异性结合。
[0005]单克隆抗体可以通过多种机制发挥药理作用。抗体可变区可以结合细胞外的可溶性配体，阻断配体与受体的结合，切断配体诱导的下游信号传递，因此以免疫细胞因子为靶点开发的抗体药物可以改善炎症性疾病，比如adalimumab、belimumab、siltuximab等抗体已经获批上市。抗体恒定区可以发挥免疫调控作用，包括抗体依赖的细胞毒性作用(antibody
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dependent cellular cytotoxicity，ADCC)、补体依赖的细胞毒性作用(complement
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dependent cytotoxicity，CDC)等，因此以肿瘤细胞表面分子为靶点开发的抗体药物可以杀伤肿瘤细胞，比如rituximab、trastuzumab、cetuximab等上市抗体都获得了巨大成功。此外，以单克隆抗体为基础衍生出的双特异性抗体、抗体药物偶联物(antibody
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drug conjugate，ADC)等新型抗体技术在近些年发展也很快，均实现了不同程度的突破。截止目前，癌症和炎症性疾病是抗体药物应用最多的疾病领域。
[0006]癌症是严重威胁人类健康和生命的一类疾病。随着老龄化和人们生活方式的改变，癌症的发病率不断升高，并且还呈现出年轻化趋势，因此癌症治疗一直是医药领域的研究热点。癌症免疫治疗是一种成功的癌症治疗方式，已经获得了医学界的普遍认可。免疫系统具有识别和杀伤肿瘤细胞的能力，然而肿瘤细胞能够通过多种机制逃避抗肿瘤免疫。免疫检查点(checkpoint)分子可以调节免疫细胞的活化程度，在机体免疫系统的正常活化和防止自身免疫方面发挥重要作用。PD
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1、PD
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L1、CTLA4等免疫检查点分子的过度表达是导致肿瘤免疫逃逸的重要因素之一，免疫检查点抑制剂也是肿瘤免疫治疗的热点。目前，尽管以PD
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1、PD
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L1、CTLA4等靶点为代表的抗体药物在临床获得了巨大成功，但其仅对少数肿瘤有效，而对大多数肿瘤的疗效仍不理想，因此急需开发针对其他新靶点的抗体药物，以解决未满足的临床需求。
[0007]疱疹病毒入侵介质(Herpes Virus Entry Mediator，HVEM)是TNFR家族成员之一，表达于B细胞、T细胞、髓样细胞、NK细胞和树突状细胞等免疫细胞。此外，HVEM也在胃癌、结肠癌、黑色素瘤、肝癌等肿瘤细胞表面高表达。HVEM具有多个功能不同的配体，主要包括BTLA、LIGHT、LT
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α、CD160和SALM5等。BTLA是HVEM的重要配体，主要表达于B细胞、T细胞和DC细胞，其胞质区含有ITIM结构域，在与HVEM结合后可募集SHP1、SHP2传递抑制信号，抑制淋巴细胞的生长和细胞因子的释放。有研究显示HVEM可作为肿瘤免疫治疗的靶点，BTLA/HVEM信号通路抑制剂可以抑制肿瘤的生长。
[0008]本专利技术通过杂交瘤技术筛选到了一系列BTLA阻断型抗HVEM抗体，具有良好的亲和力、特异性和功能活性，可以阻断BTLA与HVEM的结合，促进T细胞的活化，在癌症治疗方面具有应用潜力。

技术实现思路

[0009]本专利技术要解决的技术问题是提供一系列BTLA阻断型抗HVEM抗体或抗体片段，具有良好的亲和力、特异性和功能活性，可以有效促进T细胞的活化。
[0010]本专利技术提供了一系列抗HVEM的抗体或其片段。
[0011]抗HVEM的抗体或其片段，其重链可变区VH中含有重链互补决定区,其含有的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.抗HVEM的抗体或其片段，其特征在于：其重链可变区VH中含有重链互补决定区,其含有的重链互补决定区1(VH
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CDR1)的氨基酸序列为SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.18中的至少一种所示。2.抗HVEM的抗体或其片段，其特征在于：其重链可变区VH中含有重链互补决定区,其含有的重链互补决定区2(VH
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CDR2)的氨基酸序列为SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.19中的至少一种所示。3.抗HVEM的抗体或其片段，其特征在于：其重链可变区VH中含有重链互补决定区,其含有的重链互补决定区3(VH
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CDR3)的氨基酸序列为SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.20中的至少一种所示。4.抗HVEM的抗体或其片段，其特征在于：其重链可变区VH中含有上述权利要求1、2、3中至少一项所述的重链互补决定区。5.根据权利要求4所述的抗HVEM的抗体或其片段，其特征在于：其重链可变区VH的氨基酸序列为SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.9或SEQ ID NO.17中的至少一种所示。6.抗HVEM的抗体或其片段，其特征在于：其轻链可变区中含有轻链互补决定区，其含有的轻链互补决定区1(VL
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CDR1)的氨基酸序列为SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.22中的至少一种所示。7.抗HVEM的抗体或其片段，其特征在于：其轻链可变区中含有轻链互补决定区，其含有的轻链互补决定区2(VL
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CDR2)的氨基酸序列为SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.15、SEQ ID NO.23中的至少一种所示。8.抗HVEM的抗体或其片段，其特征在于：其轻链可变区VH中含有轻链互补决定区，其含有的轻链互补决定区3(VL
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CDR3)的氨基酸序列为SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.24中的至少一种所示。9.抗HVEM的抗体或其片段，其特征在于：其轻链可变区VL中含有上述权利要求6、7、8中至少一项所述的轻链互补决定区。10.抗HVEM的抗体或其片段，其特征在于：其轻链可变区VL的氨基酸序列为SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.13或SEQ ID NO.21中的至少一种所示。11.根据权利要求1～10任一项所述的抗HVEM的抗体或其片段，其特征在于：重链可变区VH的氨基酸序列为SEQ ID NO.1所示，其中重链互补决定区VH
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CDR1、VH
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CDR2、VH
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CDR3的氨基酸序列分别为SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4；轻链可变区VL的氨基酸序列为SEQ ID NO.5所示，其中轻链互补决定区VL
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CDR1、VL
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CDR2、VL
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【专利技术属性】
技术研发人员：涂永燕，谯凡，杨金亮，勾蓝图，
申请(专利权)人：四川大学，
类型：发明
国别省市：