进行数字PCR的方法技术

提供了靶核酸的检测方法。所述方法包括将样品分级分离成多个样品体积，其中超过50％的级分在每个样品体积中含有不超过1个靶核酸分子，并使所述多个样品体积经受用于扩增的条件。所述方法还包括检测样品体积中离子浓度的变化，其中存在靶核酸则对带有扩增的靶核酸的级分的数量进行计数，并确定所述样品中靶核酸的量。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】进行数字PCR的方法专利技术背景数字PCR(dPCR)是常规聚合酶链式反应(PCR)方法的改进，其可以用于直接量化和克隆扩增核酸(包括DNA、cDNA、甲基化的DNA、或RNA)。dPCR和传统PCR之间的一个区别在于测量核酸量的方法。PCR和dPCR均对每个单独样品进行一个反应，dPCR还在样品内进行单一反应，但是所述样品被分离成大量的分区(partition)，并且所述反应在每个分区中单独进行。这种分离允许对核酸量进行灵敏的测量。DPCR已被证明可有效用于研究基因序列中的变异，例如拷贝数变异或点突变。在dPCR中，样品被分区，使得样品内单个的核酸分子被定位并被集中在许多分离的区域内。所述样品通过简单的稀释过程(process)进行分级分离，使得每个级分含有大约一个拷贝的DNA模板或更少。通过分离单个DNA模板，该过程有效富集在原始样品中以极低水平存在的DNA分子。样品的分区有助于采用泊松统计对分子进行计数。其结果是，每个分区会分别含有“0”或“1”个分子，或阴性或阳性的反应。虽然传统PCR中分子的起始拷贝数与扩增循环的数量成比例，dPCR并不依赖于扩增循环的数量来确定初始样品量。现本文档来自技高网...

【技术保护点】
靶核酸的检测方法，包括：将样品分级分离成多个样品体积，其中超过50％的级分在每个样品体积中含有不超过1个靶核酸分子；使所述多个样品体积经受用于扩增的条件；检测在其中存在靶核酸的样品体积中离子浓度的变化；对带有扩增的靶核酸的级分的数量进行计数；以及确定所述样品中靶核酸的量。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.04.19 US 61/635,584;2013.03.15 US PCT/US2013/1.靶核酸的检测方法，包括：将样品分级分离成多个样品体积，其中超过50％的级分在每个样品体积中含有不超过1个靶核酸分子；使所述多个样品体积经受用于扩增的条件；检测在其中存在靶核酸的样品体积中离子浓度的变化；对带有扩增的靶核酸的级分的数量进行计数；确定所述样品中靶核酸的量；以及其中所述方法是dPCR方法。2.如权利要求1所述的方法，还包括将样品与用于扩增的引物和探针组合。3.如权利要求1所述的方法，其中所述离子浓度的变化是离子浓度的增加。4.如权利要求1所述的方法，还包括将样品与珠组合。5.如权利要求1所述的方法，还包括将样品上样至基板上，其中所述基板包括至少一个孔。6.如权利要求5所述的方法，还包括用不混溶的流体层将所述至少一个孔密封。7.如权利要求5所述的方法，其中所述至少一个孔包括涂层。8.如权利要求7所述的方法，其中所述涂层是亲水性涂层。9.如权利要求1所述的方法，还包括将多个样品的每一个置于多个分离的位置中，其中所述多个分离的位置的每一个与传感器进行化学通讯。10.如权利要求1所述的方法，其中所述离子浓度的变化是氢离子的增加。11.如权利要求1所述的方法，其中所述离子浓度的变化是pH的变化。12.如权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈才夫，凯西·R·麦克法兰德，小大卫·N·肯斯，
申请(专利权)人：生命技术公司，
类型：发明
国别省市：美国;US