靶向性凝固因子及其使用方法技术

提供了靶向性凝固因子，其包含与至少一个特异性结合血细胞上的膜蛋白质的域连接的凝固因子。所公开的靶向性凝固因子提高凝固因子的效率，并延长其作用的持续时间，并且如此是用于治疗血液学疾病诸如血友病A的改善。

【技术实现步骤摘要】
此案是申请日为2009年5月15日、中国申请号为200980126328. 5、专利技术名称为 的专利技术申请的分案申请。 本申请要求2008年5月16日提交的美国临时申请流水号61/053, 932的权益，通 过提及而将其内容完整收入本文。 专利
本申请涉及具有升高的功效的靶向性凝固因子。本专利技术进一步提供了治疗凝固因 子缺乏病症患者的方法，其通过将凝固因子选择性靶向至其作用的生物学位置，诸如通过 将凝血因子VIII (FVIII)靶向至红细胞和血小板来进行。还提供了药物组合物，其包含依 照本专利技术的靶向性凝固因子。 专利技术背景 生物学药物的效率常常受到其在患者中的作用持续时间限制，尤其在疾病需要药 物的持续调控时。因此，药动学特性的增强对于治疗剂在临床上的成功通常比药物效力的 优化更重要。一种保护药物免于各种清除机制以延长半衰期的办法是添加靶向域，其促进 药物结合至循环中的长寿命蛋白质诸如基质蛋白或细胞（诸如血细胞或内皮细胞）表面。 例如，已经显示了治疗性肽或蛋白质定位于血细胞表面通过阻止正常的清除机制来延长其 循环半衰期（Chen等，Bloodl05 (10) :3902-3909, 2005)。可以使用极其多种分子作为靶向 域。 在另一个例子中，在连接蝶（tick)抗凝蛋白的Kunitz型蛋白酶抑制剂（KPI)域 与阴离子磷脂、磷脂酰-L-丝氨酸（PS)结合蛋白、膜联蛋白V(ANV)时，显示了融合蛋白 (ANV-KPI)比非融合对应物更具活性，而且拥有更高的体内抗凝血活性（Chen等，2005)。由 于ANV对PS和磷脂酰乙醇胺（PE)具有强亲和力，假设融合蛋白ANV-KPI能特异性靶向至血 栓形成（thrombogenesis)位置处存在的富含PS/PE的阴离子膜结合的凝固酶复合物。类似 地，Dong等报告了融合血纤蛋白选择性吸血蝠 （Desmodus rotundus)唾液PAa l(dsPAa 1) 与尿激酶（uPA)/抗P-选择蛋白抗体（HuSZ51)以生成完全功能性的融合蛋白，在体外测定 法中具有与非融合对应物相似的抗凝血活性。此外，显示了融合蛋白HuSZ51-dsPAa 1结合 凝血酶激活的人和犬血小板（Dong等，Thromb. Haemost. 92:956-965, 2004)。 已经在靶向抗凝血剂中进行了其它努力以阻止凝块和降低与血栓性疾病 有关的死亡率（参见例如 W094/09034)。Stoll 等（Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 27:1206-1212, 2007)表明了新近的开发，其中经由抗LIBS单链抗体（scFv抗LIBS)将 凝血因子Xa(FXa)抑制剂，即蜱抗凝血肽（TAP)靶向至GPIIb/IIIa(即一种在血小板表面 上丰富表达的糖蛋白）上的配体诱导的结合位点。显示了融合蛋白s CFvauBS-TAP即使在 非靶向性对应物失效（fail)的低浓度也拥有有效的抗凝活性。 上述靶向性抗凝血剂是设计用于靶向特定细胞的融合蛋白。依照Stoll等，靶向 性抗凝血剂应当是具有在与抗体融合时得到保留的高度有力的凝固抑制活性的小分子。不 讨论抗凝血剂自其靶定位置中的融合蛋白的释放。 本专利技术聚焦于用于治疗血液学疾病诸如血友病的靶向性治疗性蛋白质。例如，用 FVIII浓缩物或重组FVIII对血友病A患者的当前治疗受到这些因子的高成本和其相对较 短的作用持续时间的限制。目前，通过在需要时静脉内施用FVIII或者作为一周数次施用 的预防性疗法来治疗血友病A患者。对于预防性处理，一周三次施用FVIII。不幸地，此频 率对于许多患者而言是成本昂贵的（cost prohibitive)。由于其在人中的短半衰期，必须 频繁施用FVIII。尽管其在全长蛋白质上大于300kD的较大大小，FVIII具有仅约11-18(平 均14)小时的人中半衰期（Gruppo等，Haemophila9:251_260, 2003)。对于那些能负担得起 所推荐的频繁剂量给药的人，然而频繁地静脉内注射蛋白质是非常不方便的。对于患者而 言会更方便的是，若可以开发出具有较长的半衰期，因此需要频率较少的施用的FVIII产 品。此外，若半衰期得到延长，则可以降低治疗成本，这是因为那样可需要较少的剂量。因 此，想要具有更有效形式的FVIII，其能降低有效剂量或者具有延长的作用持续时间以显著 改善血友病患者的治疗选项。 还有，靶向性FVIII的持续血浆浓度可以通过降低FVIII的谷至峰水平，如此消除 需要在早期时间点时引入超生理学水平的蛋白质，从而降低不利副作用的程度。因此，想要 具有如下的FVIII形式，其具有持续不变的持续时间和比目前销售的形式更长的半衰期。 目前疗法的别的缺点是约25-30%的患者形成抑制FVIII活性的抗体（Saenko 等，Haem〇philia8:1-11，2002)。抗体形成阻止FVIII作为代替疗法使用，迫使这组患者寻 找甚至更昂贵的用高剂量重组凝血因子VIIa(FVIIa)的治疗和免疫耐受性疗法。因此，较 小免疫原性的FVIII代替产品是想要的。 一种为血友病患者改善治疗的办法牵涉基因疗法。通过在血小板中指导FVIII 表达来将FVIII异位靶向至血小板在治疗血友病A中可以具有治疗效果（Shi等，J. Clin. Invest. 116(7):1974-1982, 2006)。 本专利技术的目标是提供靶向性凝固因子，其与非靶向性蛋白质相比具有延长的作用 持续时间、更大的功效、更少的副作用、和更小的免疫原性。 本专利技术的另一个目标是降低与治疗性蛋白质施用有关的副作用，其通过让蛋白质 靶向至期望作用的特定位置，并且由此降低蛋白质暴露于可导致不想要副作用的其它潜在 生物学活性位点来实现。 本专利技术的进一步的目标是获得别的优点，其通过设计靶向性治疗性凝固因子来实 现，其中治疗性蛋白质在紧邻其体内作用位置处自靶向域释放。可以达到高局部浓度的非 融合、激活的蛋白质。如此，增强蛋白质的治疗功效。 本专利技术还涉及[〇〇17] 1. 一种靶向性凝固因子，其包含与至少一个特异性结合血细胞上的膜蛋白质的域 连接的凝固因子。 2.项1的靶向性凝固因子，其中所述凝固因子是功能性FVIII多肽或FIX。 3.项1的靶向性凝固因子，其中所述域是抗体片段、肽、肽模拟物、或小分子。 4.项1的靶向性凝固因子，其中所述血细胞是血小板，而所述膜蛋白质是GPIIb/ Ilia。 5.项4的靶向性凝固因子，其中所述凝固因子是功能性FVIII多肽。 6.项4的靶向性凝固因子，其中所述域是RGD肽或抗GPIIb/IIIa抗体的单链片 段。 7.项1的靶向性凝固因子，其中所述凝固因子是功能性FVIII多肽，而所述域是与 所述FVIII的B域连接的抗体片段、肽、肽模拟物、或小分子。 8.项7的靶向性凝固因子，其中所述血细胞是血小板，而所述域是R⑶肽或抗 GPIIb/IIIa抗体的单链片段。 9. -种药物组合物，其包含治疗有效量的项1的靶向性凝固因子和药学可接受赋 形剂或载体。 10. -种用于治疗血液学疾病的方法，包括对有所需要的患者施用有效量的项1 的靶向性凝固因子。 11. -种用于将凝固因子靶向本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种靶向性凝固因子，其包含与至少一个特异性结合血细胞上的膜蛋白质的域连接的凝固因子。

【技术特征摘要】
2008.05.16 US 61/053,9321. 一种靶向性凝固因子，其包含与至少一个特异性结合血细胞上的膜蛋白质的域连接 的凝固因子。2. 权利要求1的靶向性凝固因子，其中所述凝固因子是功能性FVIII多肽或FIX;和/ 或其中所述域是抗体片段、肽、肽模拟物、或小分子；和/或其中所述血细胞是血小板，而所 述膜蛋白质是GPIIb/IIIa ;和或其中所述凝固因子是功能性FVIII多肽；和/或其中所述 域是RGD肽或抗GPIIb/IIIa抗体的单链片段。3. 权利要求1的靶向性凝固因子，其中所述凝固因子是功能性FVIII多肽，而所述域是 与所述FVIII的B域连接的抗体片段、肽、肽模拟物、或小分子。4. 权利要求3的靶向性凝固因子，其中所述血细胞是血小板，而所述域是R⑶肽或抗 GPIIb/IIIa抗体的单链片段。5. -种药物组合物，其包含治疗有效量的权利要求1的靶向性凝固因子和药学可接受 赋形...

【专利技术属性】
技术研发人员：理查德费尔德曼，吉扬金，蒋海英，柯克麦克莱恩，潘峻亮，格伦皮尔斯，伍国鸿，赵晓燕，
申请(专利权)人：拜耳医药保健有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US