修饰的人肿瘤坏死因子受体-1多肽的新用途制造技术

本发明专利技术涉及修饰的人肿瘤坏死因子受体-1(TNFRI)多肽的新用途，并且更具体地，涉及其用于预防和治疗干眼综合征的用途。本发明专利技术的修饰的TNFRI或修饰的TNFRI片段具有优异TNFα中和活性，并且在患者的眼表面上抑制TNFα活性以抑制与干眼相关的炎症诱导作用。因此，本发明专利技术的修饰的TNFRI或修饰的TNFRI片段在预防和治疗干眼综合征方面显示显著效果，并且因此可以在预防和治疗干眼综合征中非常有用。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及修饰的人肿瘤坏死因子受体-1(TNFRI)多肽的新用途，并且更具体地，涉及其用于预防和治疗干眼综合征的用途。
技术介绍
干眼综合征(或“干眼”)，也称作干燥性角结膜炎，是每年侵袭数百万人的眼病。特别地，已知这种疾病常见于绝经后的女性中，原因在于月经停止引起的激素变化。干眼综合征的程度随人而不同。具有轻度症状的患者可能有烧灼感、干燥和异样体感，而具有严重症状的患者可能有严重受损的视力。其他疾病如Sjogren综合征和瘢痕性类天疱疮有时也显示出复杂的干眼综合征。基于迄今的研究结果，已经理解与细胞因子、抗原标记细胞等相关的自身免疫反应在眼表面上因各种应激发生，这造成免疫细胞附聚在角膜组织上，导致损害组织，并且因此引起干眼综合征。作为干眼综合征的代表性疗法，将人工泪用来弥补眼泪膜或减少泪蒸发以稳定泪膜。此外，泪植入物可以用来刺激泪产生。人工泪的主要成分是纤维素醚、卡波姆、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、透明质酸钠等，并且通过在缓冲液或等渗盐水中溶解该主要成分，制备人工泪。这些成分使溶液粘稠以因而防止溶液易于从眼部流走、防止泪蒸发并充当润滑剂。但是，这些治疗具有局限性：它们不是根本治疗，而是对症治疗。同时，随着发现干眼的病因与眼表面上的炎症反应相关，实施了采用各种抗炎材料用于治疗的研究和工作并且它们的效果得到证实。具体而言，已经报道，干眼综合征患者的眼组织如泪腺和睑板腺显示不平衡和过度的炎症，并且已经已知多种化合物，例如类固醇、细胞因子分泌抑制剂、环孢菌素A和15-HETE有效减轻干眼综合征。肿瘤坏死因子α(TNFα)是一种与炎症反应相关的重要因子，并且与人TNF受体(TNFR)I或II结合以由此诱导各种细胞反应，包括凋亡和炎症反应。在证明可以通过抑制TNFα和TNFR的结合作用治疗多种自身免疫相关的炎性疾病后，已经开发了多种TNFα抑制剂。TNFα抑制剂的代表性例子可以是由可溶性TNFRII联合FC部分组成的依那西普(产品名称：Enbrel)、作为针对TNFα的抗体的英夫单抗(产品名称：英利昔单抗(Remicade))和阿达木单抗(产品名称：修美乐)，等等。这些抑制剂主要用作治疗类风湿性关节炎、银屑病、Crohn病等。同时，已经公开TNFα抑制剂对干眼具有治疗效果(US 6,428,787B、US 6,379,666B、US 6,177,077B、US 6,204,270B、US 2004/0126372A、WO 00/27421A)。此外，US 2009/0098136A公开了依那西普和英夫单抗在动物模型中具有治疗干眼综合征的作用，并且以滴眼剂形式施用这两种物质倾向于改善泪膜破裂时间和角膜染色。然而，仍然迫切需要显示更高治疗功效的干眼综合征新疗法，特别地是含有TNFα抑制剂作为有效成分的干眼综合征新疗法。专利技术简述专利技术人发现某些类型的肿瘤坏死因子受体-1(TNFRI)变体及其片段在治疗干眼综合征方面显示显著的临床效果，并且随后完成本专利技术。因此，本发明涉及修饰的人肿瘤坏死因子受体-1多肽或其片段的新用途，特别是治疗干眼综合征的用途。作为TNFα抑制剂，本申请人的韩国专利特开平No.2011-0043485公开了修饰的人肿瘤坏死因子受体-1多肽及其片段，其具有针对身体中存在的蛋白酶的改善抗性，并且作为TNFα抑制剂，本申请人的韩国专利特开平No.2012-0027666公开了具有增加的TNFα结合强度的修饰的人肿瘤坏死因子受体-1多肽及其片段，作为TNFα抑制剂。在与新的修饰的肿瘤坏死因子受体-1多肽相关的以上专利申请后通过艰苦研究工作和努力，专利技术人开发了下一代肿瘤坏死因子受体-1变体，所述变体比修饰的肿瘤坏死因子受体-1多肽(参见，韩国专利特开平No.2012-0072323)具有改善更多的有效性，并且证实其中如此开发的肿瘤坏死因子受体-1变体的某些在干眼综合征中显示出显著的临床效果。特别地，专利技术人通过动物模型证实，本专利技术的某些变体在治疗干眼综合征方面显示显著效果，而令人惊讶地是，依那西普(一种代表性TNFα抑制剂)在改善干眼综合征的症状方面没有出众的效果。这个事实意味着，全部TNFα抑制剂均在干眼综合征中显示显著效果，并且证明仅本专利技术的某些变体可以治疗治理干眼综合征中非常有用。作为本专利技术的一个方面，本专利技术提供一种用于预防和/或治疗干眼综合征的组合物，所述组合物含有至少一种修饰的肿瘤坏死因子受体-1多肽或至少一个其片段作为有效成分，和一种使用所述组合物预防和/或治疗干眼综合征的方法。在下文更详细地描述本专利技术之前，对本文所用的术语进行定义以更清晰地解释本专利技术的技术特征。除非另外声明，否则以下术语在本说明书和本发明权利要求书通篇范围内具有如下文定义的意思。如本文所用，术语“全长人肿瘤坏死因子受体-1”或“全长人肿瘤坏死因子受体-1多肽”(下文，“TNFRI”或“TNFRI多肽”)指源自人的由455个氨基酸组成并且能够与TNFα结合的多肽。特别地，天然(野生型)TNFRI具有如SEQ ID:1中所述的氨基酸序列。如本文所用，术语“人肿瘤坏死因子受体-1片段”或“人肿瘤坏死因子受体-1多肽片段”(下文，“TNFRI片段”或“TNFRI多肽片段”)指TNFRI的部分，所述部分的氨基酸序列与TNFRI的相应氨基酸序列100％相同并且至少一个氨基酸残基缺失。在TNFRI片段中，缺失的氨基酸残基可以位于多肽的任何位置，包括TNFRI的N末端、C末端和内部。该片段与TNFRI共有至少一个生物学特征，例如，作为TNFα抑制剂发挥作用，或具有干眼综合征治疗功效。TNFRI片段的代表性例子是具有从TNFRI N末端第41个氨基酸残基延伸的105、126、171个氨基酸残基的片段，所述片段分别命名为TNFRI105、TNFRI126和TNFRI171。如本文所用，术语“TNFRI变体(或突变体)”或“TNFRI变体(或突变体)片段”、“修饰的TNFRI多肽”或“修饰的TNFRI多肽片段”指与TNFRI或TNFRI片段具有小于100％序列同一性的修饰的TNFRI或修饰的TNFRI片段，所述TNFRI或TNFRI片段从如下文定义的天然或重组细胞分离，并且“TNFRI变体(或突变体)片段”或“修饰的TNFRI多肽片段”与“TNFRI变体(或突变体)”或“修饰的TNFRI多肽”共有一个或多个生物学特征，例如，作为TNFα抑制剂发本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于预防或治疗干眼综合征的组合物，所述组合物包含至少一种修饰的TNFRI或修饰的TNFRI片段，其中所述修饰的TNFRI或所述修饰的TNFRI片段包含选自以下组的氨基酸序列：i)氨基酸序列，其包含在如SEQ ID NO:1中所述的天然TNFRI的氨基酸序列或TNFRI片段的氨基酸序列中第92、95、97和98位置处的4个氨基酸残基的修饰；ii)氨基酸序列，其包含在如SEQ ID NO:1中所述的天然TNFRI的氨基酸序列或TNFRI片段的氨基酸序列中第68、92、95、97位置处的5个氨基酸残基修饰；或iii)氨基酸序列，其包含在如SEQ ID NO:1中所述的天然TNFRI的氨基酸序列或TNFRI片段的氨基酸序列中第68、92、95、97和98位置处的5个氨基酸残基的修饰和第161或207位置处的额外氨基酸的修饰。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.06.21 KR 10-2012-00665271.一种用于预防或治疗干眼综合征的组合物，所述组合物包含至少一种
修饰的TNFRI或修饰的TNFRI片段，其中所述修饰的TNFRI或所述修饰
的TNFRI片段包含选自以下组的氨基酸序列：
i)氨基酸序列，其包含在如SEQ ID NO:1中所述的天然TNFRI的氨
基酸序列或TNFRI片段的氨基酸序列中第92、95、97和98位置处的4个氨
基酸残基的修饰；
ii)氨基酸序列，其包含在如SEQ ID NO:1中所述的天然TNFRI的氨
基酸序列或TNFRI片段的氨基酸序列中第68、92、95、97位置处的5个氨
基酸残基修饰；或
iii)氨基酸序列，其包含在如SEQ ID NO:1中所述的天然TNFRI的氨
基酸序列或TNFRI片段的氨基酸序列中第68、92、95、97和98位置处的5
个氨基酸残基的修饰和第161或207位置处的额外氨基酸的修饰。
2.一种用于预防或治疗干眼综合征的组合物，所述组合物包含至少一种
修饰的TNFRI或修饰的TNFRI片段，其中所述修饰的TNFRI或所述修饰的
TNFRI片段包含氨基酸序列，所述氨基酸序列必然地包含在如SEQ ID NO:1
中所述的天然TNFRI的氨基酸序列或TNFRI片段的氨基酸序列中：
在第92位置用I或M置换S；
在第95位置用F置换H；
在第97位置用P置换R；
在第98位置用A或G置换H，
并且，
优选地进一步包括选自以下的至少一个置换：
在第68位置处用V置换L；
在第161位置处用Q或N置换K；和
在第207位置处用N置换D。
3.根据权利要求2所述的用于预防或治疗干眼综合征的组合物，其中
所述修饰的TNFRI或所述修饰的TNFRI片段包含选自以下组的氨基酸序列：
i)在SEQ ID NO:1中所述的天然TNFRI的氨基酸序列(TNFRI)中包含

\t选自如下氨基酸修饰的氨基酸序列：S92I/H95F/R97P/H98A、
S92M/H95F/R97P/H98A、L68V/S92M/H95F/R97P/H98A、
L68V/S92I/H95F/R97P/H98A/K161N、L68V/S92M/H95F/R97P/H98A/K161N、
L68V/S92M/H95F/R97P/H98A/D207N、L68V/S92I/H95F/R97P/H98G/K161Q
和L68V/S92M/H95F/R97P/H98G/K161N；
ii)在SEQ ID NO:1中所述的天然TNFRI的氨基酸序列的氨基酸残基
41至211组成的氨基酸序列(TNFRI171)中包含选自如下氨基酸修饰的氨基酸
序列：S92I/H95F/R97P/H98A、S92M/H95F/R97P/H98A、
L68V/S92M/H95F/R97P/H98A、L68V/S92I/H95F/R97P/H98A/K161N、
L68V/S92M/H95F/R97P/H98A/K161N、
L68V/S92M/H95F/R97P/H98A/D207N、L68V/S92I/H95F/R97P/H98G/K161Q
和L68V/S92M/H95F/R97P/H98G/K161N；
iii)在SEQ ID NO:1中所述的天然TNFRI的氨基酸序列的氨基酸残基
41至166组成的氨基酸序列(TNFRI126)中包含选自如下氨基酸修饰的氨基酸
序列：S92I/H95F/R97P/H98A、S92M/H95F/R97P/H98A、
L68V/S92M/H95F/R97P/H98A、L68V/S92I/H95F/R97P/H98A/K161N、
L68V/S92M/H95F/R97P/H98A/K161N、L68V/S92I/H95F/R97P/H98G/K161Q
和L68V/S92M/H95F/R97P/H98G/K161N；和
iv)在SEQ ID NO:1中所述的天然TNFRI的氨基酸序列的氨基酸残基
41至145组成的氨基酸序列(TNFRI105)中包含选自如下氨基酸修饰的氨基酸
序列：S92I/H95F\...

【专利技术属性】
技术研发人员：金圣旭，朴胜国，宋连情，金银善，安惠敬，丁在甲，李亨根，
申请(专利权)人：韩诺生物制药株式会社，
类型：发明
国别省市：韩国;KR