本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种重组肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体蛋白及其应用，所述一种重组肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体蛋白由TRAIL的114-281氨基酸序列与载体PET进行基因克隆制备出具有N-末端组氨酸标签和异亮氨酸拉链基序重组基因PET23dw-His-ILZ-hTRAIL114-281的TRAIL重组蛋白，简称HZ-TRAIL，本发明专利技术的重组肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体蛋白可以诱导多种癌细胞的凋亡，而对正常组织和细胞无任何副作用。在RA发病过程中通过诱导炎性淋巴细胞的凋亡，降低炎症反应，对关节起保护作用。对抗肿瘤和抗类风湿关节炎具有高药效的优点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物
，具体涉及一种重组肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体蛋 白及其应用。
技术介绍
肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（tumor necrosis factor relatedapoptosis-;^)也称为凋亡素-2配体(4口〇-2]^)，是新近发现的肿瘤坏死因子(^即） 基因超家族成员，属于II型跨膜蛋白（transmembrane protein) JRAIL是一个由281个氨基 酸构成的Π 型跨膜蛋白，其中从第114个精氨酸(arginine)到第281个甘氨酸(glysine)的 序列为诱导癌细胞凋亡的主要功能区域。它能通过与死亡受体结合选择性诱导多种肿瘤细 胞与转化细胞发生凋亡，而对正常组织和细胞几乎没有不良反应。这一特性使得TRAIL在肿 瘤的靶向治疗中具有良好的应用前景，被认为是一种非常具有发展潜力的抗肿瘤因子，近 年已成为国内外研究的热点。但单体结构的TRAIL不能诱导细胞凋亡，把TRAIL应用到临床 上仍有许多问题亟待解决。为了实现TRAIL诱导细胞凋亡的目的，现有技术中通过重组 TRAIL形成二聚体或多聚体后与死亡受体(DR4，DR5)相结合发挥细胞凋亡的作用，但现有技 术中针对重组TRAIL蛋白具有生物活性低、产量低、性质不稳定且易变性的缺点。
技术实现思路
本专利技术为了解决上述技术问题，提供一种重组肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体蛋 白及其应用，利用PET表达载体对人类TRAIL基因（114-281序列）进行基因克隆制作出具有 N-末端组氨酸标签(Histidine tag)和异亮氨酸拉链基序(Leucine zipper)的TRAIL重组 基因本专利技术为了解决上述技术问题，提供一种重组肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体蛋白及 其应用，利用PET表达载体对人类TRAIL基因（114-281序列）进行基因克隆制作出具有N-末 端组氨酸标签(Histidine tag)和异亮氨酸拉链基序(Leucine zipper)的TRAIL重组基因 (PET23dw-His-ILZ-hTRAIL114-281，简称HZ-TRAIL)。本专利技术的重组肿瘤坏死因子相关凋亡 诱导配体蛋白对抗肿瘤和抗类风湿关节炎具有高药效的优点。 为了达到上述技术效果，本专利技术的技术方案包括： -种重组肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体蛋白，由TRAIL的114-281氨基酸序列与 载体PET进行基因克隆，制备出具有N-末端组氨酸标签和异亮氨酸拉链基序重组基因 PET23dw-His-ILZ-hTRAILl 14-281 的TRAIL重组蛋白，简称HZ-TRAIL。 所述的重组肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体蛋白氨基酸序列如SEQ ID NO: 1所 不。 所述的重组肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体蛋白适用于在大肠杆菌、酵母和哺乳 动物细胞中表达。 所述的重组肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体蛋白可诱导癌细胞或炎性淋巴细胞 凋亡。 所述的重组肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体蛋白可应用于抗肿瘤药物中。 所述的重组肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体蛋白可应用于类风湿性关节炎药物 中。 本专利技术的有益效果包括： 1、本专利技术，改善了TRAIL 固有的诸多问题比如减少药物降解及损失，从而延长了 TRAIL的半衰期、通过延缓蛋白的排 泄，提高其抗酶解的能力，增加其溶解性与稳定性，以及降低其免疫原性，显著延长了TRAIL 的体内生物活性。另外，通过进一步研究证明了 HZ-TRAIL在抗肿瘤和抗类风湿关节炎的药 效。 2、本专利技术一种重组肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体蛋白HZ-TRAIL可以诱导多种 癌细胞的凋亡，而对正常组织和细胞无任何副作用。 3、本专利技术一种重组肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体蛋白HZ-TRAIL在RA发病过程 中通过诱导炎性淋巴细胞的凋亡，降低炎症反应，对关节起保护作用。【附图说明】 图1所示为本专利技术一种重组肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的制备方法的模式 图。 图2所示为本专利技术野生型TRAIL和实施例2制备出的HZ-TRAIL的SDS-PAGE比较图。 图3所示为本专利技术制备出的HZ-TRAIL对大肠癌细胞(HCT116)杀伤能力图。 图4A所示为本专利技术HZ-TRAIL对子宫癌细胞(HeLa)凋亡和细胞坏死比例柱状图；图4B所示为本专利技术HZ-TRAIL对子宫癌细胞(HeLa)形态及颜色变化图。图5所示为本专利技术实施例7建立类风湿关节炎动物模型和处理药物流程图。图6A所示为本专利技术实施例7HZ-TRAIL对类风湿关节炎模式小鼠（CIA)治疗的浓度 依赖性发病率变化图；图6B所示为本专利技术实施例7HZ-TRAIL对类风湿关节炎模式小鼠（CIA)治疗的浓度 依赖性关节炎临床指数的变化图。图7A所示为本专利技术实施例7野生型小鼠（对照组)关节组织病理图；图7B所示为本专利技术实施例7处理PBS后小鼠（阳性对照组)关节组织病理图； 图7C所示为本专利技术实施例7处理30yg/mouse的HZ-TRAIL后小鼠关节组织病理图； 图7D所示为本专利技术实施例7处理150yg/mouse的HZ-TRAIL后小鼠关节组织病理图； 图7E所示为本专利技术实施例7处理300yg/mouse的HZ-TRAIL后小鼠关节组织病理图。图8A所示为本专利技术实施例7处理不同浓度HZ-TRAIL后小鼠血清中促炎介质TNF-a 水平的变化图；图8B所示为本专利技术实施例7处理不同浓度HZ-TRAIL后小鼠血清中促炎介质IL-Ιβ 水平的变化图；图8C所示为本专利技术实施例7处理不同浓度HZ-TRAIL后小鼠血清中促炎介质IFN- γ 水平的变化图；图8D所示为本专利技术实施例7处理不同浓度HZ-TRAIL后小鼠血清中促炎介质IL-2水 平的变化图。图9A所示为本专利技术实施例7处理不同浓度HZ-TRAIL后小鼠血清中免疫球蛋白IgGl 的水平的变化图；图9B所示为本专利技术实施例7处理不同浓度HZ-TRAIL后小鼠血清中免疫球蛋白 IgG2a的水平的变化图。图10A所示为本专利技术实施例8HZ-TRAIL抑制炎性淋巴细胞的增殖效果图；图10B所示为本专利技术实施例8HZ-TRAIL对促炎介质IL-2的表达水平变化图；图10C所示为本专利技术实施例8HZ-TRAIL对促炎介质IFN- γ的表达水平变化图。图11Α所示为本专利技术实施例8HZ-TRAIL抑制Jurkat细胞的增殖效果图；图11B所示为本专利技术实施例8HZ-TRAIL诱导炎性T淋巴细胞凋亡能力图；图11C所示为本专利技术实施例8HZ-TRAIL对凋亡关联caspase 3蛋白质的水平变化 图。【具体实施方式】 下文将结合具体附图详细描述本专利技术具体实施例。应当注意的是，下述实施例中 描述的技术特征或者技术特征的组合不应当被认为是孤立的，它们可以被相互组合从而达 到更好的技术效果。 -种重组肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体蛋白，由TRAIL的114-281氨基酸序列与 载体PET进行基因克隆，制备出具有N-末端组氨酸标签和异亮氨酸拉链基序重组基因 PET23dw-His-ILZ-hTRAILl 14-281 的TRAIL重组蛋白，简称HZ-TRAIL。 所述的重组肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体蛋白HZ-TRAIL氨基酸序列如SEQ ID NO: 1所示。 所述的重组肿瘤坏死因子相关凋本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种重组肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体蛋白，其特征在于，所述一种重组肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体蛋白由TRAIL114‑281氨基酸序列与载体PET进行基因克隆制备出具有N‑末端组氨酸标签和异亮氨酸拉链基序重组基因PET23dw‑His‑ILZ‑hTRAIL114‑281的TRAIL重组蛋白，简称HZ‑TRAIL。
【技术特征摘要】
...
【专利技术属性】
技术研发人员：金成浩，臧延青，罗英花，金美华，孙虎男，刘畅，
申请(专利权)人：黑龙江八一农垦大学，
类型：发明
国别省市：黑龙江;23
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