本发明专利技术属于医药技术领域，提供了一种细胞穿膜肽，由13个氨基酸组成，序列为RGGRVRRRWRGGR。本发明专利技术通过固相合成的方法得到所述多肽，并且通过化学合成的方法与抗肿瘤药物偶联，本发明专利技术所提供的偶联物具有通过血脑屏障的作用以及抑瘤作用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医药
，涉及肿瘤相关的药物领域，具体而言，本专利技术涉及一种 穿膜多肽，以及该多肽与抗肿瘤药偶联形成的偶联物。
技术介绍
脑瘤及脑转移瘤的发病率逐年上升。在对其治疗方面，血脑屏障被认为是阻止化 疗药物进入脑组织进而影响疗效的主要原因。血脑屏障是机体参与固有免疫的内部屏障之 一，由介于血循环与脑实质间的软脑膜、脉络丛的脑毛细血管壁和包于壁外的胶质膜所组 成，能阻挡病原生物和其他大分子物质由血循环进入脑组织和脑室。基本上100%的大分子 药物，包括多肽、重组蛋白、单克隆抗体、基于RNA干扰技术的药物、基因治疗相关药物等都 无法穿越血脑屏障，且大于98%的小分子药物也无法穿过血脑屏障。目前，放射性治疗与 化学疗法只能延长患者生命4个月，因此本专利技术致力于研究使现有药物更好的透过血脑屏 障。 多肽由于其具有极性末端和非极性末端，因此在体内有较高的利用度，由于本身 是内源性物质所以毒性小，但是多肽直接作为药物受到较大的限制，例如其稳定性差，不能 口服。近年来，多肽作为药物辅助功能的应用逐渐成为了新药研制的热点之一。细胞穿膜肽 是20世纪中期开始认识到的一类具特殊功能的多肽分子，英文学术名称一般写为cell2-p enetrating-peptides (CPPs)。它们通常由5~30个氨基酸组成，典型的一般由8~16个氨 基酸构成，具有生物膜穿透功能，还可携带其它分子甚至超分子颗粒进入细胞中。正是因为 这种特殊的功能，它们被看作生物活性分子有效的细胞内转运工具，具有广泛的应用前景。 近些年来多肽和药物通过共价方式形成组合物的例子很多，例如：多肽 Penetratin和阿霉素共价耦合用于治疗乳腺癌；多肽TAT和药物P53共价耦合用于治疗眼 癌转移；多肽YTA4与甲氨蝶呤共价耦合治疗乳腺癌。
技术实现思路
以下是本专利技术的详细描述： (1)本专利技术所述的穿膜肽 本专利技术所述的细胞穿膜肽，由13个氨基酸组成，而且是亲水性和疏水性交替组合 的，氨基酸序列为： RGGRVRRRWRGGR 该多肽本身不具有生理活性，但是具有透过血脑屏障的作用，本专利技术还涉及该多 肽的制备方法及其应用。 (2)本专利技术所述的穿膜肽的制备方法 本专利技术所需多肽是采用固相的方法制备的，固相合成是以固相载体树脂为载体， 从C端即羧基端向N端即氨基端逐渐添加氨基酸的过程。 本专利技术中优选树脂：Fmoc-wang树脂、2-cl-trt树脂，树脂取代度0. 24~0. 4. 本专利技术所使用的保护氨基酸为：Fmoc-Arg(pbf)-〇H，Fmoc-Gly-〇H，Fmoc-Val-〇H, Fmoc-Trp-OH，反应过程中保护氨基酸3~5倍过量。 本专利技术所使用的脱保护试剂为：哌啶/N，N-二甲基甲酰胺，比例为10:90~ 30:70。 本专利技术所使用的偶联试剂为：①苯并三氮唑-N，Ν，Ν'，Ν' -四甲基脲六氟磷酸盐 /1-羟基苯并三唑（Η0ΒΤ)，②2-(7-偶氮苯并三氮唑）-Ν，Ν，Ν'，Ν' -四甲基脲六氟磷酸酯 /1-羟基苯并三唑（Η0ΒΤ)，③Ν，Ν'_二异丙基碳二亚胺/1-羟基苯并三唑（Η0ΒΤ)。 本专利技术中，若使用第①或者第②种偶联试剂，那么反应中过程中应添加缚酸剂： DIEA/NMP。 本专利技术中所使用的切割试剂为：TFA/茴香硫醚/水/苯酚/1，2-乙二硫醇，比例 为：82· 5:5:5:5 ;2· 5〇 本专利技术中所使用MS-IT-T0F确定分子量，使用HPLC纯化粗肽 (3)本专利技术所述多肽与抗肿瘤药物阿霉素的连接方法 1)化合物II的合成 50m 反应瓶中加入 1. 0g(l. 72mmol)阿霉素，0· 52g(5. 20mmol) 丁二酸酐，30mlTHF， 滴加0. 66g(5. 12mmol)N，N-二异丙基乙胺（DIEA)，27°C搅拌6h，蒸干溶剂得蜡状物，加水搅 拌，有黄色固体析出，抽滤，水洗两次，干燥，得黄色固体1. 15g。 2)化合物I的合成 50m 反应瓶中加入 0· 22g(0. 32mmol)化合物 ΙΙ，0· 10g(0. 31mmol)0-苯并三氮 唑-Ν，Ν，Ν'，Ν' -四甲基脲四氟硼酸酯（TBTU)，5mlDMF，氮气保护，滴加0. 08g(0. 62mmol) N，N-二异丙基乙胺（DIEA)，27°C搅拌lh后，加入0. 10g多肽，27°C搅拌3h后，终止反应。使 用MS-IT-T0F确定分子量，使用HPLC纯化粗产物。 (4)本专利技术所述多肽与抗肿瘤药物紫杉醇的连接方法 1)化合物III的合成 50m 反应瓶中加入 1. 50g(l. 72mmol)紫杉醇，0· 52g(5. 20mmol) 丁二酸酐， 30mlTHF，滴加0. 66g(5. 12mmol)N，N-二异丙基乙胺（DIEA)，27°C搅拌6h，蒸干溶剂得蜡状 物，加水搅拌，有黄色固体析出，抽滤，水洗两次，干燥，得黄色固体1. 15g。 2)化合物IV的合成 50m 反应瓶中加入 0· 22g(0. 32mmol)化合物 ΙΙΙ，0· 10g(0. 31mmol)0-苯并三氮 唑-Ν，Ν，Ν'，Ν' -四甲基脲四氟硼酸酯（TBTU)，5mlDMF，氮气保护，滴加0. 08g (0. 62mmol) N，N-二异丙基乙胺（DIEA)，27°C搅拌lh后，加入0. 10g多肽，27°C搅拌3h后，终止反应。使 用MS-IT-T0F确定分子量，使用HPLC纯化粗产物。【附图说明】 图1为合成多肽的HPLC测试结果图。【具体实施方式】 下面结合【具体实施方式】对本专利技术进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐 明本专利技术，而不是为了限制本专利技术的范围。 在以下的实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。 实施例1:多狀的固相合成 当前第1页1 2 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种细胞穿膜肽，其特征在于，所述细胞穿膜肽由13个氨基酸组成，氨基酸序列为：RGGRVRRRWRGGR。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：孔维苓，郑学敏，龚珉，夏广萍，周植星，于冰，徐为人，
申请(专利权)人：天津药物研究院，
类型：发明
国别省市：天津;12
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