一种落花生茎叶药材的指纹图谱建立方法技术

本发明专利技术提供了一种河北产落花生茎叶药材指纹图谱的建立方法，所建立的方法包括采用高效液相色谱法检测河北产落花生茎叶药材中的原儿茶酸，液相色谱条件包括：色谱柱为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充材料；流动相包括：流动相A为乙腈，流动相B为酸性水溶液，进行梯度洗脱；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；检测波长：210nm~400nm；理论塔板数按原儿茶酸峰计算，应不低于6000。采用本发明专利技术的建立方法，可有效获得能够全面表征河北产落花生茎叶药材活性组分的指纹图谱，具有精密度、稳定性、重复性高的特点。获得的指纹图谱可用于确保河北产落花生茎叶药材质量的稳定一致，进而保证其用药的安全性和有效性。

Method for establishing fingerprint of groundnut stem and leaf medicinal material

The invention provides a Hebei groundnut leaf fingerprint establishment method, the method includes using high performance liquid chromatography of Hebei fall protocatechuic acid stems and leaves of peanut in medicinal materials, including liquid chromatographic conditions: column with eighteen alkyl silane bonded silica as filler materials; including the mobile phase, the mobile phase A was acetonitrile, mobile phase B is an acidic aqueous solution, gradient elution; flow rate: 1.0mL/min; column temperature: 30 C; detection wavelength: 210nm~400nm; the number of theoretical plates is calculated according to the peak of protocatechuic acid, should not be less than 6000. By adopting the method of the invention, the fingerprint of the active component of peanut leaves and leaves of Hebei peanuts can be effectively obtained, and the utility model has the advantages of accuracy, stability and high repeatability. The obtained fingerprints can be used to ensure the stable and consistent quality of groundnut leaves and leaves in Hebei, so as to ensure the safety and effectiveness of the medicine.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于药物分析检测领域，涉及一种落花生茎叶药材的指纹图谱建立方法，特别涉及河北产落花生茎叶药材的高效液相色谱（HPLC）指纹图谱建立方法。
技术介绍
中药作为多组分复杂体系，其化学成分众多，测定少数几种有效成分或指标成分不足以确保药材或制剂的质量，而宏观地综合分析已成为必然的趋势，中药指纹图谱这一质量控制模式便顺应了这个趋势。中药指纹图谱是指中药材经过适当的处理后，采用一定的分析手段和仪器检测得到的能够标识其中各种组分群体特征的共有峰的图谱，是以系统的化学成分研究和药理学研究为基础，经化学测定或基因鉴定得到的某种或某产地中药及其制剂所共有的、具有特异性的组分群体（某类或数类成分）的特征图谱或图像。中药指纹图谱能比较全面的反映中药中所含化学成分的种类与数量，尤其是在现阶段绝大多数有效成分没有明确的情况下，虽然它不能代替含量测定，但它比测定任何单一成分所提供的信息都丰富，能更好地反映中药的内在质量，大大提高中药质量控制和评价的技术水平和科技含量，成为建立现代中药质量标准体系的核心。落花生茎叶收载于《湖南省中药材标准》，为豆科落花生属植物落花生ArachishypogaeaL.的干燥地上部分。本品味甘，性平。具有散瘀消肿，解毒，止汗的功效，用于治疗跌打损伤，各种疮毒和盗汗等症。近年来随着对其化学成分和药理活性的深入研究，使得原本作为农作物废弃物的落花生茎叶药材得到了合理有效的利用，以落花生茎叶药材为主要原料的制剂，如落花安神合剂、降压避风片等被广泛应用于临床。现有落花生茎叶药材的质量标准仅从外观性状、简单的薄层鉴别角度对其进行控制，显然不能全面准确表征其内在质量。指纹图谱作为中药及其提取物成方制剂质量控制的最优方法，已被大家广为采纳。采用中药指纹图谱方式，一方面可以通过指纹图谱的特征性有效的鉴别样品的真伪和产地，另一方面通过对主要指纹图谱特征峰的面积或比例的控制，能有效控制药材的质量，确保其质量的均一和稳定，从而保证药材的安全性和有效性。
技术实现思路
为了解决上述问题，本专利技术的目的是提供一种建立落花生茎叶药材指纹图谱的方法，该方法建立的指纹图谱能够全面表征落花生茎叶的药物活性组分，从而表征和控制其内在质量。本专利技术的目的是通过以下技术方案来实现的：本专利技术提供了一种落花生茎叶药材指纹图谱的建立方法，所述方法包括采用高效液相色谱法检测落花生茎叶药材成分，其中，所述高效液相色谱法的条件包括：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充材料；流动相：流动相A为乙腈，流动相B为0.2%体积分数甲酸水溶液，进行梯度洗脱，所述梯度洗脱程序如下，其中流动相比例均为体积百分比：0~15min，流动相A为0~5%，流动相B为100%~5%；15~60min，流动相A为5%~30%，流动相B为95%~70%；60~80min，流动相A为30%~50%，流动相B为70%~50%；80~100min，流动相A为50%~100%，流动相B为50%~0%。优选地，所述高效液相色谱法的条件还包括：流速：1.0mL/min；柱温：30℃；检测波长：286nm；理论塔板数按原儿茶酸峰计算，应不低于6000。优选地，上述建立方法还包括通过以下步骤制备对照品溶液：取原儿茶酸对照品适量，加入甲醇溶解制成每1mL含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。并且，上述建立方法还包括通过以下步骤制备供试品溶液：取河北产落花生茎叶药材1.0g，置于烧瓶锥形瓶中，加入70%体积分数甲醇水溶液100ml，超声提取1h，提取液浓缩至干，用甲醇溶解转移至10ml容量瓶中，用0.45μm滤膜滤过，弃去初滤液，取续滤液即得。精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl注入高效液相色谱仪，根据以下色谱条件进行测定，得到指纹图谱：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充材料；Diamonsil钻石1代C18，5μm，2.5×460mm；流动相：流动相A为乙腈，流动相B为0.2%体积分数甲酸水溶液，进行梯度洗脱；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；紫外检测波长：286nm。所述梯度洗脱程序如下，其中流动相比例均为体积百分比：0~15min，流动相A为0~5%，流动相B为100%~5%；15~60min，流动相A为5%~30%，流动相B为95%~70%；60~80min，流动相A为30%~50%，流动相B为70%~50%；80~100min，流动相A为50%~100%，流动相B为50%~0%。根据上述建立方法得到的指纹图谱中共标记有7个特征吸收峰，其中峰1为对照品原儿茶酸，各峰以峰1为参照峰的计算相对保留时间和相对峰面积如下：相对保留时间：峰1：1.000；峰2：1.182；峰3：1.547；峰4：2.221；峰5：2.244；峰6：2.307；峰7：4.333；相对峰面积：峰1：1.000；峰2：7.204；峰3：2.594；峰4：1.452；峰5：2.026；峰6：1.023；峰7：0.421。以下是本专利技术的详细描述：色谱条件：采用梯度洗脱的方式；根据落花生茎叶药材成分的特点先后尝试了甲醇-水、甲醇-甲酸水溶液、乙腈-甲酸水溶液等流动相系统，并且尝试了多种不同梯度条件，经过对各种色谱图比较，最后确定乙腈-0.2%体积分数甲酸水溶液系统，采用梯度洗脱方式，得到的多个色谱峰有较好的分离效果。供试品溶液采用二极管阵列检测器（DAD）在210~400nm波长范围内进行全梯度扫描，并对各波长下的色谱图进行分析比较。结果表明，在286nm波长处，各色谱峰分离良好，特征峰明显且峰型较好，从图谱中可以尽可能的获取色谱组分信息及反映整体系组成的全貌，因此选定286nm为指纹图谱测定波长。通过对luna、Diamonsil钻石1代、Ameritech，菲罗门-ODS等C18色谱柱比较，最终确定用Diamonsil钻石1代C18（5μm，2.5×460mm）；柱温：30℃；检测波长：286nm；流动相A为乙腈，流动相B为0.2%体积分数甲酸水溶液；洗脱方式：梯度洗脱：洗脱梯度程序为：0~15min，流动相A为0~5%，流动相B为100%~5%；15~60min，流动相A为5%~30%，流动相B为95%~70%；60~80min，流动相A为30%~50%，流动相B为70%~50%；80~100min，流动相A为50%~100%，流动相B为50%~0%本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种落花生茎叶药材指纹图谱的建立方法，其特征在于：所述方法采用HPLC法，其条件为： 色谱柱：C18烷基硅烷键合硅胶为填充材料； 流动相：流动相A为乙腈，流动相B为0.2%体积分数甲酸水溶液，进行梯度洗脱；检测波长：286nm。

【技术特征摘要】
1.一种落花生茎叶药材指纹图谱的建立方法，其特征在于：所述方法采用HPLC法，其条件为：
色谱柱：C18烷基硅烷键合硅胶为填充材料；
流动相：流动相A为乙腈，流动相B为0.2%体积分数甲酸水溶液，进行梯度洗脱；检测波长：286nm。
2.根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于：所述梯度洗脱程序如下，其中流动相比例均为体积百分比：
0～15min，流动相A为0～5%，流动相B为100%～5%；
15～60min，流动相A为5%～30%，流动相B为95%～70%；
60～80min，流动相A为30%～50%，流动相B为70%～50%；
80～100min，流动相A为50%～100%，流动相B为50%～0%。
3.根据权利要求1或2所述的建立方法，其特征在于：
所述HPLC法检测包括以下步骤：
1）制备对照品溶液；
2）制备供试品溶液；
3）测定：根据以下色谱条件进行测定，得到指纹图谱：
色谱柱：C18烷基硅烷键合硅胶为填充材料，5μm，2.5×460mm；
流动相：流动相A为乙腈，流动相B为0.2%体积分数甲酸水溶液，进行梯度洗脱；
流速：1.0mL\...

【专利技术属性】
技术研发人员：张铁军，王丽莉，龚苏晓，朱雪瑜，田成旺，廖茂梁，许浚，孙卫，
申请(专利权)人：天津药物研究院，
类型：发明
国别省市：天津;12