本发明专利技术公开了一种消癥止痛颗粒可见波长指纹图谱的建立方法，所用方法包括以下步骤：⑴制备实验所需各对照品溶液；⑵制备供试品溶液；⑶采用高效液相色谱法进行测定得到指纹图谱，其中色谱条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料；采用梯度洗脱；紫外可变波长检测；⑷评价相似度：供试品指纹图谱采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版》进行评价。所述方法简便、稳定、精密度高、重现性好；可准确鉴别样品的真伪，提高了本品的质量可控性。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种中药复方消癥止痛颗粒的质量控制方法，具体涉及消癥止痛颗粒可变波长指纹图谱的方法建立及其标准指纹图谱。
技术介绍
中药复方消癥止痛颗粒原方来源于名老中医验方，由丹参、川芎、三七等9味药材组成，具有祛瘀消癥、行气止痛的功效。该方不仅能明显缩减子宫内膜异位症患者的盆腔包块，消除和减轻患者的痛经，同时还能有效缓解胸胁、乳房胀痛，舒缓情志等。消癥止痛颗粒的有效物质主要含有机酸、皂苷、生物碱等多类成分，其检测的紫外吸收波长变化范围大。目前对消癥止痛颗粒的现有质量控制技术是采用的固定波长的方法，分别对几个主要成分进行定量的含量测定以及利用TLC对处方药味进行定性鉴别。定量的含量测定的成分仅能代表该中药的单一成分数量变化，仅能代表一个点，具有一定的局限性，缺乏整体控制。
中药指纹图谱技术是一种表征中药所含成分与其质量关系的有效手段，在一张图谱中可以同时对复方中的多个成分进行监控，包括对已知成分和未知成分的研究，目前已成为国内外广泛认可的重要质量评价模式。
现有对指纹图谱的研究往往是采用固定检测波长的方式进行，由于消癥止痛颗粒所含成分复杂，有效物质的紫外吸收的波段范围广，因此采用固定波长的含量测定及固定波长的指纹图谱控制均有一定的局限性。
技术实现思路
本专利技术为消癥止痛颗粒的质量控制提供一种新的方法，即建立消癥止痛颗粒可变波长指纹图谱的方法，并由此方法得到消癥止痛颗粒的标准指纹图谱。
本专利技术建立的可变波长指纹图谱为首次应用到消癥止痛颗粒，以往的可变波长指纹图谱主要应用到单味药材的质量控制中，很少应用到复方中。可变波长指纹图谱能够较固定单波长指纹图谱提供更全面的中药的物质信息，使得图谱中相关药味的图谱峰的信息更全面，增强了指纹峰的可视化比较；有效表征了消癥止痛颗粒的质量，有利于产品质量监控。通过对图谱中的指纹特征峰的顺序、大小高低进行分析，从图谱整体的特征上进行质量控制，通过色谱指纹图谱的相似度比较，可评价样品优劣、考察样品的稳定性和一致性。制定可变波长指纹图谱方法对提高本品的质量控制具有重大的意义。
本专利技术的第一个目的是提供一种消癥止痛颗粒可变波长指纹图谱的建立方法，所述方法包括以下步骤：⑴制备对照品溶液：分别配制芍药苷、阿魏酸、丹酚酸B、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和丹参酮ⅡA对照品溶液，⑵制备供试品溶液：称取消癥止痛颗粒，进行提取，提取液用微孔滤膜过滤，即得供试品溶液；⑶采用高效液相色谱法进行测定得到指纹图谱，其中色谱条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料；采用梯度洗脱；紫外可变波长检测；⑷评价相似度：供试品指纹图谱采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版》进行评价。
本专利技术所使用的术语“可变波长程序检测”是指利用安捷伦紫外检测器特有的程序可变波长功能，根据各组分的出峰顺序，在不同时间段分别采用各组分的最佳吸收波长进行检测的方法。
本专利技术所使用的术语“评价相似度”是指对现有的消癥止痛颗粒供试品的指纹图谱按照国家药典委员会出版的《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版》软件进行相似度的评价。
根据本专利技术一个特别优选的实施方式，本专利技术检测方法中的如权利要求1中步骤⑵可以通过下述步骤实施：
供试品溶液的制备：取消癥止痛颗粒研细，精密称取0.50g，置具塞锥形瓶中，精密加如30％乙腈25ml，称定重量，超声提取20min，取出，放冷，再称定重量，用提取溶剂补足减失的重量，摇匀，用0.45μm微孔滤膜过滤，续滤液即为供试品溶液。
根据本专利技术一个特别优选的实施方式，本专利技术检测方法中的如权利要求1中步骤⑶可以通过下述步骤实施：
色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料；采用梯度洗脱，流动相A为0.10％磷酸，流动相B为乙腈，洗脱时间为65min，后续运行时间为20min，流速为1.0ml/min；柱温30℃；紫外检测波长；程序可变波长检测，所述的可变波长检测程序为：0min→9min检测波长为230nm；9.1min→15min检测波长为321m；15.1min→21min检测波长为203nm；21.1min→23min检测波长为270nm；23.1min→40min检测波长为203nm；40.1min→65min检测波长为270nm。
本专利技术的第二个目的是提供按照本专利技术可变波长指纹图谱的建立方法，采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版》软件得到消癥止痛颗粒的标准指纹图谱，时间窗为0.20，对照图谱生成方法为平均数法。其中有21个共有峰，保留时间分别为：4.4min、4.8min、6.2min、7.0min、10.3min、12.4min、15.5min、18.6min、19.4min、20.1min、22.1min、23.5min、24.2min、24.9min、27.3min、28.0min、28.9min、43.3min、49.1min、55.3min、63.3min、峰号记为1,2,3,………，21。以10号峰(人参皂苷Rg1)作为参比峰，峰号(相对保留时间)分别为：1(0.219)、2(0.240)、3(0.310)、4(0.351)、5(0.515)、6(0.619)、7(0.771)、8(0.929)、9(0.966)、10(1.000)、11(1.101)、12(1.168)、13(1.205)、14(1.241)、15(1.357)、16(1.394)、17(1.439)、18(2.155)、19(2.443)、20(2.751)、21(3.148)；其中3号峰为芍药苷，6号峰为阿魏酸，8号峰为三七皂苷R1，10号峰为人参皂苷Rg1，11号峰为丹酚酸B，17号峰为人参皂苷Rb1，21号峰为丹参酮ⅡA。这些共有特征峰构成了消癥止痛颗粒的可变波长指纹图谱，可作为消癥止痛颗粒的标准指纹图谱。
根据本专利技术一个优选的实施方式，按照本专利技术所提供可变波长指纹图谱的建立方法所得的消癥止痛颗粒的标准指纹图谱中的21个共有峰中，单峰面积占总峰面积大于5％，而小于10％的共有峰为7号峰、8号峰、9号峰；单峰面积占总峰面积大于10％的共有峰为4号峰、10号峰、11号峰；其余色谱峰峰面积均小于5％。
本专利技术方法具有如下显著的优点和用途：
(1)本专利技术首次公开程序可变波长检测用于消癥止痛颗粒指纹图谱的建立；
(2)在可变波长指纹图谱检测(见图3)中一次性可检测出消癥止痛颗粒的有效成分：芍药苷，阿魏酸，三七皂苷R1，人参皂苷Rg1，丹酚酸B，人参皂苷Rb1，丹参酮ⅡA。而单波长指纹图谱测定(见图4～图7)分4次进样才能对上述成分进行检测。表明可变波长指纹图谱能够较固定单波长指纹图谱更全面的反应中药的物质基础信息，增强了指纹峰的可视化比较；同时使得检验的效率得到大幅度提升。
(3)供试品溶液制备方法简单，色谱条件容易实现；
(4)方法稳定性和重现性均较好；
(5)有效表征了消癥止痛颗粒的质量，有利于产品质量控制；具有方法简便、稳定、精密度高、重现性好；可准确地鉴别产品的真伪优劣。
下面通过实施例及其附图详细阐述本专利技术的技术方案，所列举的实施例及附图对本专利技术没有限制。
附图说明
图1：实施例4的6批次消癥止痛颗本文档来自技高网...
【技术保护点】
消癥止痛颗粒可见波长指纹图谱的建立方法，所述方法包括以下步骤：⑴制备对照品溶液：分别配制芍药苷、阿魏酸、丹酚酸B、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和丹参酮ⅡA对照品溶液；⑵制备供试品溶液：称取消癥止痛颗粒，进行提取，提取液用微孔滤膜过滤，即得供试品溶液；⑶采用高效液相色谱法进行测定得到指纹图谱，其中色谱条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料；采用梯度洗脱；紫外检测波长：可变波长检测；⑷评价相似度：供试品指纹图谱采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版》进行评价，时间窗为0.20，对照图谱生成方法为平均数法。
【技术特征摘要】
1.消癥止痛颗粒可见波长指纹图谱的建立方法，所述方法包括以下步骤：
⑴制备对照品溶液：分别配制芍药苷、阿魏酸、丹酚酸B、三七皂苷R1、人参
皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和丹参酮ⅡA对照品溶液；
⑵制备供试品溶液：称取消癥止痛颗粒，进行提取，提取液用微孔滤膜过滤，
即得供试品溶液；
⑶采用高效液相色谱法进行测定得到指纹图谱，其中色谱条件为：色谱柱以十
八烷基硅烷键合硅胶为填料；采用梯度洗脱；紫外检测波长：可变波长检
测；
⑷评价相似度：供试品指纹图谱采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A
版》进行评价，时间窗为0.20，对照图谱生成方法为平均数法。
2.根据权利要求1所述的消癥止痛颗粒可变波长指纹图谱的建立方法，其特征
在于：步骤⑵中所述提取步骤为采用20～40％乙腈超声提取，提取时间为
10～30min。
3.根据权利要求1所述的消癥止痛颗粒可变波长指纹图谱的建立方法，其特征
在于：步骤⑵中所述微孔滤膜孔径为0.45μm。
4.根据权利要求1所述的消癥止痛颗粒可变波长指纹图谱的建立方法，其特征
在于：步骤⑶中所述梯度洗脱的流动相为0.1％磷酸与乙腈组成的梯度洗脱
液；梯度洗脱时间为85min，流速1.0ml/min；柱温为30℃；紫外检测波长：
200nm～400nm，以程序可变波长检测。
5.如权利要求4所述的消癥止痛颗粒可变波长指纹图谱的建立方法，其特征在
于：步骤⑶中所述梯度洗脱的洗脱程序以以下浓度配制进行：
0min→10min→60min→65min，乙腈20％→75％→20％→20％。
6.如权利要求4所述的消癥止痛颗粒可变波长指纹图谱的建立方法，其特征在
于：步骤⑶中所述程序可变波长检测的检测程序为：0min→9min检测波长
为230nm；9.1min→15min检测波长为321m；15.1min→21min检测波长
\t为203nm；21.1min→23min检测波长为270nm；23.1min→40min检测波
长为203nm；40.1min→65min检测波长为270nm。...
【专利技术属性】
技术研发人员：侯亚会，朱绪民，李存勇，胡鹃，
申请(专利权)人：四川滇虹医药开发有限公司，滇虹药业集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51
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