一种具有镇痛作用的可穿膜多肽制造技术

本发明专利技术公开了一种具有镇痛作用的可穿膜多肽。该多肽是a）-c）中任一所示的多肽：a）氨基酸序列如序列表中序列1第10-25位氨基酸残基所示的多肽；b）氨基酸序列如序列表中序列1所示的多肽；c）对a）或b）所示的多肽进行如下突变得到的具有1）-3）中至少一种作用的衍生多肽：将序列表中序列1的第10-25位氨基酸残基中除序列1的第12位的氨基酸残基序列经过一至十个氨基酸残基的取代、缺失和/或添加：1）预防和/或治疗疼痛；2）干扰肌动蛋白解聚因子/丝切蛋白的磷酸化；3）降低瞬时受体电位香草酸亚型1的功能。该多肽可用于预防和/或治疗疼痛。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种具有镇痛作用的可穿膜多肽。该多肽是a）-c）中任一所示的多肽：a）氨基酸序列如序列表中序列1第10-25位氨基酸残基所示的多肽；b）氨基酸序列如序列表中序列1所示的多肽；c）对a）或b）所示的多肽进行如下突变得到的具有1）-3）中至少一种作用的衍生多肽：将序列表中序列1的第10-25位氨基酸残基中除序列1的第12位的氨基酸残基序列经过一至十个氨基酸残基的取代、缺失和/或添加：1）预防和/或治疗疼痛；2）干扰肌动蛋白解聚因子/丝切蛋白的磷酸化；3）降低瞬时受体电位香草酸亚型1的功能。该多肽可用于预防和/或治疗疼痛。【专利说明】—种具有镇痛作用的可穿膜多肽
本专利技术涉及一种具有镇痛作用的可穿膜多肽。
技术介绍
生理条件下的疼痛可以作为机体对于身体损害的一种预警系统，引起机体的防御性保护反应。但在一些病理条件下可以产生慢性的病理性疼痛，对机体而言却构成一种难以忍受的折磨。因而，疼痛作为一种疾病，已经成为严重影响人们日常工作生活及生存质量的一大危害。随着生活节奏的加快和社会老龄化的到来，各种疼痛疾病尤其慢性炎症性疼痛的发病率约来越高。然而由于慢性病理性痛的病因复杂，分子机制和病理生理过程未被完全了解，故而尚缺乏有效而特异的治疗手段。关于疼痛的发病机制，目前认为主要是由外周敏化和中枢敏化所致。很多因素参与了痛觉敏化的产生和维持，如多种神经营养因子、蛋白激酶和离子通道等，最终导致突触传递效能的增强，敏化的产生。痛觉敏化可以发生于两个水平，即转录后水平的修饰和转录水平的改变，分别介导了早期和长期的痛觉敏化。但迄今为止，尚没有任何一个因素可以完全解释痛觉敏化的形成机制，而是细胞内的各个信使分子之间通过相互作用、相互制约，形成错综复杂的信号传递网络，共同参与痛觉敏化的产生。在这个复杂的网络中，无论是转录后水平的修饰还是转录水平的改变，蛋白质磷酸化均起着核心作用。目前已经发现多种蛋白激酶，如 PKA (protein kinase A), PKC (protein kinase C), CaMK (calcium/calmodulindependent protein kinase), PI3K(phosphatidylinositol3kinase), ERK(extraceIIuarsignal regulated kinase)等，既可以通过磷酸化离子通道、受体等参与早期痛觉敏化的调控，也可以通过调控痛觉传导中关键分子的转录参与长期痛觉敏化的调控。因此，如果确定某些蛋白激酶参与疼痛传导及痛觉调制，进而找到发挥作用的靶蛋白，并且通过确定其磷酸化位点或关键的结构域，即可据此开发一些特异性较强且副作用较小的镇痛药物。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种预防和/或治疗疼痛的多肽及其应用。本专利技术所提供的预防和/或治疗疼痛的多肽，名称为TAT-S3，为a) -c)中任一所示的多肽:a)氨基酸序列如序列表中序列I第10-25位氨基酸残基所示的多肽；b)氨基酸序列如序列表中序列I所示的多肽；c)对a)或b)所示的多肽进行如下突变得到的具有I) -3)中至少一种作用的衍生多肽:将序列表中序列I的第10-25位氨基酸残基中除序列I的第12位之外的氨基酸残基序列经过一至十个氨基酸残基的取代、缺失和/或添加；所述I)-3)为:I)预防和/或治疗疼痛；2)干扰肌动蛋白解聚因子/切丝蛋白(ADF/cofilin)的磷酸化；3)降低瞬时受体电位香草酸亚型I的功能。其中，序列表的序列I由25个氨基酸残基组成，序列I的第1-9位氨基酸残基组成具有穿透细胞膜作用的区域，该区域可以被具有相同作用的其它序列替换；序列I的第10-25位氨基酸残基构成可以竞争性抑制细胞内LIMK (LIM motif-containing proteinkinase, LIMK)对肌动蛋白解聚因子/切丝蛋白cofilin的第3位丝氨酸(Ser_3)磷酸化的区域，其中，序列I的第12位丝氨酸为UMK的磷酸化位点(即拮抗内源性Ser-3磷酸化的位点)。其中，b)所示的多肽是对a)所示的多肽进行如下突变得到的具有所述I) -3)中至少一种作用的多肽:在a)所示的多肽的氨基端添加序列I的第1-9位的9个氨基酸残基。在实际应用中，也可以对a)所示的多肽进行如下突变得到具有所述1)-3)中至少一种作用的多肽:保证序列表中序列I的第12位氨基酸残基不变，将序列I的第10-11位氨基酸残基进行一个以上的缺失，将序列I的第13-25位氨基酸残基进行一个以上的添加；或者保证序列表中序列I的第12位氨基酸残基不变，将序列I的第10-11位氨基酸残基进行一个以上的添加，将序列I的第13-25位氨基酸残基进行一个以上的缺失。编码上述任一所述多肽的核酸分子(DNA或RNA)也属于本专利技术的保护范围。所述核酸分子具体可为上述任一所述多肽的编码基因。含有编码上述任一所述多肽的核酸分子的表达盒、重组载体、转基因细胞系(非动植物繁殖材料)或重组菌也属于本专利技术的保护范围。上述任一所述多肽和/或编码所述多肽的核酸分子在制备预防和/或治疗疼痛的产品中的应用以及以上述任一所述多肽和/或编码所述多肽的核酸分子为活性成分的预防和/或治疗疼痛的产品也属于本专利技术的保护范围。以上述任一所述多肽和/或编码所述多肽的核酸分子为活性成分制成的干扰肌动蛋白解聚因子/丝切蛋白(cofilin)的磷酸化的产品和/或降低瞬时受体电位香草酸亚型I的功能的产品也属于本专利技术的保护范围。上文中，所述疼痛可为炎症性疼痛。所述预防和/或治疗疼痛可体现为缓解痛觉敏化。所述缓解痛觉敏化具体可为缓解炎性痛觉敏化，如缓解炎性热痛觉敏化。上述产品具体可为药物。需要的时候，在上述药物中还可以加入一种或多种药学上可接受的辅料，所述辅料包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、吸收促进剂、表面活性剂、润滑剂和稳定剂等。本专利技术的药物可以制成注射液、干粉针剂、片剂或粒剂等多种形式。上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。TAT-S3能够干扰肌动蛋白解聚因子/丝切蛋白(cofilin)的磷酸化，降低瞬时受体电位香草酸亚型I的功能，能缓解炎性热痛觉敏化，可用于预防和/或治疗疼痛。【专利附图】【附图说明】图1为体外激酶实验以及western blot结果图2为TAT-S3及对照肽TAT-S3A的序列。图3为蛛网膜下腔注射TAT-S3p印tide对大鼠体内cofilin的磷酸化的影响。图4为蛛网膜下腔注射TAT-S3对TRPVl的功能的影响图5为蛛网膜下腔注射TAT-S3对CFA诱导的大鼠热痛觉敏化程度的影响。图6为蛛网膜下腔注射TAT-S3不影响大鼠炎症对侧的热痛觉敏化程度。图7为TAT-S3A没有镇痛或是促进痛觉敏化的作用。【具体实施方式】以下的实施例便于更好地理解本专利技术，但并不限定本专利技术。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中采用的数据处理和统计学检验如下:实验结果采用GraphPad Prism5.01版软件分析，以平均值土标准误(Mean土SEM)表示。图1、3、5所示柱状图中两组比较使用非配对t检验(unpaired t Test)。行为学实验以及钙成像实验结果采用双本文档来自技高网...

【技术保护点】
a）?c）中任一所示的多肽：a）氨基酸序列如序列表中序列1第10?25位氨基酸残基所示的多肽；b）氨基酸序列如序列表中序列1所示的多肽；c）对a）或b）所示的多肽进行如下突变得到的具有1）?3）中至少一种作用的衍生多肽：将序列表中序列1的第10?25位氨基酸残基中除序列1的第12位的氨基酸残基序列经过一至十个氨基酸残基的取代、缺失和/或添加；所述1）?3）为：1）预防和/或治疗疼痛；2）干扰肌动蛋白解聚因子/丝切蛋白的磷酸化；3）降低瞬时受体电位香草酸亚型1的功能。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王韵，李逸，陈海靖，胡芳，杜怡娟，
申请(专利权)人：北京大学，
类型：发明
国别省市：