一种新的多肽——人质膜转运识别蛋白25和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－人质膜转运识别蛋白２５，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如恶性肿瘤，血液病，ＨＩＶ感染和免疫性疾病和各类炎症等，本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的人质膜转运识别蛋白２５的多核苷酸的用途。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽——人SNARE蛋白25，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。质膜在细胞生活中起着重要的作用，因为细胞与环境发生的一切联系和反应，都必须通过质膜。如细胞外的物质进入细胞或细胞内的物质排出细胞，以及激素、药物对细胞的作用、代谢调控、细胞识别和免疫等等都是关系到质膜的功能问题。物质进出细胞必须通过质膜，在活细胞中质膜对物质的通透有高度的选择性。物质通过质膜主要有三种途径被动运输、主动运输和内吞外排作用。真核生物的蛋白质在细胞内的转运过程包括分泌作用、胞吞作用、激素和神经递质的胞吐作用等。(Nature 1994 Nov 3；372(6501)55-63)大分子如蛋白质、多核苷酸和多糖等通过膜只能依赖于内吞外排作用。细胞运输这些大分子的机制不同于那些小的溶质和离子的运输，它涉及到一些有界膜的小囊泡有顺序的形成和融合。内吞和外排都属于主动运输，因为它们都需要能量的供应。内吞和外排的一个重要特征是细胞摄入的或分泌的大分子被收入在小囊泡中，而不是与细胞中其他的大分子或细胞器混合。每个小囊泡只与特定的膜结合，保证了在细胞内侧与外侧的大分子有序地转移。小囊泡快速地大规模形成和融合是所有真核细胞的基本特征之一。细胞内有复杂的不同的膜系统，运输囊泡从供体细胞器取得其内容物是有选择的，它们与靶膜融合也必然有高度选择性，这表明在细胞所有类型的运输囊泡应显示有依据其来源和内容物识别它们的表面标志以及通过靶膜上的互补受体来识别。虽然这种识别的机制还知道得不确切，一个引人注目的学说是涉及一类称为SNARE的蛋白，它有互补的结构，存在于囊泡膜上的v-SNARE和存在于靶膜上的t-SNARE，由它们互补指导囊泡运输。在此过程中，一个运输囊泡在其v-SNARE发现互补的t-SNARE前，可能要检查很多可能的靶膜。根据这种观点，这种决定性的识别步骤是由单体GTP酶家族的一些成员称为Rab蛋白所控制。Rab蛋白检查v-SNARE和t-SNARE之间的配合是否正确。Rab蛋白连接到供体膜出芽的有被小囊的表面，当囊泡遇到靶膜时，v-SNARE结合到t-SNARE，引起囊泡保持足够长的时间以使Rab蛋白水解结合的GTP，将囊锁在靶膜上，准备下一步融合。细胞内膜的融合是通过特定的融合蛋白催化的，它能克服此过程中的能障。但这一机制仍了解得很少，只知道此过程需要ATP、GTP、酰基辅酶A和若干种蛋白质。已知有两种基本的蛋白成分，称为NSF(N-乙基顺丁烯二酰亚胺敏感融合蛋白N-ethylmaleimide-sensitive fusion protein)和SNAPs(可溶性NSF连接蛋白)(，在将要融合的膜和胞液之间循环。SNAPs结合到囊泡膜的v-SNARE和靶膜的t-SNARE启动了融合器的组装。融合器能催化在囊泡-靶膜界面两个脂双层的融合。由上述可见，SNARE蛋白是一个蛋白家族，它的全称是SNAP(可溶性NSF连接蛋白)受体蛋白。SNARE蛋白的基本作用包括(1)对高度选择性的囊泡和靶膜结合的识别有重要调控作用；(2)对于细胞脂双层的融合有直接的催化作用。此外，根据对NSF研究，发现其对于血小板颗粒的分泌、神经递质的释放等过程有重要影响，因此作为NSF结合蛋白的受体，SNARE对于上述过程也有重要作用。(Blood.1999 Aug 15；94(4)1313-8)；(J Neurosci.1998 Dec15；18(24)1024-9)因此，SNARE蛋白对于蛋白质等大分子的细胞分泌、细胞内的转运、激素和药物对细胞的作用、代谢调控、细胞识别和免疫等等过程都具有极其重大的意义。多年来的研究证明，高尔基体与细胞分泌有关。在生物体内，一些分泌性蛋白质是通过高尔基体排出细胞的，高尔基体是糖类生物合成的主要场所，如完成糖蛋白的合成、多糖的合成以及氨基多糖的硫酸化等。高尔基体也是内质网(ER)产物的分选和发送站，它所合成的糖类，很大比例是作为寡糖侧链连接到从ER来的蛋白质和脂类上。某些寡糖基团作为标记指导特异蛋白质到溶酶体或其他部位。根据对高尔基体的研究，已被发现的两种高尔基体中的SNARE蛋白(GS28和GS27)，分子量分别为28-KD和27-KD，它们被分别定位于人染色体17q11和17q21，它们含有一个位于中心的coiled-coil功能域，在羧基末端有一个膜的锚位点。(Science 1996 May 24；272(5265)1161-3)当然，对高尔基体中SNARE蛋白结构的研究还有待进一步的完成。在体外实验的结果显示，在内质网(ER)和高尔基体的联合转运过程中，SNARE蛋白对于囊泡和靶膜的识别和融合有着极其重要的作用。(Science 1996 May24；272(5265)1161-3)；(J Cell Biol 1996 May；133(3)507-16)已有的研究表明，当囊泡结合到靶膜上时，SNARE与可溶的SNAP蛋白、NSF结合，这种20s的复合物可以帮助膜的融合，其中NSF起到ATP酶的作用，估计其作用是提供能量来克服能量障碍。(Mammalian Genome 7850-852，1996)N-乙基顺丁烯二酰亚胺敏感因子(N-ethylmaleimide-sensitive factor NSF)是一种与真核生物囊泡融合有关的三磷酸腺苷酶(ATPase)，和SNAP蛋白一起，起到通过ATP水解分解顺面SNARE复合物的作用，为反面SNARE复合物的形成做准备。由上可见，SNARE蛋白对于ER-高尔基体所形成的蛋白和相关的转运等过程有极其重要的作用(Mol Cell 1999 Jul；4(1)97-107)另外，通过基因定位方法，发现编码人的GS27的基因位于导致家族性高血压病症的基因附近，有研究表明，GS2 7的编码基因可能会对家族性高血压症的诊断和治疗有作用。(Genomics 1999 Apr 15；57(2)285-8)根据氨基酸同源比较的结果，本专利技术的多肽被推断鉴定为一种新的人SNARE蛋白25(HSNARE25)，它的同源蛋白是小家鼠的高尔基体SNARE-29KD，其蛋白号是AF035823，它们在结构上的相似性决定了它们可能具有相同的生物学功能。由于如上所述人SNARE蛋白25蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人SNARE蛋白25蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人SNARE蛋白25蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽——人SNARE蛋白25以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人SNARE蛋白25的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人SNARE蛋白25的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产人SNARE蛋白25的方法。本专利技术的另一本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－人ＳＮＡＲＥ蛋白２５，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博容基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]