一种新的多肽——人转录终止因子结合蛋白54和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－人转录终止因子结合蛋白５４，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如恶性肿瘤，血液病，ＨＩＶ感染和免疫性疾病的各类炎症等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的人转录终止因子结合蛋白５４的多核苷酸的用途。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽--人转录终止因子结合蛋白54，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。Rho是一种Ras GTPase的同源蛋白，它广泛存在于从酵母到哺乳动物的体内。Rho在有活性的GTP结合形式和无活性的GDP结合形式之间转换，这一转换是调节细胞支持和运动性，增强细胞收缩反应和细胞质移动的开关。在细胞过程的特殊阶段和特定时候，Rho可以指导肌动蛋白构成的细胞骨架的重组。Rho还可以激活一些免疫方面的应答反应，可以通过一些激酶途径将信号传递至核中。根据已有的研究，已经证明，有两个信号过程与Rho的调控有关一是某些G蛋白结合受体的激活，如溶血磷脂酸受体；二是一些小的GTPase的激活，包括Ras，CDC42，and Rac等。最近的研究证明，有一些酶可以与Rho相互作用，包括一些脂酶和一些丝氨酸/苏氨酸激酶，如PKN和p160ROCK。当然，对Rho功能的研究还有很多方面有待进一步完善，包括Rho对细胞的刺激作用等。(J Biochem(Tokyo)1996 Aug；120(2)215-28)Rho结合蛋白是一个家族，它们都具有Rho结合功能域，这个功能域的具体结构是从一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶--p160(ROCK)中被发现的，但只知道它的一级结构，Rho结合功能域位于p160(ROCK)的NH2末端，包括934-1015位的氨基酸序列，其中，K934M，L941A，E1008A突变极大地减弱了Rho结合功能，I1009A突变则会导致Rho结合功能的丧失，对Rho结合功能域的研究还有待进一步开展。(J Biol Chem 1996 Sep 20；271(38)23022-8)在老鼠的体内发现了一种蛋白，被称为rhophilin，这是一种Rho结合蛋白。Rhophilin的mRNA在成熟个体的睾丸组织内高度表达。此外，rhophilin在微生物、细菌和鼠的精子尾部的纤维鞘中被证明存在。(FEBS Lett 1999 Feb19；445(1)9-13)Rhophilin可以结合于活化的GTP-Rho，rhophilin的Rho结合功能域和一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶PKN有40％的相同性，PKN也可以结合到GTP-Rho并因这种结合而活化。(Science 1996 Feb 2；271(5249)645-8)Rhotekin也是一种新发现的Rho结合蛋白，这是从鼠的脑cDNA文库中发现的，它具有与rhophilin和丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(PKN)同源的Rho结合功能域。(J Biol Chem 1996 Jun 7；271(23)13556-60)Rho及其结合蛋白被证明可以在肌球蛋白轻链(MLC)的磷酸化作用过程中有作用，因此，Rho及其结合蛋白可以对平滑肌的收缩、非肌肉细胞中肌动蛋白和肌球蛋白的相互作用等有调节作用。(Science 1996 Jul 12；273(5272)245-8)由于上述的Rho的功能，因此，Rho结合蛋白也被认为在很多生命过程中有着重要作用，包括(1)调节细胞支持和运动性，调节细胞收缩反应和细胞质移动；(2)影响肌动蛋白构成的细胞骨架的重组；(3)调控某些信号传导过程，如调控一些GTPase，包括Ras，CDC42，and Rac等。总的来讲，Rho结合蛋白在细胞的信号传导、细胞周期、细胞结合、细胞结构和运动等方面都有着重要的作用。根据氨基酸同源比较的结果，本专利技术的多肽被推断鉴定为一种新的人Rho结合蛋白54(HRhoBP54)，其同源蛋白是小家鼠的Rho结合蛋白(rhophilin)，蛋白号是U43194。由于如上所述人Rho结合蛋白54蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人Rho结合蛋白54蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人Rho结合蛋白54蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽--人Rho结合蛋白54以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人Rho结合蛋白54的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人Rho结合蛋白54的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产人Rho结合蛋白54的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽--人Rho结合蛋白54的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽--人Rho结合蛋白54的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与人Rho结合蛋白54异常相关的疾病的方法。本专利技术涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO2氨基酸序列的多肽。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO1中2-1468位的序列；和(b)具有SEQ ID NO1中1-2869位的序列。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制人Rho结合蛋白54蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及用该方法获得的化合物。本专利技术还涉及一种体外检测与人Rho结合蛋白54蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本专利技术多肽的量或生物活性。本专利技术也涉及一种药物组合物，它含有本专利技术多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。本专利技术还涉及本专利技术的多肽和/或多核苷酸在制备用于治疗癌症、发育性疾病或免疫性疾病或其它由于人Rho结合蛋白54表达异常所引起疾病的药物的用途。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。本说明书和权利要求书中使用的下列术语除非特别说明具有如下的含义“核酸序列”是指寡核苷酸、核苷酸或多核苷酸及其片段或部分，也可以指基因组或合成的DNA或RNA，它们可以是单链或双链的，代表有义链或反义链。类似地，术语“氨基酸序列”是指寡肽、肽、多肽或蛋白质序列及其片段或部分。当本专利技术中的“氨基酸序列”涉及一种天然存在的蛋白质分子的氨基酸序列时，这种“多肽”或“蛋白质”不意味着将氨基酸序列限制为与所述蛋白质分子相关的完整的天然氨基酸。蛋白质或多核苷酸“变体本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－人Ｒｈｏ结合蛋白５４，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，秦义龙，申晓东，林盛荫，
申请(专利权)人：上海博容基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]