双特异性抗体分子和抗原-转染的T-细胞以及它们在医药中的用途制造技术

本发明专利技术涉及双特异性(单克隆)抗体分子，其具有与CD8+T-细胞上的抗原结合的第一结合结构域，所述的抗原非天然地存在于CD8+T-细胞之中和/或之上；和与天然地存在于肿瘤细胞表面上的肿瘤-特异性抗原结合的第二结合结构域。所述的双特异性(单克隆)抗体分子在与转导的CD8+T-细胞，和/或T-细胞受体的结合特别有用，所述转导的CD8+T-细胞包含非天然地存在于所述CD8+T-细胞之中和/或之上的抗原。本发明专利技术提供应用所述(双特异性)抗体分子作为药物，所述(双特异性)抗体分子用于具体疾病的治疗，以及用于包含所述(双特异性)抗体分子的药物组合物/药物，其中，在特定的治疗方案中，所述的(双特异性)抗体分子与转导的CD8+T-细胞，和/或T-细胞受体结合施用，所述的CD8+T-细胞包含非天然地存在于所述CD8+T-细胞之中和/或之上的抗原。本发明专利技术的另外的方面还涉及编码所述双特异性(单克隆)抗体分子的核酸，载体，宿主细胞，制备所述(双特异性)抗体分子的方法，以及包含本发明专利技术的(双特异性)抗体分子的试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】双特异性抗体分子和抗原-转染的T-细胞以及它们在医药 中的用途 本专利技术涉及双特异性（单克隆）抗体分子，其具有与CD8+T-细胞上的抗原结合的 第一结合结构域，所述的抗原非天然地存在于CD8+T-细胞之中或之上；和与天然地存在于 肿瘤细胞表面上的肿瘤-特异性抗原结合的第二结合结构域。此外，还提供了编码本专利技术 的（单克隆）双特异性抗体分子的核酸。本专利技术的另外方面还提供包含所述核酸序列的载 体和宿主细胞，生产本专利技术的双特异性抗体分子的方法，以及包含所述（双特异性）抗体分 子的药物/组合物。再有，本专利技术还涉及经转导的⑶8+T-细胞，其包含非天然地存在于所述 CD8+T-细胞之中和/或之上的抗原，和/或T-细胞受体。本专利技术还提供所述双特异性抗体 分子在制备用于治疗具体疾病以及在包含所述（双特异性）抗体分子的药物组合物/药物 中的用途，其中，在特定的治疗方案中，所述的（双特异性）抗体分子与经转导的CD8+T-细 胞，和/或T-细胞受体结合施用，所述的CD8+T-细胞包含非天然地存在于所述CD8+T-细胞 之中和/或之上的抗原。本专利技术还提供治疗具体疾病的方法和包含本专利技术的（双特异性） 抗体分子的试剂盒。 专利技术背景 T-细胞（即T淋巴细胞）输入（transfusion)，称为过继T-细胞疗法，已 经过测试用于癌症和慢性感染的治疗。过继T-细胞疗法具有增强抗肿瘤免疫，提 高疫苗效力以及限制移植物-抗-宿主疾病的潜力。过继T-细胞疗法用作细胞源， 尤其是，细胞毒性T-细胞（CTLs)，或肿瘤浸润淋巴细胞（TILs)。双特异性抗体 可用于武装（arm)（活化的）T-细胞以形成它们和肿瘤细胞表面抗原之间的桥 梁。双特异性抗体在一侧靶向肿瘤细胞上的表面标记/抗原，在另一侧靶向另一种天 然地/内源性地在细胞中或细胞上表达的标记/抗原，例如在下述文献中所描述的， 如 Glorius 等，Bloodll6(2010), 1173 ;Rothe 等，Bloodll8(2011), 1585 ;Zhengxing 等，Bloodlll (2007) ,2211-2219, Herrmann 等，Cancer Research68(2008) ,1221-1227; Singer 等，Journal of Immunotherapy33(2010)，599-608 ;Brandl 等,Experimental Hematology27(1999)，1264-1270 ;James 等,European Journal of Cancer35(1999)，S343-S344;Chen 等，Clinical Cancer Researchl (1995) ,1319-1325; Valera 等，Molecular Cancer Therapeutics9 (2010),1872-1883 ;Gelderman 等,European Journal of Immunology36(2006), 977-984 ；Schweizer 等,Cancer Immunology Immunotherapy51 (2002)，621-629 ;Friedman等，Biotechnology and Applied Biochemistry54(2009)，12卜131;Schaefer 等，Cancer Cell20(2011)，472-486and Kazuhiko 等，International Journal of Molecular Medicine25(2010)，209-215。 已知抗原特异性的细胞毒性T-细胞（CTLs)具有杀死人癌细胞的能力，如向 患有黑素瘤的患者过继转移先体外后体内（ex-vivo)扩增的肿瘤浸润淋巴细胞（tumor infiltrating lymphocytes, TILs)或T-细胞受体基因-转染的T-细胞后所显示的肿瘤 阻抑（regression)那样（Leen 等，Annu. Rev. Immunol. 115 (2007)，98-104)。一种已知 的替代途径是利用双特异性抗体重新定向大量的内源T-细胞。这些双特异性抗体，其中 的一些设计形式（formats)称作BiTE(指双特异性T-细胞衔接器（engager)）是以 如下方式构建的，即在一侧靶向表面标记CD3(其天然地存在于/内源性地表达于T-细 胞之上），在另一侧靶向肿瘤细胞上的表面抗原（其天然地/内源性地表达于肿瘤细胞 表面）。此外，在之前的工作中已表明，这一具体设计的抗-CD3抗-靶抗原双特异性抗 体具有异常高的效力并可以衔接（engage)CD8+T-细胞和CD4+T-细胞，以极低的效应物 对革G标（E:T)比率裂解癌细胞。两种BiTE抗体目前处于临床试验中：Blinatumomab(又 名MT103)是对⑶3和⑶19具有双特异性。其正在患有晚期复发性非霍奇金淋巴瘤 (non-Hodgkin，s lymphoma，NHL) (Bargou 等，Science321 (2008) ,974-977)的患者中进行 I期临床试验，并在患B-前体急性成淋巴细胞白血病（B-precusor acute lymphoblastic leukemia，B-ALL) (Topp 等，Bloodl 12 (2008)，1926)的患者中进行 II 期临床试验。所 述的第二种、处于I期临床试验阶段的BiTE抗体是MT-IlO (Micromet Inc)，其革巴向 泛-癌-相关-抗原（pan-carcinoma-related antigen),上皮细胞黏附分子（EpCAM 或 CD326)和 CD3(fcischwein 等，Mol. Immunol. 43(2006)，1129-1143)。双特异性抗体 (catumaxumab [ Removab? ];抗CD3和人EpCAM双特异性）已于2009年在欧洲获准面世。 体外（In vitro)和小鼠模型系统中，双特异性抗体能通过同时结合⑶3和革巴抗 原连接T-细胞和癌细胞触发包括细胞毒性颗粒融合以及瞬时细胞因子和粒酶释放在内的 T-细胞活化。但是，在利用此类双特异性抗体，例如作为用于人的治疗方案的一部分时，大 量T-细胞的活化（不依赖于T-细胞抗原特异性）和/或肿瘤细胞裂解的旁观者效应，导 致严重的问题。 -种此类的问题是所谓的细胞因子释放综合症（cytokine release syndrome, CRS)，其在小鼠模型系统中通常不产生什么效果，但在人中具有灾难性的影响 (Suntharalingam 等，The New England Journal of Medicine355(2006) ,1018-1028)。 CRS包括头痛，肌肉疼痛，恶心，腹泻，红斑，血管扩张和低血压。最严重的形式导致肺浸润， 肺损伤，肾衰竭和弥漫性血管内凝血（Suntharalingam等，The New England Journal of MediCine355 (2006)，1018-1028)。即使CRS与双特异性抗体的应用无关，也已观察到施用 双特异性抗体后的大量其他副作用（超过80%的三级或更高的毒本文档来自技高网...

【技术保护点】
试剂盒，其包括：(A)双特异性抗体分子，其包含：(i)与CD8+T‑细胞上的抗原结合的第一结合结构域，所述的抗原非天然地存在于CD8+T‑细胞之中或之上；和(ii)与天然地存在于肿瘤细胞表面上的肿瘤‑特异性抗原结合的第二结合结构域；和(B)用非天然地存在于所述CD8+T‑细胞之中或之上的抗原转导获自待治疗的受试者的CD8+T‑细胞所需的材料。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.02.03 EP 12153786.41. 试剂盒，其包括： (A) 双特异性抗体分子，其包含： (i) 与CD8+T-细胞上的抗原结合的第一结合结构域，所述的抗原非天然地存在于 ⑶8+T-细胞之中或之上；和 (ii) 与天然地存在于肿瘤细胞表面上的肿瘤-特异性抗原结合的第二结合结构域；和 (B) 用非天然地存在于所述⑶8+T-细胞之中或之上的抗原转导获自待治疗的受试者 的⑶8+T-细胞所需的材料。2. 权利要求1的试剂盒，其中，所述转导CD8+T-细胞所需的材料是编码非天然地存在 于所述⑶8+T-细胞之中或之上的抗原的核酸。3. 双特异性抗体分子，其包含： (i) 与CD8+T-细胞上的抗原结合的第一结合结构域，所述的抗原非天然地存在于 ⑶8+T-细胞之中或之上；和 (ii) 与天然地存在于肿瘤细胞表面上的肿瘤-特异性抗原结合的第二结合结构域 用作药物（medicament)，其中，所述的双特异性抗体分子在施用来自所述受试者的、经 转导的⑶8+T-细胞之前、同时或之后施用，所述的⑶8+T-细胞包含非天然地存在于⑶8+T 细胞之中或之上的抗原。4. 药物组合物，其包含双特异性抗体分子，所述的双特异性抗体分子包含： (i) 与CD8+T-细胞上的抗原结合的第一结合结构域，所述的抗原非天然地存在于 ⑶8+T-细胞之中或之上；和 (ii) 与天然地存在于肿瘤细胞表面上的肿瘤-特异性抗原结合的第二结合结构域 其与包含非天然地存在于CD8+T细胞之中或之上的抗原的、经转导的CD8+T-细胞结合 施用，其中，所述的双特异性抗体分子在施用所述经转导的CD8+T-细胞之前、同时或之后 施用，并且所述的CD8+T-细胞由待治疗的受试者获得。5. 双特异性抗体分子，其包含： (i) 与CD8+T-细胞上的抗原结合的第一结合结构域，所述的抗原非天然地存在于 ⑶8+T-细胞之中或之上；和 (ii) 与天然地存在于肿瘤细胞表面上的肿瘤-特异性抗原结合的第二结合结构域 用于治疗恶性疾病（malignantdisease)的方法，其中，所述的双特异性抗体分子在施 用包含非天然地存在于CD8+T细胞之中或之上的抗原的、经转导的CD8+T-细胞之前、同时 或之后施用，并且所述的CD8+T-细胞由待治疗的受试者获得。6. 恶性疾病治疗方法，所述方法包括向所需受试者施用双特异性抗体分子，所述的双 特异性抗体分子包含： (i) 与CD8+T-细胞上的抗原结合的第一结合结构域，所述的抗原非天然地存在于 ⑶8+T-细胞之中或之上；和 (ii) 与天然地存在于肿瘤细胞表面上的肿瘤-特异性抗原结合的第二结合结构域， 其中，所述的双特异性抗体分子在施用来自所述受试者的经转导的CD8+T-细胞之前、 同时或之后施用，所述的CD8+T-细胞包含非天然地存在于CD8+T细胞之中或之上的抗原。7. 权利要求5的双特异性抗体，或权利要求6的方法，其中，所述的恶性疾病选自：起 源于上皮、内皮或间皮的癌以及血液癌症。8. 权利要求1或2的试剂盒，权利要求4的药物组合物，权利要求3、5或7任一项的 双特异性抗体分子，或权利要求6或7的方法，其中，所述的双特异性抗体分子选自：完全抗 体，F(ab)_，Fab' -SH-，Fv_，Fab' _，F(ab'）2-片段，嵌合抗体，CDR-移植抗体，完全人抗体， 二价抗体-构建体，抗体-融合蛋白，合成抗体，二价抗体，三价抗体，四价抗体，二价单链抗 体，三价单链抗体和多价单链抗体。9. 权利要求1、2或8的试剂盒，权利要求4或8的药物组合物，权利要求3、5、7或8的 双特异性抗体分子，或权利要求6-8任一项的方法，其中所述的非天然地存在于CD8+T-细 胞之中或之上的抗原选自：cripto(隐秘家族蛋白（crypticfamilyprotein))，CD(分化 族（clusterofdifferent...

【专利技术属性】
技术研发人员：C布尔奎因，R卡斯托尔蒂，S恩德雷斯，C克莱恩，S科博尔德，G尼德菲尔纳，C苏斯特曼，
申请(专利权)人：霍夫曼拉罗奇有限公司，慕尼黑路德韦格马克西米利安斯大学，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH