抗原特异性的细胞毒性T淋巴细胞的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种抗原特异性的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的制备方法，包括步骤：A）携带肿瘤抗原基因重组载体的构建；B）DC细胞的分离与培养；C）使用步骤A）所述重组载体转导步骤B）所述的未成熟DC细胞；D）进一步通过细胞因子诱导步骤C）所述的未成熟DC细胞成为成熟DC细胞；E）将步骤D）所述的成熟DC细胞与T淋巴细胞共培养，获得具有抗原特异性的细胞毒性T淋巴细胞。本发明专利技术优选同时转导可用于表达CEA、MAGE-A3、MUC1三种广谱肿瘤抗原的慢病毒混合载体转导未成熟DC细胞，获得经活化和增殖的肿瘤抗原特异性的T细胞，具有广阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
抗原特异性的细胞毒性T淋巴细胞的制备方法
本专利技术属于生物
，尤其是涉及一种新的多抗原广谱CTL的制备方法和应用。
技术介绍
目前，癌症的抗肿瘤免疫治疗策略主要有:肿瘤全细胞疫苗(Whole-tumorcell vaccines)、树突状细胞疫苗(Dendritic cell vaccines, DC疫苗)、重组蛋白疫苗(recombinant proteins vaccines)、多妝疫苗(Peptide vaccines)、DNA 疫苗(DNAvaccines)和病毒疫苗(Viral vaccines)等,有研究显示，以DC疫苗联合过继性T细胞免疫治疗(adoptive T-celI therapy)效果最好。DC是目前发现的功能最强大的专职抗原递呈细胞，成熟DC表面高表达MHC-1 / II分子、共刺激分子(⑶40、⑶80、⑶86等)和黏附分子(LFA-3、ICAM-1等)，不仅能有效的将肿瘤抗原递呈给已活化或记忆性T细胞，还能将抗原递呈给初始T细胞使其增殖，是机体适应性T细胞免疫应答的始动者，在适应性T细胞免疫应答的诱导中具有独特的地位。目前，以DC为基本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗原特异性的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的制备方法，包括步骤：A）携带肿瘤抗原基因重组载体的构建；B）DC细胞的分离与培养；C）使用步骤A）所述重组载体转导步骤B）所述的未成熟DC细胞；D）进一步通过细胞因子诱导步骤C）所述的未成熟DC细胞成为成熟DC细胞；E）将步骤D）所述的成熟DC细胞与T淋巴细胞共培养，获得具有抗原特异性的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。

【技术特征摘要】
1.一种抗原特异性的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的制备方法，包括步骤: A)携带肿瘤抗原基因重组载体的构建； B)DC细胞的分离与培养； C)使用步骤A)所述重组载体转导步骤B)所述的未成熟DC细胞； D)进一步通过细胞因子诱导步骤C)所述的未成熟DC细胞成为成熟DC细胞； E)将步骤D)所述的成熟DC细胞与T淋巴细胞共培养，获得具有抗原特异性的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。2.如权利要求1所述的抗原特异性的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的制备方法，其特征是:所述步骤A)所述的重组载体的载体为病毒载体。3.如权利要求2所述的抗原特异性的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的制备方法，其特征是:所述步骤A)所述的重组载体的载体为慢病毒载体。4.如权利要求1所述的抗原特异性的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的制备方法，其特征是:所述步骤A)所述的肿瘤抗原基因为新构建的癌胚抗原(CEA)基因片段，或黑色素瘤相关抗原A3(MAGE-A3)基因片段，或粘蛋白I抗原(MUCl)基因片段；所述癌胚抗原基因片段的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；所述黑色素瘤相关抗原A3基因片段的核苷酸序列如SEQID NO:2所示；所述粘蛋白I抗原基因片段如SEQ ID NO:3所示。5.如权利要求4所述的抗原特异性的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的制备方法，其特征是:所述携带肿瘤抗原基因重组载体为携带癌胚抗原(CEA)...

【专利技术属性】
技术研发人员：张鸿声，张艳磊，罗晓玲，王宇环，
申请(专利权)人：深圳市合一康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44