本发明专利技术涉及包含下式１所示的氨基酸序列并具有表皮生长因子活性的肽及其用途：Ｃｙｓ－Ｍｅｔ－Ｔｙｒ－Ｉｌｅ－Ｇｌｕ－连接体－Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ（１）。本发明专利技术的ＥＧＦ模拟肽具有与天然产生的人ＥＧＦ相同的功能或活性并且能够促进细胞中产生自分泌ＥＧＦ。此外，本发明专利技术的肽比天然产生的ＥＧＦ具有更高的稳定性和皮肤渗透能力。因此，含有该肽的组合物对需要ＥＧＦ活性的疾病或状态显示出极好的治疗和预防功效，并且能够有利地应用于药物组合物、准药和化妆品中。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及具有表皮生长因子活性的肽及其用途。
技术介绍
斯坦利*科恩博士首次从小鼠下颌下腺中分离出由53个氨基酸残基组成 的人表皮生长因子并且阐明其在早熟新生小鼠中加速眼睑开放(Cohen， S. (1962) /.肠丄C/ e瓜237， 1555-1562)。 1986年，斯坦利，科恩博士凭借 EGF研究被授予诺贝尔医学奖(Novel medical prize) 。 EGF，含有3个二硫 键的多肽(Savage， C丄，Jr. et al. ， (1973) / 肠丄O e瓜248， 7669-7672; Savage, C. R., Jr. et al. ， (1972) / C力e瓜247， 7612-7621)，经由EGF受体触发信号转导级联从而诱导哺乳动物细胞(特别是上皮和皮肤细 胞)的生长和分裂，从而促进上皮细胞的生长(Sporn， M. B. et al. ， (1985) 淑,rZo油/^313， 745-747; Sporn M. B. et al. ， (1980) W ~丄/躯 303， 878-880)。此外，已报道，EGF在伤口愈合的分子调控中起关键作用 (Buckley, A. et al. ， (1985)尸roc. ^cad Sc丄USA. 82， 7340—7344)。EGF在如唾液、尿液、乳液、泪液和血液的各种体液中以高水平存在。 在受伤时，通过血流向受伤部位提供的EGF有助于伤口愈合而不留伤疤。此 外，EGF与FSH(促卵泡激素)一起参与子宫中的受精卵的成熟并且EGF是使由 于没有血管而容易退化的角膜再生的原因。而且，EFG通过以下各种作用在 皮肤再生中起非常重要的作用促进上皮和内皮细胞的增殖；促进成纤维细 胞的增殖以在真皮中合成胶原；在受伤部位促进血管发生；诱导参与再生的 因子的分泌；以及促进纤连蛋白的生物合成以形成皮肤组织的网络化。人体应答创伤的发生并且向受伤组织供给EGF来治愈。然而，在体内的 EFG供给不足的情况下，应提供外源EGF以回到正常和健康状态。在这点上， EGF被认为具有大量应用。例如，EGF可用于糖尿病脚溃疡、灼伤、创伤、角 膜损伤、剖腹手术、整容剥离(cosmetic peeling)和皮肤老化。除上皮细胞 增殖能力以外，已提出，人EGF(hEGF)通过阻止胃酸的分泌而有效用于治疗 胃溃疡(Gregory， H. ， (1985) / 6WUci. Su卯l. 3， 11-17)。5Srarkey博士于1975年纯化了尿液中的人EGF并描述了它的特性；其后， 已经进行了更多的努力以更高的产率和量来制备人EGF(Starkey， R. H. et al.， (1975) 5"cj.e/7ce 189， 800; Cohen. S. et al. ， (1975)尸roc. 7Vat丄」cad 5"ci. USA 72， 1317)。几个实验室已经报道了成功克隆了人EGF基因(Smith, J. et al.， (1982) M/c2eic Tfes. 10， 4467—4482; Urdea， M. S. etal.， (1983) /^roc. Jcad Sci. USA 80， 7461—7465; 0ka， T， et al.，(1985) 7°rac. 7Vat丄Jcad 5"c丄USA 82， 7212-7216)。然而，通过基因重 组技术制备的人EGF还没有用于工业领域的大量和高活性的生产。大多数血液和组织中存在的多肽生长因子具有短至几分钟的体内半寿 期。很可能，EGF显示出差的结构稳定性。另外，因为EGF是生物学不稳定 的和生理化学异质的，所以它可能显示降低的治疗功效。其皮肤渗透性极差。因此，依旧需要开发出具有改善的稳定性和皮肤渗透能力并且具有EGF 固有活性的新物质。贯穿本申请，各种专利和出版物作为参考并且在括号内给出引用出处。 为了更加全面地描述本专利技术以及本专利技术所属
的状况，在此通过引用 方式将这些专利和出版物的公开内容全部并入本申请。
技术实现思路
为了开发出与天然产生的人表皮生长因子具有相同作用且与天然产生 的EGF相比具有更加提高的稳定性和皮肤渗透性的肽，本专利技术人已经制备和 筛选了大量的人EGF衍生的肽。结果，我们最终开发出了具有上述优异特性 的肽。因此，本专利技术的一个目的是提供一种具有表皮生长因子(EGF)活性的肽。 本专利技术的另一个目的是提供一种预防或治疗表皮生长因子有效的紊乱 或状态的组合物。连同所附权利要求书和附图，从以下详述的说明中，本专利技术的其他目的 和优点将变得明显。在本专利技术的一个方面中，提供一种具有表皮生长因子(EGF)活性的肽， 该肽包含下式1所示的氨基酸序列Cys-Met-Tyr-lie-Glu-连接体-Arg-Gly-Asp(1)。在本专利技术的另一个方面中，提供一种预防或治疗表皮生长因子有效的紊乱或状态的组合物，该组合物包含本专利技术的具有表皮生长因子(EGF)活性的肽 作为活性成份。为了开发出与天然产生的人表皮生长因子具有相同作用且与天然产生 的EGF相比具有更加提高的稳定性和皮肤渗透性的肽，本专利技术人已经制备和 筛选了大量的人EGF衍生的肽。结果，我们最终发现了具有上述优异特性的 肽。本专利技术人的开发策略如下首先，将本专利技术的肽设计包含两个区域，EGF 衍生的序列(即EGF活性区域)和细胞附着区域。EGF活性区域选自天然产生 的EGF氨基酸序列中。为了提高本专利技术的肽的EGF活性，细胞附着区域选自 细胞外基质蛋白之一的纤连蛋白。最终选择的EGF活性区域包含氨基酸序列"Cys-Met-Tyr-Ile-Glu"而 最终选择的细胞附着区域包含氨基酸序列"Arg-Gly-Asp"。此外，本专利技术人 已发现，与直接连接相比，优选经由连接体间接连接两个区域。根据开发策略，制备出了下式1所示的EGF模拟肽。使EGF活性区域和细胞附着区域互相连接的连接体包括本领域技术人员 可利用的任何连接体。优选地，所述连接体包含多个氨基酸。在Huston,等 人，i/7 ^7zjzz o2^7， 203:46-88 (1991)和Whitlow,等人，/^rotej'" ^W， 6:989(1993)中査到了肽连接体的详细资料，其教导的内容在此通过引 用方式并入。本专利技术中适合的连接体包含具有不带电侧链的氨基酸，优选为 Gly或者Gly或Ser。优选地，所述连接体的长度为2 18个氨基酸残基。更 优选地，所述连接体包含2 10个Gly残基。由氨基酸残基(特别是Gly残基) 组成的连接体有助于本专利技术的肽的稳定性。即使本专利技术的肽本身比天然产生的EGF具有更高的稳定性，对其的修饰 能使其具有高得多的稳定性。优选地，本专利技术的肽在其N-末端或C-末端具有 选自由乙酰基、荷基甲氧羰基、甲酰基、棕榈酰基、肉豆蔻基、硬脂酰基或 聚乙二醇(PEG)组成的组中的保护基。保护基也是本专利技术的肽具有稳定性的原 因。或者，式1所示的肽的C-末端被修饰具有氨基，这样提高了肽的稳定性。 本文所用的术语"稳定性"指体内稳定性和贮藏稳定性(例如，在室温 下的贮藏稳定性)。上述的保护基保护肽免受体内蛋白酶的攻击。7根据优选的实施方式，位于肽的C-末端本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种具有表皮生长因子（ＥＧＦ）活性的肽，该肽包含下式１所示的氨基酸序列： Ｃｙｓ－Ｍｅｔ－Ｔｙｒ－Ｉｌｅ－Ｇｌｕ－连接体－Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ （１）。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：郑镕池，金荣德，金银美，崔俊英，宋尚洙，
申请(专利权)人：凯尔杰有限公司，
类型：发明
国别省市：KR[韩国]
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