本发明专利技术提供了包含纤丝病毒糖蛋白片段和免疫球蛋白多肽片段的融合蛋白。所述融合蛋白用于免疫原性组合物以在人和非人动物中保护抵御纤丝病毒例如埃博拉病毒的感染。所述融合蛋白也用于诊断试验以检测纤丝病毒感染。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】纤丝病毒融合蛋白及其应用
本专利技术涉及纤丝病毒(Filovirus)糖蛋白融合蛋白在预防和诊断纤丝病毒感染中的应用。技术背景埃博拉病毒(EBOV)和马尔堡病毒(MARV)是纤丝病毒科(Filoviridae)的成员，纤丝病毒科是分类为“A类”生物战剂的病毒家族，造成人和非人灵长动物中严重的出血热，发病率和死亡率高达 90%(Sanchez 等，Filoviridae:Marburg and Ebola viruses (纤丝病毒科:马尔堡和埃博拉病毒)，第1409-1448页，收录于D.M.Knipe, P.M.Howley, D.E.Griffin, M.A.Martin, R.A.Lamb, B.Roizman 和 S.E.Straus (编),Fields Virology(《费氏病毒学》)，第5版，宾夕法尼亚州费城的利平科特威廉斯和威尔金斯出版公司(Lippincott Williams&Wilkins) 2007)。4 - 10天的短培养期后，纤丝病毒感染个体突然发生与很多其他病毒感染相同的症状，包含发热、发冷、不适和肌痛。MARV在抗原性上稳定并仅存在一个种类，而EBOV更加可变并有五个种类。最近在2007年末在乌干达爆发了本迪布焦(Bundibugyo)EBOV(Towner 等，PLoS Pathog2008 年 11 月；4 (11): el000212),相较扎伊尔(Zaire)、苏丹(Sudan)或莱斯顿(Reston)的EBOV种，其与象牙海岸(Ivory Coast)种更加接近。扎伊尔EBOV (ZEBOV)通常与最高致死率相关联。非洲爆发和近期猪中EBOV爆发数目的增加(Normile Science2009年I月23日;323 (5913):451)，引起了牲畜可以把致死疾病传递给人的关注，这突出了开发疫苗和包含爆发在内的快速诊断测试的紧迫性。基于纤丝病毒糖蛋白(GP)的疫苗处于临床前和临床评价中，并且当前没有治疗剂来治疗纤丝病毒感染。由于对安全和有效的纤丝病毒疫苗的许可能需要数年，诊断和隔离感染的个体是当前限制爆发的主要方法。当前开发了数个纤丝病毒疫苗候选，包含表达EBOV GP的重组腺病毒(Sullivan 等，PLoS Med2006 年 6 月；3 (6): el77;Sullivan 等，Nature2OO3 年 8 月 7H ; 424 (6949):681-4;和 Sullivan 等，Nature2000 年 11 月 30 日；408 (6812): 605-9)、重组副流感病毒(Bukreyev等，J Virol2007年6月；81 (12):6379-88)、重组委内瑞拉马脑炎病毒(Pushko 等，Vaccine2000 年 8 月 15 日；19 (I): 142-53)、重组复制型(Feldmann等，PLoS Pathog2007 年 I 月;3 ⑴:e2 和 Jones 等，Nat Med2005 年 7 月;11 (7): 786-90)和重组复制缺陷型(Halfmann等，J Virol2009年4月;83(8):3810-5)水泡性口炎病毒、和载有纤丝病毒GP的病毒样颗粒(Warfield等，Proc Natl Acad Sci U S A2003年12月 23 日；100 (26):15889-94 和 Warfield 等，J Infect Dis2007 年 11 月 15 日；196 增刊2:S430-7)。使用杆状病毒表达纤丝病毒GP的起始研究显示部分保护，可以对昆虫细胞中糖基化特性和GP的加工起作用(Mellquist-Riemenschneider等，Virus Res2003年4月；92 (2):187-93)。尽管在这方面有进步，还需要开发针对纤丝病毒感染的新疫苗。本专利技术解决了这些和其它需求。
技术实现思路
本专利技术提供了包含纤丝病毒糖蛋白片段和免疫球蛋白多肽片段的融合蛋白。在典型的实施方式中，所述纤丝病毒糖蛋白片段是例如来自埃博拉病毒(特别是扎伊尔埃博拉病毒Mayinga株)的胞外结构域。所述免疫球蛋白多肽片段能是IgGl的免疫球蛋白重链恒定区多肽(即Fe片段)。在一些实施方式中，所述融合蛋白还包含纤丝病毒糖蛋白片段和免疫球蛋白多肽片段之间的接头。本专利技术的示例性融合蛋白是由没有接头的SEQ ID NO:1和有FLAG标签接头的SEQ ID NO: 3所示的核酸序列编码。本专利技术还提供包含本专利技术融合蛋白的免疫原性组合物。所述免疫原性组合物还可以包含佐剂。也提供了包含本专利技术融合蛋白编码核酸序列的核酸载体。示例性核酸序列示于SEQ ID NO:1。本专利技术还提供了在患者中诱导对纤丝病毒感染的保护免疫反应的方法。所述方法包含给予患者免疫有效量的本专利技术免疫原性组合物。所述免疫原性组合物能包含本专利技术融合蛋白或其编码核酸分子。所述组合物能以任意多种途径给予。在一些实施方式中，所述组合物肌肉内给予。本专利技术也提供了检测患者中纤丝病毒免疫反应的方法。所述方法包含使患者生物样品接触本专利技术融合蛋白，并且检测体液或细胞免疫反应。能使用ELISA、化学发光试验或荧光试验检测抗体。细胞免疫反应能通过检测IFN-Y、TNF-a、或其他细胞因子和细胞活化及增殖试验来检测。本专利技术的另一方面是检测患者生物样品中抗纤丝病毒抗体(即中和抗体)的方法，所述患者用纤丝病毒糖蛋白Fe融合蛋白或其他免疫原免疫。这种方法包含使生物样品接触表达纤丝病毒GP的重组水疱性ロ炎病毒(VSV)(如扎伊尔埃博拉病毒Mayinga株)，并且评价易受纤丝病毒感染的细胞中残留的感染性。所述用于此试验的细胞能是Vero E6细胞。或者所述重组VSV颗粒能固定在固体支持物上，并且抗纤丝病毒抗体能使用标准方法例如ELISA、化学发光试验或荧光试验来检测。定义术语“佐剂”和〃免疫刺激剂〃在本文中互換使用，并且定义为ー种或多种引起免疫系统刺激的物质。本文中，佐剂用于增强对本专利技术融合蛋白的免疫反应。本文使用的术语“氨基末端”(或“ N-末端”)和“羧基末端”(或“ C-末端”)表示多肽特别是本专利技术融合蛋白内的位置。本文允许时，涉及多肽或蛋白的特定序列或片段使用这些术语以表示附近或相对位点。例如，多肽中相对參照序列位于羧基末端的某些序列位于參照序列的羧基末端附近，但并不必需在完整多肽的羧基末端。当用于序列的氨基酸残基位点吋，术语“对应”指当序列最优比对时，多个序列的对应位点。术语“表达载体”指包含感兴趣多肽编码片段(如本专利技术融合蛋白)的线形或环形DNA分子，所述感兴趣多肽编码片段可选连接到提供转录的其他片段。这种其他片段包含启动子和終止子序列，并且也可以包含一个或多个复制起点、ー个或多个选择标记、增强子、聚腺苷酸化信号等。表达载体通常来自细菌或病毒DNA，并且可以包含两者的元件。两个或更多个核酸或多肽序列(如本专利技术融合蛋白和其编码多核苷酸)背景下术语相同的或相同性指就最大对应性进行比较和比对时，相同或有特定百分数的相同氨基酸残基或核苷酸的两个或更多个序列或亚序列，如使用下列序列比较算法之一或通过视觉检查测量。本专利技术的两个核酸或多肽背景下的短语基本相同指就最大对应性进行比较和比本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种包含纤丝病毒糖蛋白片段和免疫球蛋白多肽片段的融合蛋白。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.10.28 US 61/407,8421.ー种包含纤丝病毒糖蛋白片段和免疫球蛋白多肽片段的融合蛋白。2.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述纤丝病毒糖蛋白片段是胞外结构域。3.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述纤丝病毒糖蛋白片段来自埃博拉病4。4.如权利要求3所述的融合蛋白，其特征在于，所述埃博拉病毒是扎伊尔埃博拉病毒Mayinga 株。5.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述免疫球蛋白多肽片段是免疫球蛋白重链恒定区多肽。6.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述免疫球蛋白是IgGl。7.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白还包含纤丝病毒糖蛋白片段和免疫球蛋白多肽片段之间的接头。8.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白有如SEQID N0:2所示的序列。9.ー种包含如权利要求1所述的融合蛋白的免疫原性组合物。10.如权利要求9所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述组合物还包含佐剂。11.ー种核酸载体，所述载体包括含有纤丝病毒糖蛋白片段和免疫球蛋白多肽片段的融合蛋白的编码核酸序列。12.如权利要求11所述的核酸载体，其特征在于，所述纤丝病毒糖蛋白片段是胞外结构域。13.如权利要求11所述的核酸载体，其特征在于，所述纤丝病毒糖蛋白片段来自埃博拉病毒。14.如权利要求13所述的核酸载体，其特征在于，所述埃博拉病毒是扎伊尔埃博拉病毒 Mayinga 株。15.如权利要求11所述的核酸载体，其特征在于，所述免疫球蛋白多肽片段是免疫球蛋白重链恒定区多肽。16.如权利要求11所述的核酸载体，其特征在于，所述免疫球蛋白是IgGl。17.如权利要求11所述的核酸载体，其特征在于，所述核酸载体还包含纤丝病毒糖蛋白片段和免疫球蛋白多肽片段之间接头的编码核酸序列。18.如权利要求11所述的核酸载体，其特征在于，所述融合蛋白的编码核酸序列有SEQID NO:1所示的序列。19.一种诱导患者中对纤丝病毒感染的保护...
【专利技术属性】
技术研发人员：G·卡普兰，K·孔多鲁，J·杰奎斯，S·巴瓦利，S·布拉德福特，
申请(专利权)人：健康和人类服务部秘书长代表的美利坚合众国政府，美国陆军传染病医学研究所，
类型：
国别省市：
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