灵芝内酯D及其药物组合物与其在制药和食品中的应用制造技术

提供了灵芝内酯D(1)及其药物组合物与其在制药和食品中的应用和其制备方法。从赤芝中分离得到一个新化合物灵芝内酯D，研究表明其可抑制TGF‑β1介导的肾小管上皮细胞α‑SMA，纤连蛋白和I型胶原表达，提示灵芝内酯D可明显抑制肾脏组织纤维化；也发现其可选择性抑制TGF‑β1诱导的肾小管上皮细胞Smad3磷酸化而对Smad2，PI3K，ERK，p‑38的磷酸化及Smad4，Smad7的蛋白表达无明显影响，鉴于Smad3磷酸化是介导多种器官纤维化的共同信号通路，提示其对于包括肾脏纤维化在内的器官纤维化的治疗作用。

Glossy ganoderma lactone D and its medicinal composition and application thereof in pharmacy and food

Glossy ganoderma lactone D (1) and its medicinal composition and its application in pharmaceutical and food and preparation method thereof. A new compound Ganoderma lactone D isolated from Ganoderma lucidum, research shows that it can inhibit TGF beta 1 mediated renal tubular epithelial cells alpha SMA expression of fibronectin and type I collagen, suggesting that Ganoderma lactone D can inhibit renal fibrosis; also found that the selective inhibition of TGF beta 1 induced the Smad3 of renal tubular epithelial cells and phosphorylation of Smad2, PI3K, ERK, P 38 and Smad4 phosphorylation, Smad7 protein expression had no significant effect, whereas Smad3 phosphorylation is a common signaling pathway mediated multiple organ fibrosis, suggesting its therapeutic effect on kidney fibrosis, including organ fibrosis.

【技术实现步骤摘要】

：本专利技术属于药物技术和食品领域，具体地涉及灵芝内酯D及其药物组合物，以及其在制备治疗肾脏纤维化或慢性肾病或器官纤维化的药物或食品中的应用。
技术介绍
：久病(慢性病)易导致器官纤维化，肾脏纤维化与肺、肝纤维化类似，是导致器官衰竭的必经过程。遗憾的是由于自身衰老，药物误用，环境污染等多种因素，器官纤维化明显增多。以肾病为例，我国慢性肾病的发病率已超过10％，慢性肾病经肾脏纤维化进展至终末期肾衰竭，目前我国的尿毒症患者也明显增多，其医疗开支惊人。防止纤维化可延缓器官衰竭，已有研究表明TGF‐β1介导的Smad3磷酸化是多种器官纤维化的主要病理机制之一，因此抑制Smad3磷酸化是抗纤维化和防止器官衰竭的关键，但相关药物缺乏。灵芝作为著名中药在我国已有2000多年的应用历史，在中国传统文化中其被称为仙草，中医也将其归为安神药，世界称其为可治疗百病的药材，足见其药理作用广泛。本专利技术人在中医“久病必虚”，“久病及肾”，“虚则补之”的理论指导下，近些年提出灵芝之补不仅仅体现在其可调节免疫，而且还可能通过抗氧化应激和炎症实现微观的“以通为补”作用，这可能是灵芝发挥作用的另一重要途径。为此，本专利技术人在国家自然科学基金(U1202222,81525026,21472199)等多个项目的资助下，多年来系统地开展了灵芝属中药的研究。对赤芝(Ganoderma lucidum)的子实体研究中，发现了灵芝内酯D及其抗慢性肾病或抗器官纤维化作用，而现有技术中未见有本专利技术涉及的化合物及其功能的相关报道。
技术实现思路
：本专利技术的目的在于提供具有抗慢性肾病或抗肾脏纤维化或抗器官纤维化的化合物灵芝内酯D(又名赤芝内酯D，灵芝莱克酮D；Lingzhilactone D)及其在制备抗慢性肾病和/或抗肾脏纤维化和/或抗器官纤维化的药物中的应用，以及以该化合物为有效成分的药物组合物。本专利技术的另一目的也在于提供灵芝内酯的天然制备方法。本专利技术的上述目的是由下述的技术方案得以实现的：下述结构式所示的灵芝内酯D(1)，制备灵芝内酯D(1)的方法，取赤芝，粉碎，用95％乙醇回流提取，合并提取液并减压回收溶剂得粗提取物，将粗提取物混悬于水中，然后用等体积乙酸乙酯萃取三次，合并萃取液，减压浓缩得乙酸乙酯萃取物，该萃取物经硅胶200‐300目柱层析，99:1，98:2，97:3，96:4，95:5，94:6，93:7，92:8，90:10，85:15，80:20，50:50的氯仿‐甲醇系统梯度洗脱，每种溶剂梯度为1.5倍柱体积，按照每份500mL收集得7个合并组份，其中组分3经MCI gel CHP 20P柱层析，甲醇‐水45％‐100％，梯度变化程序为5％，洗脱得组分3.1‐3.11，其中组分3.2经Sephadex LH‐20甲醇洗脱，TLC跟踪，合并相同斑点得到组分3.2.1‐3.2.4，组分3.2.4经RP‐18柱层析，甲醇‐水,40％‐70％和半制备HPLC，甲醇‐水，40％纯化得灵芝内酯D(1)，该化合物是一个消旋体，手性HPLC 250mm×4.6mm,i.d.,5μm,Daicel Chiralpak IC拆分，n‐hexane/ethanol,70:30得(+)‐灵芝内酯D和(-)‐灵芝内酯D。治疗肾脏纤维化或慢性肾病或器官纤维化的药物组合物，含有治疗有效 量的灵芝内酯D(1)和药学上可接受的载体。所述的灵芝内酯D(1)在制备治疗肾脏纤维化或慢性肾病或器官纤维化药物中的应用。所述的灵芝内酯D(1)在制备治疗肾脏纤维化或慢性肾病或器官纤维化的保健食品中的应用。本专利技术化合物可以单独直接应用或组合应用，也可以与其它药物包括植物提取物组成复方的形式使用，可以使用不同的药用辅料，制成多种固体制剂和液体制剂。将本专利技术的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本专利技术的药物可经不同给药途径给药。使用量可根据给药途径、患者的年龄、体重、所治疗疾病的类型和严重程度等变化进行一次或多次使用。附图说明：图1表示化合物(+)‐灵芝内酯D抑制TGF‐β1诱导的肾小管上皮细胞纤维化作用。A：(+)‐灵芝内酯D的mRNA水平抗肾脏纤维化作用，分组从左至右分别为：对照组(不加TGF‐β1和受试药物)，(+)‐1(10μM)组(不加TGF‐β1，只加(+)‐1的药物组，TGF‐β1+(+)‐1(0μM)组，TGF‐β1+(+)‐1(1μM)组，TGF‐β1+(+)‐1(3μM)组，TGF‐β1+(+)‐1(10μM)组；B：(+)灵芝内酯D的蛋白水平抗肾脏纤维化作用，分组从左至右分别为：对照组(不加TGF‐β1和受试药物)，(+)‐1(10μM)组(不加TGF‐β1，只加(+)‐1的药物组，TGF‐β1+(+)‐1(0μM)组，TGF‐β1+(+)‐1(1μM)组，TGF‐β1+(+)‐1(3μM)组，TGF‐β1+(+)‐1(10μM)组。图2化合物(+)‐灵芝内酯D选择性抑制TGF‐β1诱导的肾小管上皮细胞Smad3磷酸化作用。图2a：灵芝呋喃A抑制Smad3而非Smad2的磷酸化；图2b：A：灵芝呋喃A不抑制Smad4，Smad7的表达；B：灵芝呋喃A对ERK，PI3K，p38蛋白的磷酸化水平无抑制作用。具体实施方式：下面结合附图，用本专利技术的实施例来进一步说明本专利技术的实质性内容， 但并不以此来限定本专利技术。根据本专利技术的实质对本专利技术进行的简单改进都属于本专利技术的范围。实施例1：化合物1的分离纯化：取赤芝(80kg)，粉碎，用95％乙醇回流提取(2x 360L x 2h)，合并提取液并减压回收溶剂得粗提取物，将粗提取物混悬于水中，然后用等体积乙酸乙酯萃取三次，合并萃取液，减压浓缩得乙酸乙酯萃取物，该萃取物经硅胶(200‐300目)柱层析，氯仿‐甲醇系统梯度(99:1，98:2，97:3，96:4，95:5，94:6，93:7，92:8，90:10，85:15，80:20，50:50)洗脱，每种溶剂梯度为1.5倍柱体积，按照每份500mL收集得7个合并组份。其中组分3经MCI gel CHP 20P柱层析，甲醇‐水(45％‐100％，梯度变化程序为5％)洗脱得组分3.1‐3.11。其中组分3.2(8.4g)经Sephadex LH‐20(甲醇)洗脱，TLC跟踪，合并相同斑点得到组分3.2.1‐3.2.4。组分3.2.4(350mg)经RP‐18柱层析(甲醇‐水,40％‐70％)和半制备HPLC(甲醇‐水，40％)纯化得灵芝内酯D(1)(15mg)。该化合物是一个消旋体，手性HPLC(250mm×4.6mm,i.d.,5μm,Daicel Chiralpak IC)拆分(n‐hexane/ethanol,70:30)得(+)‐灵芝内酯D(5.7mg)和(-)‐灵芝内酯D(5.9mg)。化合物1的结构确证：化合物1的结构式如下所示：化合物1的结构鉴定数据：Table 1.1H(600 MHz)and 13C(150 MHz)NMR data of 1 in acetone‐d6(δin ppm,J in Hz).灵芝内酯D(Lingzhilactone D)(1).Yellow solid；UV(MeOH)λmax(logε)370(3.59),260(3.87),2本文档来自技高网...

【技术保护点】
下述结构式所示的灵芝内酯D(1)，

【技术特征摘要】
1.下述结构式所示的灵芝内酯D(1)，2.制备权利要求1所述的灵芝内酯D(1)的方法，取赤芝，粉碎，用95％乙醇回流提取，合并提取液并减压回收溶剂得粗提取物，将粗提取物混悬于水中，然后用等体积乙酸乙酯萃取三次，合并萃取液，减压浓缩得乙酸乙酯萃取物，该萃取物经硅胶200‐300目柱层析，99:1，98:2，97:3，96:4，95:5，94:6，93:7，92:8，90:10，85:15，80:20，50:50的氯仿‐甲醇系统梯度洗脱，每种溶剂梯度为1.5倍柱体积，按照每份500mL收集得7个合并组份，其中组分3经MCI gel CHP 20P柱层析，甲醇‐水45％‐100％，梯度变化程序为5％，洗脱得组分3.1‐3.11，其中组分3.2经Sephadex LH‐20甲醇洗脱，TLC...

【专利技术属性】
技术研发人员：程永现，侯凡凡，晏永明，艾军，
申请(专利权)人：中国科学院昆明植物研究所，南方医科大学南方医院，
类型：发明
国别省市：云南;53