与肿瘤转移的新生血管有关的纤连蛋白的ＥＤ－Ａ抗原制造技术

本发明专利技术涉及一种结合成员，其结合纤连蛋白的额外结构域－Ａ（ＥＤ－Ａ）同种型，用于治疗肿瘤转移瘤。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及转移瘤的检测和治疗，即在不同于原发性肿瘤的部 位的部位产生的继发性肿瘤的一企测和治疗。本专利技术涉及一种结合于纤连蛋白的ED-A同种型(isoform)的结合成员的应用，尤其是结 合于纤连蛋白的结构域ED-A的结合成员。
技术介绍
大多凄t与癌症有关的死亡涉及疾病的转移扩散(Hanahan and Weinberg 2000)并且有活力的新生血管是侵袭性肺瘤转移瘤的特 征。肺瘤分为良性肺瘤或恶性肺瘤。恶性肿瘤能够从原发性部位 (原发性肺瘤)扩散到身体的其它部位，而良性肺瘤则不能扩散。 恶性肺瘤可以通过侵袭和转移自它们的原发性部位扩散。由于转移 而形成的肺瘤纟皮称作，例如，转移瘤、继发性肿瘤、转移性病变或 转移性病灶。血管生成描述了新血管从现有血管的生长。肺瘤可以通过分泌 各种生长因子(例如血管内皮生长因子)而诱导血管生成。肿瘤血 管生成4吏得肿瘤可以生长超过几毫米的直径并且还是胂瘤转移的 先决条件。由于血管生成而形成的新血管会形成肺瘤或肿瘤转移瘤 的*斤生血管。纤连蛋白(FN)是一种糖蛋白并且在各种正常组织和体液中广 泛表达。它是细胞外基质(ECM)的一种成分，并在许多生物学过 程中发挥作用，其中上述生物过程包括细胞粘附、细胞迁移、止血、 血才全形成、伤口愈合、组织分化以及致癌性转化。不同的FN同种型是通过初级转录物FN前mRNA的三个区域 (ED-A、 ED-B、 niCS)的可变剪接而产生的，是一种通过细胞因 子和细月包夕卜pH ^f直来调节的过禾呈(Balza 1988; Carnemolla 1989; Borsi 1990; Borsi 1995 )。纤连蛋白包含两种可以经受可变剪4妾的III型 J求^)犬额外结构i或ED-A和ED國B( ffrench画Constant 1995, Hynes 1990, Kaspar et al. 2006 )。小鼠纤连蛋白和人纤连蛋白的ED-A的96.7% 是相同的(在两个90个氨基酸的序列之间仅3个氨基酸不同，参 见图5)。已才艮道了在m腦A水平(参见例如，Jacobs et al. 2002, Matsumoto et al. 1999, Oyama et al. 1989, Tavian et al. 1994 )、在分 离蛋白的水平(Borsi et al. 1987 )以及在免疫组织化学水平(Borsi et al, 1998, Heikmheimo et al. 1991, Koukoulis et al. 1993, Koukoulis et al . 1995， Lohi et al . 1995， Scarpino et al. 1999 ),纟f连蛋白的ED画A 在月中瘤细月包和实体月中瘤中的表达。Borsi et al.， 1998, Exp Cell Res, 240, 244-251也已才艮道了 ED-A存在于原发性肿瘤的新血管中。然 而，先前并没有指出ED-A与肿瘤转移的新血管有关。我们在本文中表明，纤连蛋白的ED-A在肿瘤转移瘤的新生血 管中选择性地表达。因为肿瘤血管容易受到静脉给予的治疗剂的作 用(Neri和Bicknell 2005, Rybak et al. 2006， Thorpe 2004, Trachsel 和Neri 2006 ),所以例如结合A-FN和/或纤连蛋白的ED-A的抗体 分子的结合分子代表新型制剂，其可以用于制备用来治疗一种和/ 或多种肿瘤转移瘤的药物。肺瘤新血管(肿瘤血管^fe向)的疗法是 一种用于治疗肺瘤转移瘤的有前途的方法。肿瘤血管把向的目的是破坏肿瘤本身内的血管，减少血流量以使肺瘤丧失氧和营养物，从 而引起肿瘤细月包死亡。
技术实现思路
本专利技术提供了抗ED-A抗体，其选择性地识别肺瘤转移瘤的新 形成血管。本专利技术在一个方面涉及结合纤连蛋白的额外结构域-A ( ED-A ) 同种型(A-FN)的结合成员(例如抗体分子)在用于制备用来治疗 一种和/或多种肿瘤转移瘤的药剂中的应用。在另一个方面，本专利技术 涉及结合纤连蛋白的ED-A的结合成员(例如抗体分子)在用于制 备用来治疗 一种和/或多种胂瘤转移瘤的药剂中的应用。在又一个方面，本专利技术涉及结合纤连蛋白的ED-A同种型的结 合成员(例如抗体分子)用于将结合(共轭或轭合)于该结合成员 的分子递送到肿瘤转移瘤的新生血管的应用。在另一个方面，本发 明涉及结合纤连蛋白的ED-A的结合成员(例如抗体分子)用于将 结合(共辄或轭合)于该结合成员的分子递送到肿瘤转移瘤的新生 血管的应用。在其〗也的方面，该结合成员可以用于制备用来递送上 述分子的药剂。在另一个方面，本专利技术涉及结合纤连蛋白的ED-A同种型的结 合成员(例如抗体分子)用于制备用于诊断肺瘤转移瘤的诊断产品 的应用。在另一个方面，本专利技术涉及结合纤连蛋白的ED-A的结合 成员(例如抗体分子)用于制备用于诊断肿瘤转移瘤的诊断产品的 应用。本专利技术在一个方面还涉及在人或动物体内4企测或诊断肿瘤转 移瘤的方法，包4舌以下步-骤(a) 对人或动物乡合予结合成员，例如结合纤连蛋白的ED-A同 种型的抗体分子，以及(b) 确定在人或动物体内在远离由原发性肿瘤目前或以前占据 部位的部位存在或不存在该结合成员；其中，在人或动物体内结合成员定位于远离目前或以前由原发 性肺瘤占据部位的部位表明了肺瘤转移瘤的存在。本专利技术在另一个方面涉及在人或动物体内才佥测或it断肿瘤转 移瘤的方法，包>^以下步艰《(a) 对人或动物《合予结合成员，例如结合纤连蛋白的ED-A的 抗体分子，以及(b) 确定在人或动物体内在远离由原发性肿瘤目前或以前占据 部^立的部^立存在或不存在该结合成员；其中，在人或动物中结合成员定位于远离目前或以前由原发性 肿瘤占据部位的部位表明了肿瘤转移瘤的存在。本专利技术在 一 个方面还涉及治疗个体体内的肿瘤转移瘤的方法， 包括症合予该个体治疗有效量的包含结合纤连蛋白的ED-A同种型的 结合成员(例如抗体分子)的药剂。在另一个方面，本专利技术涉及治 疗个体体内的肺瘤转移瘤的方法，包括给予该个体治疗有效量的包 含结合纤连蛋白的ED-A的结合成员(例如抗体分子)的药剂。在另 一个方面，本专利技术涉及在人或动物体内将分子递送到肿瘤 转移瘤的新生血管的方法，包括向人或动物给予结合纤连蛋白的 ED-A同种型的结合成员，例如抗体分子，其中该结合成员结合于 上述分子。在又一个方面，本专利技术涉及在人或动物中将分子递送到 肺瘤4争移瘤的新生血管的方法，包4舌向人或动物主会予结合纤连蛋白的ED-A的结合成员，例如抗体分子，其中该结合成员结合于上述 分子。本专利技术的结合成员可以是结合纤连蛋白的ED-A同种型和/或 纤连蛋白的ED画A的#元体，包含4元体H1、 B2、 C5、 D5、 E5、 C8、 F8、 Fl、 B7、 E8或G9、或它们的变体的一个或多个互补决定区 (CDR)。优选地，本专利技术的结合成员是结合纤连蛋白的ED-A同 种型和/或纤连蛋白的ED-A的抗体，包含抗体B2、 C5、 D5、 C8、 F8、 B7或G9、或它们的变体的一个或多个互^卜决定区(CDR)。 最优选地，本专利技术的结合成员是结合纤连蛋白的ED-A同种型和/ 或纤本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种结合纤连蛋白的额外结构域－Ａ（ＥＤ－Ａ）同种型的结合成员用于制备治疗肿瘤转移瘤的药剂的应用。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】US 2007-4-2 60/909,580;US 2007-7-9 60/948,5641.一种结合纤连蛋白的额外结构域-A(ED-A)同种型的结合成员用于制备治疗肿瘤转移瘤的药剂的应用。2. 根据权利要求1所述的应用，其中，所述结合成员结合纤连蛋白的ED-A。3. 根据权利要求1或2所述的应用，其中，所述结合成员结合于可才企测才示^己。4. 根据权利要求1或2所述的应用，其中，所述结合成员结合于具有杀生物活性或细胞毒活性的分子。5. 根据权利要求1或2所述的应用，其中，所述结合成员结合于放射性同位素。6. —种结合纤连蛋白的ED-A同种型的结合成员用来制备药剂瘤转移瘤的新生血管。7. 根据权利要求6所述的应用，其中，所述结合成员结合纤连蛋白的ED-A。8. 根据权利要求6或7所述的应用，其中，所述分子是可检测标记。9. 根据权利要求6或7所述的应用，其中，所述分子具有杀生物活性或细胞毒活性。10. 冲艮据权利要求6或7所述的应用，其中，所述结合的分子是放 射性同位素。11. 根据权利要求1至10中任一项所述的应用，其中，所述结合 成员包含VH结构域，其中所述VH结构域包含骨架和一组互 ^卜决定区HCDR1、 HCDR2以及HCDR3，其中HCDR1具有氨基酸序列SEQIDNO:3、 23、 33、 43、 53、 63、 73、 83、 93、 103或113,HCDR2具有氨基酉吏序列SEQ ID NO: 4,以及HCDR3具有氨基酸序列SEQ ID NO: 5;或其中所述VH结构域包含一组在所述互补决定区 HCDRl 、 HCDR2以及HCDR3内具有10个或更少的氨基酸 置才奂的互^卜决定区。12. 才艮据权利要求11所述的应用， 人种系骨架。13. 根据权利要求12所述的应用， 基酸序歹'J SEQ ID NO: 1、 21、 101或111。其中，所述VH结构域骨架是其中，所述VH结构域具有氨 31、 41、 51、 61、 71、 81、 91、14. 根据权利要求11至13中任一项所述的应用，其中，所述结合 成员进一步包含VL结构域，其中所述VL结构域包含一组互 补决定区LCDR1 、 LCDR2和LCDR3,以及骨架。15. 根据权利要求14所述的应用，其中LCDR1具有氨基酸序列SEQIDNO: 6、 26、 36、 46、 56、 66、 76、 86、 96、 106或116,LCDR2具有氨基酸序列SEQ ID NO: 7，以及LCDR3具有氨基酸序列SEQ ID NO: 8;或其中所述VL结构域包含一组在所述互补决定区LCDR1、 LCDR2以及LCDR3内具有IO个或更少的氨基酸置才奐的互4卜决定区。16. 根据权利要求14或15所述的应用，其中，所述VL结构域骨架是人种系骨架。17. 才艮据权利要求16所述的应用，其中，所述VL结构域具有氨基卧臾序列SEQIDNO: 2、 22、 32、 42、 52、 62、 72、 82、 92、102或112。18. 根据权利要求14至17中任一项所述的应用，其中，所述结合成员是单链Fv。19. 根据权利要求14至17中任一项所述的应用，其中，所述结合成员是双j介抗体。20. —种结合纤连蛋白的额外结构域-A (ED-A)同种型和/或纤连蛋白的ED-A的结合成员，包含VH结构域，其中所述VH结构域包含骨架和一组互补决定区HCDRl 、 HCDR2以及HCDR3，其中HCDRl具有氨基酸序列SEQ ID NO: 3、 23、·33、 43、 53、 63、 73、 83、 93、 103或113,HCDR2具有氨基酸序列SEQ ID NO: 4,以及HCDR3具有氨基酸序列SEQ ID NO: 5;或其中所述VH结构域包含一组在所述互补决定区HCDRl 、 HCDR2以及HCDR3内具有10个或更少的氨基酸置换的互补决定区。21. 才艮据4又利要求19所述的结合成员，其中，所述VH结构域骨架是人种系骨架。22. 根据权利要求20所述的结合成员，其中，所述VH结构域具有氨基酸序列SEQIDNO: 1、 21、 31、 41、 51、 61、 71、 81、91、 101或111。23. 根据权利要求19至21中任一项所述的结合成员，其中，所述结合成员进一步包含VL结构域，其中所述VL结构域包含一组互补决定区LCDR1、 LCDR2和LCDR3，以及骨架。24. 根据权利要求22所述的结合成员，其中，LCDR1具有氨基酸序列SEQIDNO:6、 26、 36、 46、 56、66、 76、 86、 96、 106或116,LCDR2具有氨基酉交序列SEQ ID NO: 7,以及LCDR3具有氨基酸序列SEQ ID NO: 8;或其中所述VL结构域包含一组在所述互补决定区LCDRl 、 LCDR2以及LCDR3内具有IO个或更少的氨基酸置才奂的互4卜决定区。25. 根据权利要求22或23所述的结合成员，其中，所述VL结构域骨架是人种系骨架。26. 根据权利要求24...

【专利技术属性】
技术研发人员：达里奥内里，雅舍雷巴克，克里斯托夫勒斯利，亚历山德拉维拉，乔瓦尼内里，
申请(专利权)人：菲洛根股份公司，
类型：发明
国别省市：IT[意大利]