本发明专利技术涉及结合白介素23(IL-23)，特别为IL-23的p19亚单位的基于纤连蛋白的支架结构域蛋白质。本发明专利技术亦涉及创新蛋白质在治疗应用中用于治疗自身免疫疾病的用途。本发明专利技术还涉及包含所述蛋白质、编码所述蛋白质或其片段的多核苷酸的细胞，且涉及包含编码所述创新蛋白质的多核苷酸的载体。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及结合白介素23 (IL-23)、特别为IL-23的pl9亚单位的基于纤连蛋白的支架结构域蛋白质。本专利技术亦涉及创新蛋白质在治疗应用中用于治疗自身免疫疾病的用途。本专利技术还涉及包含所述蛋白质、编码所述蛋白质或其片段的多核苷酸的细胞，且涉及包含编码所述创新蛋白质的多核苷酸的载体。引言 IL-23为IL-12异源二聚体细胞因子家族的成员。其含有与IL-12共有的p40亚单位及独特的P19亚单位。IL-23通过由IL-12RP I及IL-23R组成的异源二聚体受体复合物发送信号(Aggarwal S 等人。Interleukin-23 promotes a distinct CD4 T cellactivation state characterized by the production of interleukin-17. J BiolChem. 278:1910-4，2003)。IL-23为用于治疗慢性炎性病症(例如多发性硬化、类风湿性关 节炎、牛皮癖及克罗恩病(Crohn’s disease))的潜在革巴。基于纤连蛋白的支架(Fibronectin based scaffold)为能发展到结合任一所关注化合物的蛋白质家族。这些蛋白质通常利用衍生自纤连蛋白III型(Fn3)或Fn3-样结构域的支架，以天然或改造抗体(亦即，多克隆抗体、单克隆抗体或单链抗体)所特有的方式起作用，且另外具有结构优势。特别地，这些抗体模拟物的结构已经设计而具有最优选折叠、稳定性及溶解性，甚至在通常导致抗体结构及功能丧失的情况下亦如此。基于纤连蛋白的支架蛋白质的实例为 Adnectin (Adnexus, Bristol-Myers Squibb R&D Company)。纤连蛋白III型(Fn3)结构域自N-末端至C-末端按顺序包含P或P样链A ;环AB ； ^或P样链B ;环BC邛或P样链C ;环CD邛或P样链D ;环DE邛或P样链E ；环EF邛或P样链F ;环FG;及P或P样链G。环AB、BC、CD、DE、EF及FG中的任一个或全部均可参与靶结合。BC、DE及FG环在结构与功能两方面皆与免疫球蛋白的互补决定区(OTR)类似。美国专利号7，115，396阐述Fn3结构域蛋白质，其中改变BC、DE及FG环产生高亲和力TNFa结合剂。美国公布号2007/0148126阐述Fn3结构域蛋白质，其中改变BC、DE及FG环产生高亲和力VEGFR2结合剂。将有利的是，获得用于治疗性治疗自身免疫病症的经改进的纤连蛋白结构域支架蛋白质。产生白介素17(IL-17; “Thl7细胞”)的效应T细胞亚群具有高促炎性并诱导严 重自身免疫。与Thl及Th2细胞相比，Thl7细胞表达不同亚群的细胞因子及趋化因子，包括IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)、IL-22、IL-17A及IL-17F以及趋化因子受体CCR6。IL-23通过活化 T 细胞来促进 IL-17 产生(Aggarwal S 等人。Interleukin-23 promotes a distinctCD4 T cell activation state characterized by the production of interleukin-17.J Biol Chem. 278:1910-4，2003)且为诱导产生IL-17的CD4+ T细胞扩增的关键细胞因子。暴露于IL-23似乎为决定Thl7细胞的致病性的关键特征。专利技术概述 本申请提供针对人IL-23特异性pl9亚单位的Adnectins 。本专利技术的一方面提供包含Fn3结构域的多肽,其中一个或多个溶剂可及环(solvent accessible loop)已被随机化或突变。在一些实施方案中，Fn3结构域为衍生自人纤连蛋白III型结构域的野生型第10模块(module) (10Fn3)的Fn3结构域。在一些实施方案中，本专利技术的wFM多肽与人kiFM结构域具有至少 40%、50%、60%、65%、70%、75%、80%、85% 或 90% 同一性。在一些实施方案中，一个或多个选自BC、DE及FG的环的长度可相对于相应人纤连蛋白环延长或缩短。 在一些实施方案中，本专利技术多肽包含纤连蛋白III型第10 (10Fn3)结构域，其中该10Fn3结构域包含环AB ;环BC ;环⑶；环DE ;环EF ;及环FG ;且具有至少一个选自环BC、DE及FG的环且所述环的氨基酸序列相对于人wFM结构域中相应环的序列经改变。在一些实施方案中，本专利技术多肽包含Fn3结构域，其包含与非环区具有至少80、85、90、95、98、99或100%同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本专利技术蛋白质的BC环包含选自SEQ ID NO: 2_6的氨基酸序列。在一些实施方案中，本专利技术蛋白质的DE环包含选自SEQ ID NO: 7-48的氨基酸序列。在一些实施方案中，本专利技术蛋白质的FG环包含选自SEQ ID NO: 49_59的氨基酸序列。在一些实施方案中，kiFM结构域可以氨基酸取代、插入或缺失开始和/或结束。在一些实施方案中，本专利技术蛋白质包含一个来自SEQ ID NO: 2_6中所示的BC环序列的环序列、一个SEQ ID NO: 7-48中所示的DE环序列及一个SEQ ID NO: 49-59中所示的FG环序列。在一些实施方案中，本专利技术蛋白质包含与SEQ ID NO: 2_59中任一个具有至少70、75、80、85、90、95、98、99或100%同一性的BC、DE及FG环氨基酸序列。在一些实施方案中，抗IL-23 Adnectin包含SEQ ID NO: 60-100中任一个的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗IL-23 Adnectin包含SEQ ID NO: 60-100中任一个的3至96位的Fn3结构域氨基酸序列。在一些实施方案中，抗IL-23 Adnectin包含与SEQ ID NO: 60-100中任一个具有至少70、75、80、85、90、95、98、99或100%同一性的氨基酸序列。在一方面，抗IL-23 Adnectin还包含药代动力学(PK)部分。在一些实施方案中，PK部分包含聚乙二醇(PEG)。在一方面，本申请提供可用于治疗自身免疫疾病的抗IL-23 Adnectin0在一方面，本专利技术提供包含纤连蛋白III型第10C°Fn3)结构域及抗IL-23Adnectin的融合多肽,其中该uiFr^结构域以I PM或更低的Kd结合至HSA。在某些实施方案中，1QFn3结构域包含与SEQ ID NO: 103具有至少70%同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，1QFn3结构域包含具有SEQ ID NO: 104中所示氨基酸序列的BC环、具有SEQ IDNO: 105中所示氨基酸序列的DE环及具有SEQ ID NO: 106中所示氨基酸序列的FG环。在另一实施方案中，1QFn3结构域包含以下中的一个或多个具有SEQ ID NO: 104中所示氨基酸序列的BC环、具有SEQ ID NO: 105中所示氨基酸序列的DE环及具有SEQ ID NO: 106中所示氨基酸序列的FG环。在一个实施方案中，融合多肽的kiFM结构域亦结合至以本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.02.18 US 61/305566;2010.05.03 US 61/3307061.一种多肽，其包含纤连蛋白III型第10结构域C°Fn3)，其中所述kiFM具有至少一个选自环BC、DE及FG的环且所述环的氨基酸序列相对于人wFM结构域中相应环的序列经改变，且其中所述多肽以小于500 nM的Kd结合IL-23的pl9亚单位。2.一种多肽，其包含纤连蛋白III型第10结构域C°Fn3)，其中所述kiFM具有至少一个选自环BC、DE及FG的环且所述环的氨基酸序列相对于人wFM结构域中相应环的序列经改变，且其中所述多肽结合IL-23的pl9亚单位的结构表位。3.权利要求I或2的多肽，其中所述BC环选自SEQID NO: 2_6。4.权利要求I或2的多肽，其中所述DE环选自SEQID NO: 7-48 5.权利要求I或2的多肽，其中所述FG环选自SEQID NO: 49-59。6.权利要求I或2的多肽，其中所述BC、DE或FG环氨基酸序列与SEQID NO: 2-59中的任一个具有至少80%同一性。7.权利要求I或2的多肽，其中所述多肽氨基酸序列与SEQID NO: 60-100中的任一个具有至少90%...
【专利技术属性】
技术研发人员：A布什，R达斯古普塔，L恩格尔，L施尼维斯，
申请(专利权)人：百时美施贵宝公司，
类型：发明
国别省市：
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