针对纤连蛋白-EDA的免疫球蛋白样分子制造技术

本发明专利技术涉及用于治疗、预防由心肌梗塞或压力负荷过大导致或与其相关的病症和不良心脏重塑，如心力衰竭、动脉瘤形成、和远端心肌纤维化或防止其发展以及用于优选在缺血性损伤后改善血管发生的免疫球蛋白(Ig)‑样分子或其片段。本发明专利技术还提供了编码所述Ig‑样分子的核酸、包含其的载体、和包含其的宿主细胞。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术的涉及医学领域，且具体是心脏血和血管发生领域。本专利技术提供了特异性结合纤连蛋白-EDA的EDA-结构域的免疫球蛋白(Ig)样分子，如抗体，及其抗原结合片段。这些Ig-样分子特别适于治疗、预防不良心脏或血管重塑以及心肌梗塞相关并发症或防止其发展并且改善或刺激血管发生。本专利技术还涉及包含Ig-样分子，例如抗体或其抗原结合片段的药物组合物以及使用Ig-样分子，例如抗体或其抗原结合片段治疗、预防心肌梗塞相关并发症和不良心脏或血管重塑或防止其发展并且改善或刺激血管发生的方法。
技术介绍
缺血性心脏病是西方社会最大的社会经济负担。在像中国和印度的发展中国家的快速现代化的时代中，这甚至成为更大的问题。缺血性心脏病的最严重和急性并发症是心脏病发作，也称为心肌梗塞。在美国、欧盟和日本，每年有240万患者患有心肌梗塞。每年在美国和欧盟仅治疗缺血性心脏病所花费的钱超过1500亿欧元。不幸的是，心肌梗塞相关的并发症或病症正在增加，因为越来越多的患者在初始威胁生命的梗塞中存活，但是之后逐渐有更差的心脏功能。心肌梗塞后的并发症，如心力衰竭、纤维化和心律失常导致高死亡率和发病率。这些并发症的最重要决定因素是不当的心脏修复反应，成为不良(心脏)重塑或不良血管重塑。心力衰竭(HF)获得许多注意，因为其是心肌梗塞之后不良重塑的最严重和最常见结果。欧洲心脏协会(ESC)声明“HF在西方社会中是21世纪的瘟疫”。仅在美国、欧盟和日本，每年至少180万患者由于新诊断的梗塞相关的HF而住院。诊断后一年内的死亡率为20％，5年内50％死亡。存活者的生活质量受到严重影响，因为它们有逐渐减少的运动耐量和降低的进行正常日常活动的能力。由于1)减少的运动耐量和之后减少的生产能力，2)昂贵的医疗治疗，其不是预防或治愈性的，但是减少症状，和3)再次住院治疗的结果，仅在美国和欧盟，每年社会经济负担接近600亿欧元。心肌梗塞的现有疗法目标在于恢复血液流过阻塞的冠状动脉。抗血栓药(即，防止血栓形成的药物)与支架一起是在心肌梗塞后恢复血液流动的最重要的药物和装置类别。尽管在血液流动恢复中有这些进展，梗塞相关的并发症仍然出现并且日益增加。主要原因在于不良重塑是与血液流动恢复完全不同的病理生理过程。梗塞的心脏的愈合是涉及许多细胞类型的复杂过程。心肌梗塞是急性事件，其中部分心肌死亡，导致泵送功能丧失。在这一急性事件之后，在血液和心肌中马上诱导修过过程，特征为强化的炎症。然而，炎症类型决定了梗塞的心脏是否适当修复并重塑。驱动更合适的愈合和有害炎症的关键因素是由与心脏死亡和基质降解相关的分子活化先天免疫。在许多患者中，免疫系统以不利的方式活化，导致心肌梗塞后心脏的不当愈合。在这些情况中，心脏将进入称为不良重塑的过程。不良重塑有多个有害结果：心力衰竭、心脏扩张和纤维化、扰乱的收缩和舒张、以及扰乱的电活化是已知的并发症。梗塞相关的发病率，如心力衰竭的增加强调了对强化梗塞后心脏修复的新疗法的需要。有助于梗塞的心脏愈合，尤其在心肌梗塞后的早期中的另一因素是血管发生。微血管从头形成具有在心肌信息后的早期恢复缺血性心肌的潜力，导致防止转化成心力衰竭。白细胞引起有害的炎性反应的主要决定因素是纤连蛋白-EDA的沉积。在心肌梗塞之后，纤连蛋白-EDA被新合成并且在梗塞的心肌中瞬时上调。纤连蛋白-EDA可活化面积系统和其他参与基质周转的细胞，从而诱导参与心脏修复的细胞(例如，白细胞、淋巴细胞和成纤维细胞)的迁移和分化。然后，纤连蛋白-EDA活化的细胞在愈合中的心脏中诱导有害的炎性反应。细胞纤连蛋白是ECM中存在的多功能粘附糖蛋白并且由细胞响应随MI出现的组织损伤而产生。其含有交替剪接的编码III型重复外结构域A(EIIIA；EDA)的外显子，其作用是TLR2和TLR4以及整联蛋白α4β1、α4β7和α9β1的内源性配体。在体外，纤连蛋白-EDA诱导促炎性基因表达并活化单核细胞。纤连蛋白-EDA在鼠关节中的体内注射导致强化的炎症。纤连蛋白-EDA通常在健康人组织中不表达，但是在胚胎发生期间并在几个(病理性)病症如(心脏)缺血性组织、动脉粥样硬化病灶、纤维化组织、肿瘤、移植排斥和伤口中新发展的血管中高度上调。脑缺血后，EDA的过表达导致强化的炎症和损伤。因此，纤连蛋白-EDA能够活化白细胞并且导致细胞因子和趋化因子的上调。最近显示，与野生型小鼠相比，在心肌梗塞后，纤连蛋白-EDA敲除小鼠显示减少的纤维化、保留心脏功能和减少的心室膨胀(Arslan F.等，Circ.Res.，2011年3月；108：582-592)。WO2012/057613描述了用针对纤连蛋白-EDA的EDA结构域的抗体处理小鼠在所述小鼠中防止左心室膨胀并且改善心肌梗塞后的存活率。本领域仍然需要能够在对象中治疗、预防心肌梗塞相关病症或防止其发展并增加对象心肌梗塞后存活机会的抗体。本专利技术的目的是提供这类抗体。
技术实现思路
本专利技术提供了与氨基酸序列GIXXXF(SEQ ID NO：1)特异性结合的分离的免疫球蛋白(Ig)-样分子或其抗原结合片段，其中X可以是任意氨基酸。在一个实施方式中，SEQ ID NO：1的3位处的氨基酸选自组氨酸、精氨酸、赖氨酸和丙氨酸，并且优选是组氨酸。在一个实施方式中，SEQ ID NO：1的4位处的氨基酸选自谷氨酸和丙氨酸，并且优选是谷氨酸。在一个实施方式中，SEQ ID NO：1的5位处的氨基酸选自亮氨酸和丙氨酸，并且优选是亮氨酸。在一个实施方式中，Ig-样分子或其片段特异性结合氨基酸序列GIHELF(SEQ ID NO：2)。本专利技术提供了与氨基酸序列LFPAP(SEQ ID NO：28)特异性结合的分离的免疫球蛋白(Ig)-样分子或其抗原结合片段。Ig-样分子或其抗原结合片段可以是抗体，例如，单克隆抗体。Ig-样分子或其抗原结合片段可以是鼠源，例如，可来自小鼠。Ig-样分子或其抗原结合片段可以是嵌合的、人源化的或人的。本专利技术还涉及Ig-样分子或其抗原结合片段，包含含有互补决定区(CDR)1、CDR2、和CDR3的重链可变区，CDR1具有SEQ ID NO：3所示氨基酸序列或有至多2个优选至多1个氨基酸被取代的SEQ ID NO：3所示氨基酸序列，CDR2具有SEQ ID NO：4所示氨基酸序列或有至多2个优选至多1个氨基酸被取代的SEQ ID NO：4所示氨基酸序列，并且CDR3具有SEQ ID NO：5所示氨基酸序列或有至多3个优选至多2个更优选至多1个氨基酸被取代的SEQ ID NO：5所示氨基酸序列。在一个实施方式中，本专利技术涉及包含重链可变区的Ig-样分子或其抗原结合片段，重链可变区包含：-具有氨基酸序列GYSIX1SGYSWH的CDR1，其中X1选自T和A；-具有氨基酸序列YIHX2SGX3ANYNPSLKS的CDR2，其中X2选自Y和F，并且其中X3选自S和I；-具有氨基酸序列EX4X5GX6FDY的CDR3，其中X4选自K和A，X5选自T和R，并且X6选自F和Y。本专利技术还涉及Ig-样分子或其抗原结合片段，包含含有CDR1、CDR2、和CDR3的轻链可变区，CDR1具有SEQ ID NO：6所示氨基酸序列或有至多3个，优选至多2个，更优选至多1个氨基酸被取代的SEQ ID N本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于优选在缺血性损伤后改善血管发生的结合纤连蛋白‑EDA的抗体或其抗原结合片段。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.12.12 NL 2011944;2013.12.12 NL 20119431.一种用于优选在缺血性损伤后改善血管发生的结合纤连蛋白-EDA的抗体或其抗原结合片段。2.如权利要求1所述用途的结合纤连蛋白-EDA的抗体或其抗原结合片段，其特征在于在患有缺血性疾病的对象中，优选在所述对象的缺血组织中改善血管发生。3.一种刺激有此需要的对象中血管发生的方法，包括向所述对象给予治疗有效量的结合纤连蛋白-EDA的抗体或其抗原结合片段。4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述对象患有缺血性疾病，并且优选其中在所述对象的缺血组织中改善血管发生。5.一种特异性结合SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：28所示的氨基酸序列的分离的免疫球蛋白(Ig)-样分子或其抗原结合片段。6.如权利要求5所述的Ig-样分子或其抗原结合片段，其特征在于，SEQ ID NO：1的3位处的氨基酸选自组氨酸、精氨酸、赖氨酸和丙氨酸，优选其中SEQ ID NO：1的3位处的氨基酸是组氨酸，和/或其中SEQ ID NO：1的4位处的氨基酸选自谷氨酸和丙氨酸，优选其中SEQ ID NO：1的4位处的氨基酸是谷氨酸，和/或其中SEQ ID NO：1的5位处的氨基酸选自亮氨酸和丙氨酸，优选其中SEQ ID NO：1的5位处的氨基酸是亮氨酸。7.如权利要求5或6所述的Ig-样分子或其抗原结合片段，其特征在于，所述Ig-样分子或其抗原结合片段特异性结合至SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。8.如权利要求5-7中任一项所述的Ig-样分子或其抗原结合片段，其特征在于，其为抗体。9.如权利要求5-8中任一项所述的Ig-样分子或其抗原结合片段，其特征在于，其为单克隆的。10.如权利要求5-9中任一项所述的Ig-样分子或其抗原结合片段，其特征在于，其是鼠源或其来自小鼠。11.如权利要求5-10中任一项所述的Ig-样分子或其抗原结合片段，其特征在于，其为嵌合的。12.如权利要求5-11中任一项所述的Ig-样分子或其抗原结合片段，其特征在于，其为人的或人源化的。13.Ig-样分子或其抗原结合片段，包含含有互补决定区(CDR)1、CDR2、和CDR3的重链可变区，CDR1具有SEQ ID NO：3所示氨基酸序列或有至多2个、优选至多1个氨基酸被取代的SEQ ID NO：3所示氨基酸序列，CDR2具有SEQ ID NO：4所示氨基酸序列或有至多2个、优选至多1个氨基酸被取代的SEQ ID NO：4所示氨基酸序列，并且CDR3具有SEQ ID NO：5所示氨基酸序列或有至多3个、优选至多2个、更优选至多1个氨基酸被取代的SEQ ID NO：5所示氨基酸序列。14.如权利要求13所述的Ig-样分子或其抗原结合片段，包含重链可变区，所述重链可变区包含：-具有氨基酸序列GYSIX1SGYSWH的CDR1，其中X1选自T和A；-具有氨基酸序列YIHX2SGX3ANYNPSLKS的CDR2，其中X2选自Y和F，并且其中X3选自S和I；-具有氨基酸序列EX4X5GX6FDY的CDR3，其中X4选自K和A，X5选自T和R，并且X6选自F和Y。15.Ig-样分子或其抗原结合片段，包含含有CDR1、CDR2、和CDR3的轻链可变区，CDR1具有SEQ ID NO：6所示氨基酸序列或有至多3个、优选至多2个、更优选至多1个氨基酸被取代的SEQ ID NO：6所示氨基酸序列，CDR2具有SEQ ID NO：7所示氨基酸序列或有至多2个、优选至多1个氨基酸被取代的SEQ ID NO：7所示氨基酸序列，并且CDR3具有SEQ ID NO：8所示氨基酸序列或有至多3个、优选至多2个、更优选至多1个氨基酸被取代的SEQ ID NO：8所示氨基酸序列。16.如权利要求15所述的Ig-样分子或其抗原结合片段，包含轻链可变区，所述轻链可变区包含：-具有氨基酸序列RSSQSX7VX8SNGNTYLX9的CDR1，其中X7选自L和I，X8选自H和R，并且X9选自H和T；-具有氨基酸序列KVSNRFS的CDR2；-具有氨基酸序列X10QX11X12HVPPT的CDR3，其中X10选自S和F，X11选自S和G，并且X12选自A和S。17.Ig-样分子或其抗原结合片段，包含含有CDR1、CDR2、和CDR3的重链可变区，CDR1具有SEQ ID NO：3所示氨基酸序列或有至多2个、优选至多1个氨基酸被取代的SEQ ID NO：3所示氨基酸序列，CDR2具有SEQ ID NO：4所示氨基酸序列或有至多2个、优选至多1个氨基酸被取代的SEQ ID NO：4所示氨基酸序列，并且CDR3具有SEQ ID NO：5所示氨基酸序列或有至多3个、优选至多2个、更优选至多1个氨基酸被取代的SEQ ID NO：5所示氨基酸序列；和含有CDR1、CDR2、和CDR3的轻链可变区，CDR1具有SEQ ID NO：6所示氨基酸序列或有至多3个、优选至多2个、更优选至多1个氨基酸被取代的SEQ ID NO：6所示氨基酸序列，CDR2具有SEQ ID NO：7所示氨基酸序列或有至多2个、优选至多1个氨基酸被取代的SEQ ID NO：7所示氨基酸序列，并且CDR3具有SEQ ID NO：8所示氨基酸序列或有至多3个、优选至多2个、更优选至多1个氨基酸被取代的SEQ ID NO：8所示氨基酸序列。18.如权利要求17所述的Ig-样分子或其抗原结合片段，其包含重链可变区，包含-具有氨基酸序列GYSIX1SGYSWH的CDR1，其中X1选自T和A；-具有氨基酸序列YIHX2SGX3ANYNPSLKS的CDR2，其中X2选自Y和F，并且其中X3选自S和I；和-具有氨基酸序列EX4X5GX6FDY的CDR3，其中X4选自K和A，X5选自T和R，并且X6选自F和Y；和轻链可变区，包含：-具有氨基酸序列RSSQSX7VX8SNGNTYLX9的CDR1，其中X7选自L和I，X8选自H和R，并且X9选自H和T；-具有氨基酸序列KVSNRFS的CDR2；和-具有氨基酸序列X10QX11X12HVPPT的CDR3，其中X10选自S和F，X11选自S和G，并且X12选自A和S。19.Ig-样分子、抗体或其抗原结合片段，包含重链可变区，包含：-具有SEQ ID NO：9所示氨基酸序列的CDR1；-具有SEQ ID NO：10所示氨基酸序列的CDR2；和-具有SEQ ID NO：11所示氨基酸序列的CDR3；和轻链可变区，包含：-具有SEQ ID NO：12所示氨基酸序列的CDR1；-具有SEQ ID NO：13所示氨基酸序列的CDR2；和-具有SEQ ID NO：14所示氨基酸序列的CDR3。20.Ig-样分子、抗体或其抗原结合片段，包含重链可变区，包含：-具有SEQ ID NO：3所示氨基酸序列的CDR1；-具有SEQ ID NO：4所示氨基酸序列的CDR2；和-具有SEQ ID NO：5所示氨基酸序列的CDR3；和轻链可变区，包含：-具有SEQ ID ...

【专利技术属性】
技术研发人员：F·阿斯兰，
申请(专利权)人：UMC乌得勒支控股有限公司，
类型：发明
国别省市：荷兰;NL