包含喜温地芽孢杆菌(GEOBACILLUS TEPIDAMANS)甘露聚糖酶的洗涤剂组合物及其使用方法技术

本发明专利技术的组合物和方法涉及从喜温地芽孢杆菌(Geobacillus?tepidamans)克隆的内切-β-甘露聚糖酶、编码所述内切-β-甘露聚糖酶的多核苷酸，以及它们的使用方法。包含内切-β-甘露聚糖酶的制剂非常适合用作洗涤剂。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含喜温地芽孢杆菌(GEOBACILLUS TEPI DAMANS)甘露聚糖酶的洗涤剂组合物及其使用方法优先权本专利申请要求2011年4月29日提交的国际专利申请N0.PCT/CN2011/073536的优先权，该国际专利申请据此全文以引用方式并入。
本专利技术的组合物和方法涉及从喜温地芽孢杆菌克隆的内切甘露聚糖酶、编码内切-甘露聚糖酶的多核苷酸以及它们的使用方法。包含内切-甘露聚糖酶的制剂非常适合用作洗涤剂。
技术介绍
当前的衣物洗涤剂和织物护理组合物包括诸如表面活性剂、酶(蛋白酶、淀粉酶、甘露聚糖酶和/或纤维素酶)、漂白剂、助洗剂体系、抑泡齐?、悬污剂、去污齐?、荧光增白齐?、软化剂、分散剂、染料转移抑制化合物、研磨剂、杀菌剂和香料之类的活性成分的复杂组合。包括内切甘露聚糖酶在内的甘露聚糖酶已经用于通过水解甘露聚糖而移除树胶污溃的洗涤剂清洁组合物中。自然界中存在多种甘露聚糖。这些包括直链甘露聚糖、葡甘露聚糖、半乳甘露聚糖和半乳葡甘露聚糖。在每种情况下，多糖包含甘露糖残基的β-1，4-连接主链,所述甘露糖残基可以由葡萄糖残基置换至多到33%(Yeoman et al., AdvAppl Microbiol, Elsivier (Yeoman等人，《应用微生物学进展》,爱思唯尔出版社))。在半乳甘露聚糖或半乳葡甘露聚糖中，半乳糖残基以α-1，6-键与甘露聚糖主链连接(Moreiraand Filho, Appl Microbiol Biotechnol, 79:165, 2008 (Moreira 和 Filho,《应用微生物学和生物工程》，第79卷，第165页，2008年))。因此，甘露聚糖水解为其组分糖需要内切1，4- β -甘露聚糖酶，该酶水解主链键以生成短链甘露低聚糖,所述低聚糖由1，4- β -甘露糖苷酶进一步降解为单糖。然而，酶通常被清洁组合物中存在的表面活性剂和其他组分抑制，这干扰其移除污溃的能力。例如，衣物洗涤剂中存在的蛋白酶可能在发生树胶污溃移除之前降解甘露聚糖酶。此外，甘露聚糖酶可能具有它们呈活性的有限PH和/或温度范围，这可使得它们不适于某些制剂和洗涤条件。因此，需要在清洁组合物的苛刻环境下保留活性的内切-β -甘露聚糖酶。
技术实现思路
本专利技术的组合物和方法涉及从喜温地芽孢杆菌克隆的内切甘露聚糖酶l(Gte Manl)。包含内切-β -甘露聚糖酶的制剂非常适合用作洗涤剂。具体地讲，本专利技术提供了包含内切-β_甘露聚糖酶的催化结构域的重组多肽，其中所述催化结构域与SEQ ID NO: 12的氨基酸序列至少70% (70%、75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或 100%)相同。本专利技术还提供了 包含内切-β-甘露聚糖酶成熟形式的重组多肽，其中所述成熟形式与SEQ ID Ν0:11的氨基酸序列至少 80% (80%、85%、86%、87%、88%、89%、90、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或100%)相同。在一些实施例中，在洗涤剂存在的情况下，多肽具有可测量的甘露聚糖酶活性。在一些实施例中，在蛋白酶存在的情况下，多肽具有可测量的甘露聚糖酶活性。在一些实施例中，多肽和蛋白酶均以约0.1至约10.0ppm存在。在一些实施例中，多肽在4.2和6.4之间的PH值保持大于70%的甘露聚糖酶活性。在一些实施例中，多肽具有约5.0的最佳pH。在一些实施例中，其中多肽在48°C至62°C范围内的温度保持大于70%的甘露聚糖酶活性。在一些实施例中，多肽具有约54°C的最佳温度。在一些实施例中，多肽能够水解选自巧克力冰淇淋、瓜耳胶、刺槐豆胶以及它们的组合的底物。在一些实施例中，氨基酸序列与由SEQID N0:8-14和30-49组成的组中的一条序列至少95%相同。在一些实施例中，多肽还包含具有1-13个残基的氨基端延伸。在一些实施例中，氨基端延伸包含Ala-Gly-Lys。在一些实施例中，多肽还包含天然的或非天然的信号肽。在一些实施例中，多肽还包含至少一个糖类结合模块。在其他实施例中，多肽不包含糖类结合模块。本专利技术还提供了包含至少一种前述段落的重组多肽的洗涤剂组合物。在一些实施例中，该组合物还包含表面活性剂。在一些实施例中，表面活性剂选自十二烷基苯磺酸钠、氢化椰油酸钠、月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠、C12-14链烷醇聚醚-7、C12-15链烷醇聚醚_7、C12-15链烷醇聚醚硫酸钠、C14-15链烷醇聚醚_4以及它们的组合。在一些优选的实施例中，表面活性剂为离子表面活性剂。在一些实施例中，离子表面活性剂选自阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、两性离子表面活性剂以及它们的组合。在一些优选的实施例中，组合物还包含酶，所述酶选自蛋白酶、蛋白酶、过氧化物酶、纤维素酶、β-葡聚糖酶、半纤维素酶、脂肪酶、酰基转移酶、磷脂酶、酯酶、漆酶、过氧化氢酶、芳基酯酶、淀粉酶、α -淀粉酶、葡糖淀粉酶、角质酶、果胶酶、果胶酸裂解酶、角蛋白酶、还原酶、氧化酶、酚氧化酶、脂氧合酶、木质素酶、卡拉胶酶、支链淀粉酶、鞣酸酶、阿拉伯糖酶、透明质酸酶、软骨素酶、木葡聚糖酶、木聚糖酶、果胶乙酰酯酶、聚半乳糖醛酸酶、鼠李半乳糖醛酸酶、其他内切-甘露聚糖酶、外切-β-甘露聚糖酶、果胶甲酯酶、纤维二糖水解酶、转谷氨酰胺酶以及它们的组合。在一些实施例中，该组合物包含蛋白酶和淀粉酶。在一些实施例中，洗涤剂选自衣物洗涤剂、织物软化洗涤剂、盘碟洗涤剂和硬质表面清洁洗涤剂。在一些实施例中，洗涤剂处于选自液体、粉末、颗粒状固体和片剂的形式。此外，本专利技术还提供了水解在表面上的污垢或污溃中存在的甘露聚糖底物的方法，该方法包括:使表面与洗涤剂组合物接触以获得清洁的表面。还提供了清洁纺织物的方法，该方法包括:使玷污的纺织物与洗涤剂组合物接触以获得清洁的纺织物。此外，本专利技术提供了编码前述段落的重组多肽的分离的核酸。还提供了包含与调控序列有效组合的分离核酸的表达载体。另外，还提供了包含表达载体的宿主细胞。在一些实施例中，宿主细胞为细菌细胞或真菌细胞。本专利技术还提供了制备内切-β-甘露聚糖酶的方法，该方法包括:将宿主细胞在合适的条件下在培养基中培养，以形成包含内切-β -甘露聚糖酶的培养物。在一些实施例中，该方法还包括通过离心从培养物移除宿主细胞，以及通过过滤移除小于IOkDa的碎片，从而获得富含内切-β -甘露聚糖酶的上清液。本专利技术还提供了用于水解多糖的方法，包括:使包含甘露糖的多糖与上清液接触以获得包含甘露糖的低聚糖。在一些实施例中，多糖选自甘露聚糖、葡甘露聚糖、半乳甘露聚糖、半乳葡甘露聚糖以及它们的组合。Gte Manl组合物和方法的这些和其他方面将从以下描述显而易见。【附图说明】图1 提供了 pZQ184 (aprE-Gte Man I)的质粒图谱。图2A示出了 Gte Manl在Small&Mighty液体洗漆剂中的清洁性能。图2B示出了Gte Manl在奥妙洁彩(0M0 Color)粉末洗涤剂中的清洁性能。图3A示出了 Gte Manl的pH特征图。图3B示出了基准内切-β -甘露聚糖酶(Mannast本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种包含内切?β?甘露聚糖酶的催化结构域的重组多肽，其中所述催化结构域与SEQ?ID?NO:12的氨基酸序列至少70%相同。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2011.04.29 CN PCT/CN2011/0735361.一种包含内切-β-甘露聚糖酶的催化结构域的重组多肽，其中所述催化结构域与SEQ ID NO: 12的氨基酸序列至少70%相同。2.一种包含内切-β_甘露聚糖酶的成熟形式的重组多肽，其中所述成熟形式与SEQID NO: 11的氨基酸序列至少80%相同。3.根据权利要求1或2所述的重组多肽，其中所述多肽在洗涤剂存在的情况下具有甘露聚糖酶活性。4.根据权利要求1-3中任一项所述的重组多肽，其中所述多肽在蛋白酶存在的情况下具有甘露聚糖酶活性。5.根据权利要求1-4中任一项所述的重组多肽，其中所述多肽在4.2至6.4之间的pH值保留大于70%的甘露聚糖酶活性。6.根据权利要求1-5中任一项所述的重组多肽，其中所述多肽在48°C至62°C的温度范围内保留大于70%的甘露聚糖酶活性。7.根据权利要求1-6中任一项所述的重组多肽，其中所述多肽能够水解选自巧克力冰淇淋、瓜耳胶、刺槐豆胶以及它们的组合的底物。8.根据权利要求1-7中任一项所述的重组多肽，其中所述氨基酸序列与由SEQIDN0:8-14和30-49组成的组中的一条序列至少95%相同。9.根据权利要求1-8中任一项所述的重组多肽，其还包含具有1-13个残基的氨基端延伸。10.根据权利要求1-9 中任一项所述的重组多肽，其还包含天然或非天然信号肽。11.根据权利要求1、3_7中任一项所述的重组多肽，其中所述多肽不进一步包含糖类结合模块。12.一种洗涤剂组合物，其包含根据权利要求1-11中任一项所述的重组多肽。13.根据权利要求12所述的洗涤剂组合物，其还包含表面活性剂。14.根据权利要求13所述的洗涤剂组合物，其中所述表面活性剂为离子表面活性剂。15.根据权利要求14所述的洗涤剂组合物，其中所述离子表面活性剂选自阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、两性离子表面活性剂以及它们的组合。16.根据权利要求12-15中任一项所述的洗涤剂组合物，其还包含选自以下的酶:蛋白酶、蛋白酶、过氧化物酶、纤维素酶、β -葡聚糖酶、半纤维素酶、脂肪酶、酰基转移酶、磷脂酶、酯酶、漆酶、过氧化氢酶、芳基酯酶、淀粉酶、α -淀粉酶、葡糖淀粉酶、角质酶、果胶酶、果胶酸裂解酶、角蛋白酶、还原酶、氧化酶、酚氧化酶、脂氧合酶、木质素酶、卡拉胶酶、支链淀粉酶、鞣酸酶、阿拉伯糖酶、透明质酸酶、软骨素酶、木葡聚糖酶、木聚糖酶、果胶乙酰酯酶、聚半乳糖醛酸酶、鼠李半乳糖醛酸酶、其他内切-β -甘露聚糖酶、外切-β -甘露聚糖酶、果胶甲酯酶、纤维二糖水解酶、转谷氨酰胺酶以及它们的组合。17.根据权利要求16所述的洗涤剂组合物，其中所述组合包含蛋白酶和淀粉酶。18.根据权利要求12-17中任一项所述的洗涤剂组合物，其中所述洗涤剂选自衣物洗涤剂、织物软化洗涤剂、盘碟洗涤剂以及硬质表面清洁洗涤剂。19.根据权利要求12-18中任一项所述的洗涤剂组合物，其中所述洗涤剂处于选自液体、粉末、颗粒状固体和片剂的形式。20.一种水解存在于表面上的污垢或污溃中的甘露聚糖底物的方法，其包括:使所述表面与根据权利要求12-19中任一项所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：B·E·琼斯，M·科尔克曼，Z·钱，B·S·劳尔森，K·M·克拉格，S·普莱斯鲁斯，Z·于，L·M·贝比，M·埃斯塔布鲁克，L·华，
申请(专利权)人：丹尼斯科美国公司，
类型：
国别省市：