蜡样芽孢杆菌BCJB01在防治根结线虫方面的应用制造技术

本发明专利技术公开了蜡样芽孢杆菌BCJB01在防治根结线虫方面的应用。蜡样芽孢杆菌BCJB01的上清液和菌悬液对番茄根结线虫二龄幼虫和即将孵化出二龄幼虫的卵均有完全致死作用。本发明专利技术提供了一种新的防治根结线虫的菌株，其效果不低于市面上现有化学药剂，在防治根结线虫方面有着极大的进步。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及菌株的应用领域，特别是涉及蜡样芽孢杆菌BCJB01在防治根结线虫方面的应用。
技术介绍
根结线虫病是一种严重的植物线虫寄生性病害，常造成严重的经济损失。根结线虫病害的防治是目前农业生产上亟待解决的难题。传统的防治措施主要包括化学防治、轮作和使用抗病品种等，但这些防治措施都有其局限性。利用微生物防治根结线虫，具有可持续发展的优势，是根结线虫病害可持续治理的理想途径之一。利用生防细菌防治根结线虫的研究报道，主要有根围促生细菌、穿刺巴氏杆菌、假单胞杆菌、苏云金芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、类芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌等，它们在线虫生物防治中有着巨大的开发潜力，其价值也逐渐被人们认知。但是现有的生防细菌防治根结线虫的效果仍需改善加强,新的生防细菌也需要继续开发。
技术实现思路
本专利技术的目的就是针对上述存在的缺陷而提供蜡样芽孢杆菌BCJB01在防治根结线虫方面的应用。本专利技术提供了一种新的防治根结线虫的菌株，其效果不低于市面上现有化学药剂，在防治根结线虫方面有着极大的进步。本专利技术的蜡样芽孢杆菌BCJB01在防治根结线虫方面的应用技术方案为，蜡样芽孢杆菌BCJB01的上清液和菌悬液对番茄根结线虫二龄幼虫和即将孵化出二龄幼虫的卵均有完全致死作用。本专利技术所述蜡样芽孢杆菌（Bacilluscereus）BCJB01，其保藏号为CGMCCNO.10477，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称CGMCC），地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮编：100101，保藏日期为2015年1月30日。将蜡样芽孢杆菌BCJB01发酵液制备成生防菌剂进行蔬菜根结线虫病的防治。蜡样芽孢杆菌BacilluscereusBCJB01发酵液的制备具体为：培养温度30℃，转速110RPM，发酵时间为36～44h，发酵液pH维持在7.0，溶氧量20％，通气量8～12m3/小时，罐压0.05～0.1KPa，产孢率为80%以上，活菌计数7×109CFU·mL-1；发酵培养基配方：玉米粉2%，豆粕粉1%，酵母粉0.3%，CaCl20.1%，MgSO4·7H2O0.035%，Na2HPO4·12H2O0.3%，NaH2PO4·2H2O0.15%，pH7.0～7.2。所述的生防菌剂为悬浮剂，将蜡样芽孢杆菌BacilluscereusBCJB01发酵液与表面活性剂、防腐剂、悬浮助剂和增稠剂等混合制备悬浮剂，其中悬浮助剂是氯化钾。本专利技术的悬浮剂的悬浮助剂选择氯化钾替代现在常用的氯化钠，在实际应用中即可减少土壤环境中氯化钠的含量，防止土壤盐碱化，同时氯化钾可作为钾肥能被作物吸收利用。优选的，本专利技术悬浮助剂是氯化钾，防腐剂是双乙酸钠，表面活性剂是有机硅BD-3077，增稠剂是黄原胶。所述的悬浮剂具体制备方法为：在蜡样芽孢杆菌BacilluscereusBCJB01发酵液中，按质量百分比加入氯化钾5％～8％，双乙酸钠0.1％～0.5％，有机硅BD-30770.1％～0.3％，黄原胶0.2％～0.3％制得悬浮剂，所得悬浮剂中BCJB01活菌计数5×109cfu·mL-1。以上各组份的用量均以BCJB01菌的发酵液的质量为基数。所述的生防菌剂为粉剂，将蜡样芽孢杆菌BacilluscereusBCJB01与保护剂混合，然后喷雾干燥制备母粉，继而以草炭土为载体，壳聚糖为增效剂，脂肪醇聚氧乙烯醚为润湿剂，2-萘磺酸甲醛聚合物钠盐为分散剂，荧光增白剂CBS为紫外保护剂，将BCJB01母粉制成粉剂，其中喷雾保护剂为白炭黑、甘油和吐温80的混合物，保护剂浓度为14～20％，母粉中活菌得率平均在60%以上，活菌数在150亿个/g以上。所述粉剂由按重量比的以下成分组成：母粉5～10重量份草炭土55～77重量份壳聚糖1～2.5重量份2-萘磺酸甲醛聚合物钠盐3～5重量份脂肪醇聚氧乙烯醚3～5重量份荧光增白剂CBS0.2～0.5重量份。本专利技术的蜡样芽孢杆菌BCJB01在防治根结线虫方面的应用有益效果为：BCJB01发酵上清液及其菌悬液对番茄根结线虫二龄幼虫均有致死作用，致死作用随着稀释液浓度的降低而减小，随着处理时间的延长而加大。本专利技术中的BCJB01悬浮剂在每亩用量4L时的防治效果最好，防效为91.59%。BCJB01粉剂在每亩用量8kg时的防治效果为90.40%。本专利技术中的BCJB01悬浮剂和粉剂对番茄根结线虫的防治效果均好于已商品化的B418菌株制剂。其中，在相同使用剂量下，BCJB01悬浮剂防治效果较B418悬浮剂提高1.37倍，BCJB01粉剂防治效果较B418粉剂提高1.11倍。本专利技术中的BCJB01悬浮剂亩用量2L时的防效为76.64%，BCJB01粉剂亩用量4kg时的防效为78.12%，均与当前市场上防治效果最好的化学药剂10%噻唑膦颗粒剂相近。表明本专利技术中的BCJB01悬浮剂和粉剂是效果很好的微生物杀线剂。附图说明图1所示为蜡样芽孢杆菌（Bacilluscereus）BCJB01对根结线虫二龄幼虫卵的致死过程。图2所示为BCJB01致死的二龄幼虫。具体实施方式：为了更好地理解本专利技术，下面用具体实例来详细说明本专利技术的技术方案，但是本专利技术并不局限于此。本专利技术所述蜡样芽孢杆菌（Bacilluscereus）BCJB01，其保藏号为CGMCCNO.10477，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称CGMCC）。实施例1BCJB01菌株分离及鉴定1、本专利技术涉及番茄根结线虫二龄幼虫和即将孵化出二龄幼虫的卵均有致死作用的BCJB01菌株，分离于山东省聊城市高唐县白菜田土壤中。菌种保藏号为CGMCCNO.10477。2、菌株鉴定采用采用生理生化特征测定和16SrDNA序列比对分析结合的方法将菌株BCJB01鉴定为蜡样芽孢杆菌（Bacilluscereus）。同时，将分离纯化的单菌落同时进行V．P试验、菌膜形成试验、卵磷脂酶试验、淀粉水解试验、酪蛋白水解试验、七叶灵、纤维二糖等七个重要特征的鉴定，测定依据均参照东秀珠、蔡妙英等编著的《常见细菌系统鉴定手册》。实施例2BCJB01对番茄根结线虫二龄幼虫的致死作用1.BCJB01发酵液的制备，按以下步骤进行：（1）斜面菌种：采用固体LB培养基，将蜡样芽孢杆菌BCJB01接种在试管培养基上，30℃培养24小时。（2）摇瓶菌种：采用液体LB培养基，将试管菌种接种在液体LB培养基中，置摇床上30℃，振荡培养15小时。（3本文档来自技高网...

【技术保护点】
蜡样芽孢杆菌BCJB01在防治根结线虫方面的应用。

【技术特征摘要】
1.蜡样芽孢杆菌BCJB01在防治根结线虫方面的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，蜡样芽孢杆菌BCJB01的上清液和菌悬液对
番茄根结线虫二龄幼虫和即将孵化出二龄幼虫的卵均有完全致死作用。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，蜡样芽孢杆菌(Bacilluscereus)BCJB01，
其保藏号为CGMCCNO.10477。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，将蜡样芽孢杆菌BCJB01发酵液制备成生防
菌剂进行蔬菜根结线虫病的防治。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，蜡样芽孢杆菌BacilluscereusBCJB01发
酵液的制备具体为：培养温度30℃，转速110RPM，发酵时间为36～44h，发酵液pH维持在7.0，
溶氧量20％，通气量8～12m3/小时，罐压0.05～0.1KPa，产孢率为80％以上，活菌计数7×
109CFU·mL-1；发酵培养基配方：玉米粉2％，豆粕粉1％，酵母粉0.3％，CaCl20.1％，MgSO4·
7H2O0.035％，Na2HPO4·12H2O0.3％，NaH2PO4·2H2O0.15％，pH7.0～7.2。
6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的生防菌剂为悬浮剂，将蜡样芽孢杆
菌BacilluscereusBCJB01发酵液与表面活性剂、防腐剂...

【专利技术属性】
技术研发人员：王贻莲，李纪顺，谢雪迎，陈凯，杨合同，扈进冬，
申请(专利权)人：山东省科学院生物研究所，
类型：发明
国别省市：山东;37