本发明专利技术涉及一种利用产中性蛋白酶的凝结芽孢杆菌Liu‑g1活菌制剂提高北京油鸡生产性能的方法，适用于家禽畜牧业中饲养生产北京油鸡。本发明专利技术利用筛选自传统干酪中的产中性蛋白酶的凝结芽孢杆菌Liu‑g1菌株，经过活化、扩大培养、高密度发酵、离心浓缩、加入冻干保护剂、预冻和冷冻干燥等工序制备活菌制剂；再将活菌数量为1010CFU/g以上的该活菌制剂添加到饲养油鸡基础日粮中，添加量为0.1g/kg·d，饲喂含菌剂饲料至12～14周龄，可降低油鸡死亡率至3.3％，提高油鸡体重。本发明专利技术将凝结芽孢杆菌Liu‑g1活菌制剂作为油鸡生物饲料添加剂，既可改善肠道菌群，促进油鸡肠道中双歧杆菌有益菌的生长，而抑制沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等有害菌的生长，又可利用凝结芽孢杆菌Liu‑g1产中性蛋白酶的特性，达到显著提高饲料蛋白利用率及提高油鸡生产性能之目的。同时操作简单，成本低廉，适合规模化养殖北京油鸡。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及新型微生态制剂应用领域，具体涉及凝结芽孢杆菌Liu-g1活菌制剂应用于提高油鸡生产性能。
技术介绍
饲用微生态制剂是采用农业部认可的动物肠道有益微生物经发酵、纯化、干燥而精制的复合生物制剂，是一种减少或替代抗生素的绿色生物添加剂。本专利技术涉及的凝结芽孢杆菌(Bacilluscoagulans)Liu-g1是从传统干酪中分离纯化出来的一株具有产中性蛋白酶的芽孢杆菌。1989年美国食品与药物管理局(FDA)和美国饲料控制官员协会公布了可以直接饲喂且一般认为是安全的微生物菌种名单共42种，其中包括凝结芽孢杆菌。我国农业部《饲料添加剂品种目录(2013)》发布的饲料添加剂包括凝结芽孢杆菌，可饲喂于肉鸡、生长育肥猪和水产养殖动物。凝结芽孢杆菌为兼性厌氧菌，在有氧条件下有利于繁殖菌体，在无氧条件下产生大量乳酸。该菌既具有乳酸菌产乳酸的特性，又具有良好的抗逆性。其芽孢对高温及低pH环境具有很强的耐受性，可顺利通过胃肠道逆环境，并发挥良好的益生效果，因此可用于制备微生态制剂。本专利技术涉及的产中性蛋白酶凝结芽孢杆菌Liu-g1用于发酵生产活菌制剂，可提高北京油鸡对饲料的消化吸收，从而提高油鸡的生产性能。此外，试验研究表明，该菌还能分泌α-淀粉酶、脂肪酶、纤维素酶等酶类，在消化道中与动物体内的消化酶类共同发挥作用，从而提高饲料利用率。目前，国内申请凝结芽孢杆菌饲用专利，其
技术实现思路
大多是饲用具有育肥作用的凝结芽孢杆菌，如专利技术专利CN103255082A公开了“一株用于育肥猪养殖的优良凝结芽孢杆菌及其应用”，报道了饲喂凝结芽孢杆菌可以育肥仔猪；又如专利技术专利CN103243043A公开了“一株用于改善次等猪苗养殖的优良凝结芽孢杆菌及其应用”，报道了一株凝结芽孢杆菌可改善猪苗的健康状况，提高次等猪苗养殖的生产性能；又如专利技术专利CN103205377A公开了“一株用于肉鸡养殖的优良凝结芽孢杆菌及其应用”，报道了一株凝结芽孢杆菌能够调节肉鸡免疫能力、降低幼禽死亡率；又如专利技术专利CN104403972A公开了“一株提高白羽肉鸡生长性能的凝结芽孢杆菌”，报道了从健康家禽的消化道内分离出的一株凝结芽孢杆菌能够提高白羽肉鸡生长性能，在白羽肉鸡的日粮中添加该凝结芽孢杆菌可以降低白羽肉鸡盲肠内的大肠杆菌数目和氨态氮浓度，并提高盲肠食糜的微生物多样性指数，同时降低了白羽肉鸡的死淘率和料肉比，提高了试验组肉鸡的日增重。目前有关凝结芽孢杆菌饲用育肥仔猪与提高白羽肉鸡的生长性能的方法已见专利报道。但是，关于利用产中性蛋白酶的凝结芽孢杆菌活菌制剂饲喂北京油鸡，提高北京油鸡生产性能的方法，尚未见国内外相关文献报道和专利报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种提高北京油鸡生产性能的方法。本专利技术是通过以下技术方案实现的：本专利技术所涉及的凝结芽孢杆菌(Bacilluscoagulans)Liu-g1，分离筛选自传统干酪中，已于2015年5月8日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)，保藏号为：CGMCCNo.10790。在脑心浸液(BHI)培养基上，凝结芽孢杆菌Liu-g1的菌落大小为2～4mm，灰白色、不透明、表面湿润、边缘不整齐，菌落表面初期(45℃，培养6～8h)扁平，后期皱褶凸起；菌体细胞呈大杆状，长短不一，中生芽孢，G+好氧嗜热菌。为了确定凝结芽孢杆菌在提高北京油鸡生产性能的作用，将该菌制成活菌制剂进行动物试验。所述方法中，选择体重相近、健康无病的4周龄的120只北京油鸡，随机分为4组，每组设3个重复，每个重复有北京油鸡10只；空白对照组不添加凝结芽孢杆菌Liu-g1活菌制剂，只饲喂基础日粮；试验组在基础日粮中添加活菌数为7.4×1010CFU/g以上的凝结芽孢杆菌Liu-g1活菌制剂，并按低、中、高剂量活菌制剂，每个试验组添加量分别为1g/kg·d、0.1g/kg·d、0.01g/kg·d。饲喂添加菌剂饲料的时间为每天上午8:00～9:00，提前将120只油鸡禁食1h，确保其尽快将含菌饲料摄入，避免菌体在饲料中繁殖，以保证每日菌剂摄入量一致。采用三层阶梯式单鸡笼养鸡舍饲养北京油鸡，高床平养，每日光照16h。控温风机纵向负压通风，饮水器为乳头式，人工喂料，自由采食、自由饮水。正式试验周期为4～14周龄。每两周龄称量油鸡体重，并采集鸡粪便样品，测定其蛋白质含量，同时测定粪便中双歧杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌的活菌数量。每两周龄采集血清样品，测定其血清蛋白含量。所述方法中，动物试验结果表明，将活菌数为7.4×1010CFU/g以上产中性蛋白酶的凝结芽孢杆菌Liu-g1活菌制剂添加到油鸡基础日粮中，添加量为0.1g/kg·d，饲喂含菌剂饲料至12～14周龄，可降低油鸡死亡率至3.3％(空白对照组为20％)，显著提高油鸡体重，改善肠道菌群，促进油鸡肠道中双歧杆菌有益菌的生长，而抑制沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等有害菌的生长，并利用凝结芽孢杆菌Liu-g1产中性蛋白酶的特性，达到显著提高饲料蛋白利用率及提高油鸡生产性能之目的。同时操作简单，成本低廉，适合规模化养殖北京油鸡。上述方法，利用高活菌数产中性蛋白酶的凝结芽孢杆菌Liu-g1活菌制剂提高北京油鸡生产性能的方法与专用生产菌株属于本专利技术保护范围。具体实施方式下述实施例对本专利技术作进一步说明而不限制本专利技术的保护范围。下述实施例中的实验方法，如无特别说明，均为常规方法。下述实施例中的百分含量，如无特别说明，均为体积分数。实施例1、产中性蛋白酶的凝结芽孢杆菌Liu-g1活菌制剂的制备1、菌种活化将凝结芽孢杆菌Liu-g1斜面或平板培养物接种于装有灭菌的5mLBHI培养基试管中，于45℃转速为150r/min的摇床培养12h活化培养一代。而后以2％的接种量移种于装有灭菌的5mL基础培养基试管中，于37℃转速为150r/min的摇床培养48h活化培养二代，得到活化菌种。凝结芽孢杆菌Liu-g1基础培养基配方为(质量体积比浓度，W/V)：1％葡萄糖，1％蛋白胨，0.2％NaCl，蒸馏水1000mL，pH7.0。2、高密度发酵将1L发酵培养基装入5L自动发酵罐中，活化好的Liu-g1菌种以2％的接种量移入发酵罐中进行高密度分批发酵，控制发酵温度45℃，发酵液初始pH7.5，搅拌转速180～220r/min，发酵时间48h，得到活菌数为(9.5～9.8)×109CFU/mL凝结芽孢杆菌Liu-g1发酵液。凝结芽孢杆菌Liu-g1发酵培养基配方为(质量体积比浓度，W/V)：1％玉米淀粉，1％大豆粕，0.2％碳酸钙，蒸馏水1000mL，pH7.5。3、活菌制剂的制备取1L凝结芽孢杆菌Liu-g1发酵液于4℃、5000r/min离心15～20min，弃上清液，收集菌泥；将冻干保护剂分装于600mL的冻干瓶中，每个冻干瓶装量为100mL；每瓶加入1L发酵液离心所得的菌泥(即冻干保护剂∶离心前发酵液＝1∶10体积)，混合均匀后，得到浓缩活菌制剂；将浓缩活菌制剂于-36℃低温冰箱中预冻12h至完全冻结状态，得到预冻活菌制剂。利用6LLABCONCO真空冷冻干燥机(美国)将预冻活菌制剂于-55℃、真空度0.18mBar的条件下，冻干48h至完全干燥状态，得到本文档来自技高网...
【技术保护点】
凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)Liu‑g1CGMCC No.10790。
【技术特征摘要】
1.凝结芽孢杆菌(Bacilluscoagulans)Liu-g1CGMCCNo.10790。2.一种利用产中性蛋白酶的凝结芽孢杆菌(BaciLLuscoagulans)Liu-g1CGMCCNo.10790菌株提高北京油鸡生产性能的方法，其特征在于：选择体重相近、健康无病的4周龄的北京油鸡，在基础日粮中添加活菌数为7.4×1010CFU/g以上的凝结芽孢杆菌Liu-g...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘慧，谢远红，张红星，郭茜，金君华，熊利霞，高秀芝，
申请(专利权)人：北京农学院，
类型：发明
国别省市：北京;11
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