用于乳化原油的热堆肥芽孢杆菌菌株、培养方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种用于乳化原油的热堆肥芽孢杆菌(Bacillus thermocopriae)BLG69菌株、培养方法及应用，属于微生物采油技术领域。该热堆肥芽孢杆菌BLG69菌株已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCC No.11441。该热堆肥芽孢杆菌BLG69菌株能够以原油作为唯一碳源，在37℃～60℃的温度下代谢产生乳化剂，对原油进行乳化，降低原油粘度，从而提高原油采收率，适用温度范围广。同时，该热堆肥芽孢杆菌BLG69菌株对油藏环境具有良好的适应能力，利用其进行驱油时，不需要在地面发酵，可以通过向油藏内注入能够促进其生长代谢的激活剂来达到提高原油采收率的效果。

【技术实现步骤摘要】
用于乳化原油的热堆肥芽孢杆菌菌株、培养方法及应用
本专利技术涉及微生物采油
，特别涉及一种用于乳化原油的热堆肥芽孢杆菌菌株、培养方法及应用。
技术介绍
微生物提高石油采收率技术(MicrobialEnhancedOilRecovery，MEOR)是利用微生物在油藏中的生命活动及其代谢产物来提高原油产量和采收率的一种生物技术，由于其具有应用范围广、实施成本低、经济效益显著等特点，因此受到广泛关注。不同的微生物菌种其代谢特性不同，产生的代谢产物不同，其驱油机理也不同，由此也形成了不同的微生物采油工艺。微生物驱油的机理主要包括：微生物生长和代谢过程中产生气体增加地层压力、降低原油粘度；产生有机酸改善油藏岩石的渗透率；产生生物表面活性剂和有机溶剂降低油水界面张力、提高洗油效率；产生生物聚合物控制流动度选择性封堵；降解原油重质组分从而降低原油粘度、提高原油流动性等。其中，利用微生物乳化原油从而降低原油粘度的微生物采油技术能够较为显著的提高原油采收率。利用微生物乳化原油从而降低原油粘度的微生物采油技术的关键在于菌株的选用。申请公布号CN104371940A和CN102757994A的专利申请分别公开了能够代谢产生生物表面活性剂的假单胞菌和芽孢杆菌，但是这两种菌株的生长温度为37℃，适用温度范围窄。地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)是一种嗜热芽孢杆菌，其培养温度为25℃～40℃(参见生态学杂志2013，32(3):779-786；国外油田工程第25卷第7期16～18以及申请号为201380012425的中国专利申请)，适用温度范围仍然较窄。公布号CN102399847A的专利申请公开了一种高温芽孢杆菌LEY11，其发酵温度虽然达到了45℃～70℃，但是需要在地面发酵，操作较为复杂，不能满足现场需要。综上，在实现本专利技术的过程中，专利技术人发现现有技术至少存在以下问题:现有的能够乳化原油的菌株不能同时满足适用温度范围广并且不需要现场发酵的要求。
技术实现思路
为了解决上述的技术问题，本专利技术提供一种适用温度范围广并且不需要现场发酵的用于乳化原油的热堆肥芽孢杆菌菌株、培养方法及应用。具体而言，包括以下的技术方案：一种用于乳化原油的热堆肥芽孢杆菌(Bacillusthermocopriae)BLG69菌株，该热堆肥芽孢杆菌BLG69菌株已于2015年9月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，其分类命名为：热堆肥芽孢杆菌(Bacillusthermocopriae)，保藏编号为CGMCCNo.11441，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。该热堆肥芽孢杆菌BLG69菌株的16SrRNA基因序列如序列表中的SEQIDNo.1所示，其16SrRNA在GenBank的登录号为KT807465。该热堆肥芽孢杆菌BLG69菌株的菌落形态学特征为:固体发酵培养基上培养2天的菌落直径大小为2～4mm，菌落呈圆形，表面平滑，边缘整齐，乳黄色；细胞形态学特征为：细胞形状为杆状，长为2～5um，宽为0.5～0.6um，属革兰氏阳性菌，可形成端生芽孢；兼性厌氧生长，过氧化氢酶和氧化酶阳性、不能利用葡萄糖。该热堆肥芽孢杆菌BLG69菌株的生长环境为：温度37℃～60℃，pH值6～9，氯化钠浓度0～3％(w/v，质量体积浓度)；最适生长环境为：温度45℃～50℃，pH值7.5，氯化钠浓度1～2％(w/v，质量体积浓度)。上述热堆肥芽孢杆菌BLG69菌株采用以下培养方法培养得到，所述培养方法包括以下步骤：步骤a，将采集自华北油田45℃～60℃油藏的油水样品置于经过灭菌的富集培养基中，在45℃～60℃、转速120～200rpm的摇床中振荡培养，经过分离纯化得到以原油为唯一碳源的菌株；步骤b，将步骤a所得以原油为唯一碳源的菌株接种到发酵培养基中，在温度45℃～60℃、转速120～200rpm的摇床中振荡培养72小时，得到发酵液；检测所述发酵液的表面张力，所述表面张力达到40mN/m以下的发酵液对应的菌株即为所述热堆肥芽孢杆菌BLG69菌株；其中，步骤a中，所述富集培养基包括以下质量份数的组分：清水，100份；原油，8～10份；氯化铵(NH4Cl)，0.09～0.12份；硝酸钠(NaNO3)，0.18～0.21份；磷酸氢二钾(K2HPO4)，0.04～0.06份；硫酸钠(Na2SO4)，0.18～0.21份；硫酸镁(MgSO4)，0.02～0.03份；碳酸钠(Na2CO3)，0.04～0.06份；醋酸钠(NaAc)，0.02～0.03份；酵母粉，0.04～0.06份；玉米浆，0.09～0.10份；所述富集培养基的pH值为7.5～8.0；步骤b中，所述发酵培养基包括以下质量份数的组分：油藏产出水，100份；氯化铵，0.08～0.11份；硝酸钠，0.14～0.18份；磷酸氢二钾，0.04～0.06份；硫酸镁，0.01～0.02份；氯化钠，0.8～1.1份；酵母粉，0.04～0.06份；玉米浆，0.1～0.12份；原油,5～8份；所述发酵培养基的pH值为7.5～8.0。优选地，步骤a中，将采集自华北油田55℃油藏的油水样品置于经过灭菌的富集培养基中。优选地，步骤b中，所述发酵培养基的装液量为250ml三角瓶装液量100ml或者50ml试管装液量10ml。利用上述的热堆肥芽孢杆菌BLG69菌株提高原油采收率中的方法为，向含有所述热堆肥芽孢杆菌BLG69菌株的油藏中注入激活剂，关井预设时间后进行原油开采；其中，所述激活剂包括以下质量份数的组分：油藏产出水，100份；氯化铵，0.08～0.11份；硝酸钠，0.14～0.18份；磷酸氢二钾，0.04～0.06份；硫酸镁，0.01～0.02份；氯化钠，0.8～1.1份；酵母粉，0.04～0.06份；玉米浆，0.1～0.12份；原油，5～8份。优选地，所述油藏的温度为37℃～60℃。本专利技术实施例提供的技术方案的有益效果是：本专利技术实施例提供的热堆肥芽孢杆菌BLG69菌株能够以原油作为唯一碳源，在37℃～60℃的温度下代谢产生乳化剂，从而实现对原油进行乳化降低原油粘度，提高原油采收率。该热堆肥芽孢杆菌BLG69菌株在45℃下培养72小时后的发酵液的表面张力为29～32mN/m，乳化力90％以上，具有较强的乳化原油的能力。同时，该热堆肥芽孢杆菌BLG69菌株对油藏环境具有良好的适应能力，因此利用其进行驱油时，不需要在地面发酵，可以通过向油藏内注入能够促进其生长代谢的激活剂来达到提高原油采收率的效果。综上，本专利技术实施例提供的热堆肥芽孢杆菌BLG69菌株适用温度范围广并且不需要现场发酵，在中高温油藏微生物采油
具有良好的应用前景。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍。图1为基于16SrRNA基因序列构建的系统发育树；图2为实施例4中热堆肥芽孢杆菌BLG69菌株在发酵培养基中培养后原油乳化情况图；图3为实施例4中未接种菌株的发酵培养基。生物保藏信息：本专利技术实施例提供的热堆肥芽孢杆菌BLG69菌株已于2015年9月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于乳化原油的热堆肥芽孢杆菌(Bacillus thermocopriae)BLG69菌株，其特征在于，在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCC No.11441。

【技术特征摘要】
1.一种用于乳化原油的热堆肥芽孢杆菌(Bacillusthermocopriae)BLG69菌株，其特征在于，在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCCNo.11441。2.根据权利要求1所述的热堆肥芽孢杆菌BLG69菌株，其特征在于，所述热堆肥芽孢杆菌BLG69菌株的16SrRNA基因序列如SEQIDNo.1所示。3.一种权利要求1所述的热堆肥芽孢杆菌BLG69菌株的培养方法，其特征在于，所述培养方法包括以下步骤：步骤a，将采集自华北油田45℃～60℃油藏的油水样品置于经过灭菌的富集培养基中，在温度45℃～60℃、转速120～200rpm的摇床中振荡培养，经过分离纯化得到以原油为唯一碳源的菌株；步骤b，将步骤a所得以原油为唯一碳源的菌株接种到发酵培养基中，在温度45℃～60℃、转速120～200rpm的摇床中振荡培养72小时，得到发酵液；检测所述发酵液的表面张力，所述表面张力达到40mN/m以下的发酵液对应的菌株即为所述热堆肥芽孢杆菌BLG69菌株；其中，步骤a中，所述富集培养基包括以下质量份数的组分：清水，100份；原油，8～10份；氯化铵，0.09～0.12份；硝酸钠，0.18～0.21份；磷酸氢二钾，0.04～0.06份；硫酸钠，0.18～0.21份；硫酸镁，0.02～0.03份；碳酸钠，0.04～0.06份；醋酸钠，0.02～0.03份；酵母粉，0.04～0...

【专利技术属性】
技术研发人员：游靖，任付平，宋社民，胡书宝，刘媛，薛燕芬，郑雅，李勇斌，王冠，刘莎莎，
申请(专利权)人：中国石油天然气股份有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11