一种微生物杀菌剂的制备方法技术

本发明专利技术涉及农用微生物菌剂技术领域，尤其涉及一种微生物杀菌剂的制备方法，具体步骤为，步骤1：枯草芽孢杆菌斜面培养，步骤2：枯草芽孢杆菌摇瓶培养，步骤3：枯草芽孢杆菌种子培养，步骤4：枯草芽孢杆菌发酵培养，步骤5：枯草芽孢杆菌发酵罐放罐前2h～6h添加灭菌后的硫酸镁，添加量为0.001%～0.002%，本发明专利技术的微生物杀菌剂芽孢转化率高，总菌数多，用于植物病害防控，可抑制病原菌着床，产生多种抗生素、蛋白类抗菌物质，诱导植物产生抗性，具有广谱抗菌活性，增强植物抗逆能力，有效防治作物病害，提高作物抗病、抗旱、抗寒能力。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及农用微生物菌剂
，尤其涉及一种微生物杀菌剂的制备方法。
技术介绍
植物病虫害是农业生产的大敌，据联合国粮农组织(ＦＡＯ)统计每年因植物遭受病害造成的减产平均损失为总产量的15%～20%。长期以来，用于作物病害防治的制剂一般均为化学农药。长期频繁使用化学农药，导致致病菌抗药性增强，使化学农药的效力逐渐降低。目前，主要解决方式是加大用药量，直接导致农业成本提高；致病菌抗药性加强，防治难度加大；污染环境，生态平衡遭到破坏；毒害物质在农副产品中残留、积累，危害广大人民的身体健康。因此，寻找广谱、高效、低毒的生物农药已成为科研人员及农药使用人员的共识。微生物杀菌剂是指微生物及其代谢产物和由它们加工而成的具有抑制植物病害的生物活性物质。微生物杀菌剂主要抑制病原菌产生、干扰其生物合成和破坏其细胞结构。内吸性强、毒性低，有的兼有刺激作物生长的作用。目前的微生物杀菌剂主要有三类：1、农用抗生素。农用抗生素是由微生物发酵过程中产生的次生代谢产物，在低浓度时可抑制或杀灭作物的病虫害、草害及调节作物生长发育。已研制并利用的品种有井冈霉素、庆丰霉素、多抗霉素等。2、真菌微生物杀菌剂。真菌微生物杀菌剂研究和应用最广泛的是木霉菌，其次是沾帚霉类，食线虫真菌等。此类制剂商品化很少。3、细菌微生物杀菌剂。细菌微生物杀菌剂以芽孢杆菌为主，主要有枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌等。其具有抑制植物病害，非致病菌，对人畜无害，不污染环境等特点。现有的微生物杀菌剂在实际应用过程中应用范围的较为单一，其杀菌谱较窄。此外，在工业化应用和环境适应性、抗逆性等方面现有产品也存在诸多不足，限制了微生物制剂在农作物杀菌上的广泛应用。
技术实现思路
本专利技术的目的是通过菌种选育和发酵工艺优化，设计出一种微生物杀菌剂的工业化生产方法，即利用枯草芽孢杆菌作为生产菌株，应用本专利技术所设计的工艺方案和优化的培养基配方，增强产品的杀菌性能，并扩展其实际应用范围。为实现上述的专利技术目的，本专利技术的技术方案如下：一种微生物杀菌剂的制备方法，具体步骤为：步骤1：枯草芽孢杆菌斜面培养，所述枯草芽孢杆菌斜面培养的温度为35℃～42℃，时间为42h～52h，所述枯草芽孢杆菌斜面培养培养基配方为：氯化钠0.2%～0.8%，牛肉膏0.5%～2%，蛋白胨0.2%～0.8%，琼脂粉1%～2%，其余为水，将pH值调整至7.0～8.5，灭菌后倒斜面，接种培养；步骤2：枯草芽孢杆菌摇瓶培养，所述枯草芽孢杆菌摇瓶培养的温度为35℃～42℃，时间为30h～36h，搅拌转速为200rpm，所述枯草芽孢杆菌摇瓶培养培养基配方为：玉米蛋白粉0.2%～0.8%，蛋白胨0.5%～2%，淀粉1%～2%，葡萄糖0.5%～2%，磷酸二氢钾0.05%～0.15%，其余为水，将pH值调整至7.0～8.5，灭菌冷却后接种培养；步骤3：枯草芽孢杆菌种子培养，所述枯草芽孢杆菌种子培养的温度为35℃～42℃，时间为24h～32h，接种量为2%～4%，起始搅拌转速为400rpm，6h前通气比为0.6，之后调至1.3，当尾碳的数值达到最高点开始下降时进行移种，所述枯草芽孢杆菌种子培养过程中不进行pH调整，所述枯草芽孢杆菌种子培养培养基配方为：玉米蛋白粉0.2%～1%，蛋白胨0.5%～2%，淀粉1%～3%，葡萄糖0.5%～2%，磷酸二氢钾0.02%～0.35%；聚醚消泡剂0.01%，其余为水，将pH值调整至7.0～8.5，装料系数为0.6，灭菌后通气保压，降温至35℃～42℃时，接种培养；步骤4：枯草芽孢杆菌发酵培养，所述枯草芽孢杆菌发酵培养的温度为35℃～42℃，时间为15h～26h，起始搅拌转速为400rpm，接种量为5%～10%，6h前通气比为0.8，之后根据发酵液溶氧逐步提升至1.5，当发酵过程中pH低于6.0时，向发酵液中加入氨水进行pH值调整，控制pH在6.0以上，所述枯草芽孢杆菌发酵培养的培养基配方为：玉米蛋白粉0.5%～2%，棉籽饼粉0.2%～1%，淀粉1%～2%，葡萄糖0.5%～2%，磷酸二氢钾0.05%，聚醚消泡剂0.01%，其余为水，灭菌前将pH值调整到7.0～8.5，装料系数为0.6，灭菌后通气保压，降温至35℃～42℃时，接种培养；步骤5：枯草芽孢杆菌发酵罐放罐前2h～6h添加灭菌后的硫酸镁，添加量为0.001%～0.002%，促进芽孢的形成，增加发酵液中的有效成分，待发酵液中菌含量≥5*109cfu/ml，且芽孢比例超过90%时，将发酵罐液体排出，进行成品灌装。本专利技术的有益效果为：本专利技术的微生物杀菌剂芽孢转化率高，总菌数多，用于植物病害防控，可抑制病原菌着床，产生多种抗生素、蛋白类抗菌物质，诱导植物产生抗性，具有广谱抗菌活性，增强植物抗逆能力，有效防治作物病害，提高作物抗病、抗旱、抗寒能力。同时具有高效的分解能力，能分解根部毒素、肥残、药残，产生多种植物所需营养成分及生长因子，从而刺激作物生长发育。具体实施方式以下结合实施例对本专利技术作进一步阐述。一种微生物杀菌剂的制备方法，具体步骤为：步骤1：枯草芽孢杆菌斜面培养，所述枯草芽孢杆菌斜面培养的温度为35℃～42℃，时间为42h～52h，所述枯草芽孢杆菌斜面培养培养基配方为：氯化钠0.2%～0.8%，牛肉膏0.5%～2%，蛋白胨0.2%～0.8%，琼脂粉1%～2%，其余为水，将pH值调整至7.0～8.5，灭菌后倒斜面，接种培养；步骤2：枯草芽孢杆菌摇瓶培养，所述枯草芽孢杆菌摇瓶培养的温度为35℃～42℃，时间为30h～36h，搅拌转速为200rpm，所述枯草芽孢杆菌摇瓶培养培养基配方为：玉米蛋白粉0.2%～0.8%，蛋白胨0.5%～2%，淀粉1%～2%，葡萄糖0.5%～2%，磷酸二氢钾0.05%～0.15%，其余为水，将pH值调整至7.0～8.5，灭菌冷却后接种培养；步骤3：枯草芽孢杆菌种子培养：所述枯草芽孢杆菌种子培养的温度为35℃～42℃，时间为24h～32h，接种量为2%～4%，起始搅拌转速为400rpm，6h前通气比为0.6，之后调至1.3，当尾碳的数值达到最高点开始下降时进行移种，所述枯草芽孢杆菌种子培养过程中不进行pH调整，所述枯草芽孢杆菌种子培养培养基配方为：玉米蛋白粉0.2%～1%，蛋白胨0.5%～2%，淀粉1%～3%，葡萄糖0.5%～2%，磷酸二氢钾0.02%～0.35%；聚醚消泡剂0.01%，其余为水，将pH值调整至7.0～8.5，装料系数为0.6，灭菌后通气保压，降温至35℃～42℃时，接种培养；步骤4：枯草芽孢杆菌发酵培养，所述枯草芽孢杆菌发酵培养的温度为35℃～42℃，时间为15h～26h，起始搅拌转速为400rpm，接种量为5%～10%，6h前通气比为0.8，之后根据发酵液溶氧逐步提升至1.5，当发酵过程中pH低于6.0时，向发酵液中加入氨水进行pH值调整，控制pH在6.0以上，所述枯草芽孢杆菌发酵培养的培养基配方为：玉米蛋白粉0.5%～2%，棉籽饼粉0.2%～1%，淀粉1%～2%，葡萄糖0.5%～2%，磷酸二氢钾0.05%，聚醚消泡剂0.01%，其余为水，灭菌前将pH值调整到7.0～8.5，装料系数为0.6，灭菌后通气保压，降温至35℃～42℃时，接种培养；步骤5：枯草芽孢杆菌发酵罐放本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种微生物杀菌剂的制备方法，其特征在于，具体步骤为：步骤1：枯草芽孢杆菌斜面培养，所述枯草芽孢杆菌斜面培养的温度为35℃～42℃，时间为42h～52h，所述枯草芽孢杆菌斜面培养培养基配方为：氯化钠0.2%～0.8%，牛肉膏0.5%～2%，蛋白胨0.2%～0.8%，琼脂粉1%～2%，其余为水，将pH值调整至7.0～8.5，灭菌后倒斜面，接种培养；步骤2：枯草芽孢杆菌摇瓶培养，所述枯草芽孢杆菌摇瓶培养的温度为35℃～42℃，时间为30h～36h，搅拌转速为200rpm，所述枯草芽孢杆菌摇瓶培养培养基配方为：玉米蛋白粉0.2%～0.8%，蛋白胨0.5%～2%，淀粉1%～2%，葡萄糖0.5%～2%，磷酸二氢钾0.05%～0.15%，其余为水，将pH值调整至7.0～8.5，灭菌冷却后接种培养；步骤3：枯草芽孢杆菌种子培养，所述枯草芽孢杆菌种子培养的温度为35℃～42℃，时间为24h～32h，接种量为2%～4%，起始搅拌转速为400rpm，6h前通气比为0.6，之后调至1.3，当尾碳的数值达到最高点开始下降时进行移种，所述枯草芽孢杆菌种子培养过程中不进行pH调整，所述枯草芽孢杆菌种子培养培养基配方为：玉米蛋白粉0.2%～1%，蛋白胨0.5%～2%，淀粉1%～3%，葡萄糖0.5%～2%，磷酸二氢钾0.02%～0.35%；聚醚消泡剂0.01%，其余为水，将pH值调整至7.0～8.5，装料系数为0.6，灭菌后通气保压，降温至35℃～42℃时，接种培养；步骤4：枯草芽孢杆菌发酵培养，所述枯草芽孢杆菌发酵培养的温度为35℃～42℃，时间为15h～26h，起始搅拌转速为400rpm，接种量为5%～10%，6h前通气比为0.8，之后根据发酵液溶氧逐步提升至1.5，当发酵过程中pH低于6.0时，向发酵液中加入氨水进行pH值调整，控制pH在6.0以上，所述枯草芽孢杆菌发酵培养的培养基配方为：玉米蛋白粉0.5%～2%，棉籽饼粉0.2%～1%，淀粉1%～2%，葡萄糖0.5%～2%，磷酸二氢钾0.05%，聚醚消泡剂0.01%，其余为水，灭菌前将pH值调整到7.0～8.5，装料系数为0.6，灭菌后通气保压，降温至35℃～42℃时，接种培养；步骤5：枯草芽孢杆菌发酵罐放罐前2h～6h添加灭菌后的硫酸镁，添加量为0.001%～0.002%，促进芽孢的形成，增加发酵液中的有效成分，待发酵液中菌含量≥5*109cfu/ml，且芽孢比例超过90%时，将发酵罐液体排出，进行成品灌装。...

【技术特征摘要】
1.一种微生物杀菌剂的制备方法，其特征在于，具体步骤为：步骤1：枯草芽孢杆菌斜面培养，所述枯草芽孢杆菌斜面培养的温度为35℃～42℃，时间为42h～52h，所述枯草芽孢杆菌斜面培养培养基配方为：氯化钠0.2%～0.8%，牛肉膏0.5%～2%，蛋白胨0.2%～0.8%，琼脂粉1%～2%，其余为水，将pH值调整至7.0～8.5，灭菌后倒斜面，接种培养；步骤2：枯草芽孢杆菌摇瓶培养，所述枯草芽孢杆菌摇瓶培养的温度为35℃～42℃，时间为30h～36h，搅拌转速为200rpm，所述枯草芽孢杆菌摇瓶培养培养基配方为：玉米蛋白粉0.2%～0.8%，蛋白胨0.5%～2%，淀粉1%～2%，葡萄糖0.5%～2%，磷酸二氢钾0.05%～0.15%，其余为水，将pH值调整至7.0～8.5，灭菌冷却后接种培养；步骤3：枯草芽孢杆菌种子培养，所述枯草芽孢杆菌种子培养的温度为35℃～42℃，时间为24h～32h，接种量为2%～4%，起始搅拌转速为400rpm，6h前通气比为0.6，之后调至1.3，当尾碳的数值达到最高点开始下降时进行移种，所述枯草芽孢杆菌种子培养过程中不进行pH调整，所述枯草芽孢杆菌种子培养培养基配方为：玉米蛋白粉0.2%～1%，蛋白...

【专利技术属性】
技术研发人员：常立新，
申请(专利权)人：中弘新缘生物科技天津有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12