一种检测小鼠痘病毒的荧光定量PCR试剂盒及应用制造技术

本发明专利技术公开了一种检测小鼠痘病毒的荧光定量PCR试剂盒及应用，该试剂盒含有：a)DNA提取液、b)引物、c)标准阳性模板、d)SYBRGreenI实时荧光定量PCR反应液，从细胞样品中提取DNA，进行荧光定量PCR反应，同时引入标准阳性模板，引物序列分别为正义引物：5’-GCCGTCATTCCTAAAAAAAGTGGT-3’，反义引物：5’-ATCAAAGCCTTGTTGTCTCCGA-3’，扩增子大小为176bp，标准阳性DNA模板由已插入小鼠痘病毒保守的病毒核心DNA连接蛋白编码区176bp的pTA2载体转化大肠杆菌DH5α，增殖后提取质粒，并于紫外分光光度计测A260定量并10倍梯度稀释。结果更加准确、可靠，重复性好。灵敏度高、定量快速准确、检测范围广、稳定性好。也可以为相关基础研究提供技术支持，应用前景十分广泛。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
，更具体涉及一种检测小鼠痘病毒的SYBR Green I实时荧光定量PCR试剂盒，同时还涉及SYBR Green I实时荧光定量PCR试剂盒的应用，该SYBRGreen I实时荧光定量PCR试剂盒可高效方便的对小鼠细胞制品进行定量检测和质量监控，也可以进行小鼠痘病毒的流行病学调查，还可以为相关基础研究提供技术支持，应用前景十分广泛。
技术介绍
小鼠痘病毒(Ectromelia virus, ECTV)属痘病毒科(Poxviridae)脊椎动物痘病毒亚科(Chor dopoxvirinae)正痘病毒属(Orthpoxvirus),是一种单一分子双链DNA病毒，病毒粒子为砖形，大小为200nmX200nmX250nm，对乙醚抗性。其基因组序列与天花病毒有很大的相似性，因此《中华人民共和国药典》规定对鼠源性生物制品必须检测小鼠痘病毒。小鼠痘病毒感染有急性和慢性两种形式，常见实验室烈性传染性脱脚病就是由小鼠痘病毒急性感染引起，临床表现为四肢、尾和头部肿胀、溃烂、坏死甚至脚趾脱落为特征。慢性感染中主要为持续性感染，小鼠痘病毒慢性持续性感染小鼠没有明显临床症状，是诱发本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测小鼠痘病毒的荧光定量PCR试剂盒，该试剂盒含有：a)DNA提取液、b)引物、c)标准阳性模板、d)?SYBR?Green?I实时荧光定量PCR反应液，其特征在于：从细胞样品中提取DNA，进行荧光定量PCR反应，同时引入标准阳性模板，引物序列分别为正义引物：5’?GCCGTCATTCCTAAAAAAAGTGGT?3’，反义引物：5’?ATCAAAGCCTTGTTGTCTCCGA?3’，扩增子大小为176bp，标准阳性DNA模板由已插入小鼠痘病毒保守的病毒核心DNA连接蛋白编码区176bp的pTA2载体转化大肠杆菌DH5α，增殖后提取质粒，并于紫外分光光度计测A260定量并10倍梯度稀释。

【技术特征摘要】
1.一种检测小鼠痘病毒的荧光定量PCR试剂盒，该试剂盒含有:a)DNA提取液、b)引物、c)标准阳性模板、d) SYBR Green I实时荧光定量PCR反应液，其特征在于:从细胞样品中提取DNA，进行荧光定量PCR反应，同时引入标准阳性模板，引物序列分别为正义引物:5’ -GCCGTCATTCCTAAAAAAAGTGGT-3’，反义引物:5’ -ATCAAAGCCTTGTTGTCTCCGA-3’，扩增子大小为176bp，标准阳性DNA模板由已插入小鼠痘病毒保守的病毒核心DNA连接蛋白编码区176bp的pTA2载体转化大肠杆菌DH5 α，增殖后提取质粒，并于紫外分光光度计测A26tl定量并10倍梯度稀释。2.根据权利要求1所述的一种检测小鼠痘病毒的荧光定量PCR试剂盒，其特征在于:所述的 DNA 提取液是由 5mL IOOmM Tris_HClpH=8.5、0.5mL 0.5M EDTAUmL 10%SDS、2mL5MNaCl>0.25mL ...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖庚富，张哲，郑从义，
申请(专利权)人：武汉珈创生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：