一种基因点突变的实时PCR检测方法及其应用技术

本发明专利技术属于基因突变检测领域，具体涉及一种基因点突变的实时PCR检测方法及其应用。该方法包括以下步骤：(1)实时PCR的DNA扩增循环程序；(2)解链曲线分析程序，(3)判定所测基因有无突变；其中双探针，所述上游探针的尾端接一个Fluorescein，所述下游探针的头端标记一LC荧光色团，双探針之一覆盖突变点，突变点和双杂交探针在引物的下游尽量靠近另一个引物；本发明专利技术重复性好，筒单，快速，只需很少量的DNA样品(2-3ng)，特别适用于大量样品检测，本方法的另外一个最重要的特点是不会引起PCR产物的污染，可以极大地降低运作成本。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
，具体涉及一种基因点突变的检测方法。
技术介绍
随着人类基因图谱草图的公布和各种病原体基因序列的揭示，这都将极大的促进疾病相关基因的结构和功能研究，特别是基因缺失、错位、突变(有义突变)等与疾病的关系。在众多导致人类疾病的基因有义突变、病原体亚型以及耐药基因的有义突变中，单碱基突变占了相当大的比例，其检测方法的探索一直是基因诊断研究中的重要课题，特别是对已知有义突变的检测，将是临床进行基因诊断的重要手段之一。PCR扩增技术问世以来，建立于扩增基础上的突变检测技术使检测靶DNA(目的DNA)含量和/或突变靶序列比例过低、检测灵敏度不足等难题得以克服，使得分子诊断技术进入了新阶段。在过去十多年中，曾出现了多种点突变的检测方法。1.经典的PCR-RFLP等点突变的检测方法。RFLP连琐分析技术是最早用于分析已知点突变的方法，其检测特点是:具有较高的特异性，可以确定突变的部位及性质，重复性好。但不足之处是仅适合于多态性的检测:即突变频率大于I %才能被检测到；因此，RFLP分析对于检测突变的早期，尤其是在野生型远多于突变型时其敏感性就显得不足了。2.反向限制性位点本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基因点突变的实时PCR检测方法，其特征在于，包括以下步骤(1)实时PCR的DNA扩增循环程序；(2)解链曲线分析程序，(3)判定所测基因有无突变。

【技术特征摘要】
1.一种基因点突变的实时PCR检测方法，其特征在于，包括以下步骤(I)实时PCR的DNA扩增循环程序；(2)解链曲线分析程序，(3)判定所测基因有无突变。2.根据权利要求1所述的基因点突变的实时PCR检测方法，其特征在于，(I)所述的DNA扩增循环使用由上游探针和下游探针组成的双探针，所述上游探针的尾端接一个Fluorescein，所述下游探针的头端标记一 LC荧光色团，双探針之一覆盖突变点，突变点和双杂交探针在弓I物的下游尽量靠近另一个弓I物。3.根据权利要求1所述的基因点突变的实时PCR检测方法，其特征在于，⑴所述的DNA扩增循环包括:1)聚合酶被激活、样品DNA变性双链分开成两条单链。2)接着温度下降至使DNA退火，3)引物联合在样品DNA单链上形成双链，聚合酶以样品DNA为模板开始合成，同时双杂交探针也在其中一条样品单链上；4)上游探针的尾端和下游探针头端靠近，发生荧光共振能量传递，5)然后温度升至72°C左右，在这个温度下，杂交探针已变性离开杂交位置，聚合酶快速合成DNA形成两条双链，6)温度又上升至90-95°C，扩增开始第二轮循环。4.根据权利要 求3所述的基因点突变的实时PCR检测方法，其特征在于，I)所述的聚合酶被激活是在95°...

【专利技术属性】
技术研发人员：周耐明，
申请(专利权)人：镇江盛泰生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：