一种淋巴细胞白血病分子标志物的应用方法技术

本发明专利技术提供了一种淋巴细胞白血病分子标志物的应用方法，该分子标志物为STIP（又名TFIP11），位于人类染色体22q12.1，是一种具有G-patch结构域，卷曲螺旋和几个短的色氨酸-色氨酸重复序列，本发明专利技术是针对淋巴细胞白血病的发生机制非常复杂，涉及多个癌基因的激活和抑癌基因的失活，而目前，已知的与上述疾病诊断和治疗相关的分子较少的现状，提供一种作为淋巴细胞白血病的诊断的分子标志物STIP的应用方法，该分子的发现将推动淋巴细胞白血病的诊断和治疗。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医学与临床医学
，涉及一个与淋巴细胞白血病发生、诊断和治疗相关的分子的应用方法。
技术介绍
STIP (septin and tuftelin interacting proteins),又名 TFIPll(Tufte I in-1nteracting Proteinll),位于人类染色体 22ql2.1,是一种具有 G-patch 结构域，卷曲螺旋和几个短的色氨酸-色氨酸重复序列，该蛋白的基因序列在Genebank中的登录号为NM—01121143 (Tvll) \NM—0011008697 (IV2)，在多细胞动物中高度保守的核磷酸化蛋白，与剪接体相关。STIP位于小鼠牙齿成釉细胞(8111160131&^8)的顶尖分泌池，在HEK293细胞中发现其定位于靠近SC35核斑点的亚核结构。STIP为线虫的胚胎发育所必需分子。STIP在恶性血液肿瘤中的作用国内外尚未见报道。我们首次研究发现，STIP的mRNA和蛋白质水平在淋巴细 胞白血病细胞株和患者中高表达。在B淋巴细胞白血病ARH-77中STIP主要定位在细胞核中。在B淋巴细胞白血病ARH-77细胞中采用siRNA下调STIP表达后可抑制ARH-77细胞增殖，增加ARH-77细胞的死亡率，减少ARH-77细胞的恶性增殖潜能，阻滞细胞周期在S期。Western blot检测发现下调STIP的表达后，pERKl/2活性显著降低，P21的表达下调。基于以上研究成果，表明STIP与淋巴细胞白血病的发生和恶性增殖密切相关，STIP是一个可用于淋巴细胞白血病诊断和治疗的新分子。专利技术内容本专利技术的目的是针对淋巴细胞白血病的发生机制非常复杂，涉及多个癌基因的激活和抑癌基因的失活；且目前，已发现的与这些疾病发病相关的分子较少的现状，提供一种作为淋巴细胞白血病诊断的分子标志物STIP的应用方法，该分子的发现将进一步推动恶性血液肿瘤的诊断和治疗。，该分子标志物用于制备诊断淋巴细胞白血病的制剂，所述的分子标志物为STIP，氨基酸序列为SEQ ID N0.1 ;基因转录本序列为 SEQ ID N0.2 或 3。所述的诊断淋巴细胞白血病的制剂包括PCR、Real Time RT-PCR或者Westernblot检测试剂。所述的PCR或Real Time RT-PCR试剂包括:STIP 正向引物 CGCATTGATGATGATGATGA ；STIP 负向引物 GGCTTCTTCCTTGGTCTG。本专利技术的主要优点和有益效果:STIP的表达在淋巴细胞白血病中明显增高，表明STIP与淋巴细胞白血病发生密切相关，有望成为新的淋巴细胞白血病诊断分子标志物，在淋巴细胞白血病ARH-77细胞中，干扰STIP表达可抑制肿瘤增殖，增加细胞死亡率，显著降低肿瘤细胞的恶性增殖潜能，阻滞细胞周期于S期，表明STIP是一个淋巴细胞白血病治疗的潜在新靶标。该专利技术对研究白血病的发生、诊断和治疗具有重大意义。附图说明图1为采用Real time RT-PCR方法检测淋巴细胞白血病患者和单纯性贫血患者骨髓单个核细胞中STIP的表达情况；图2为采用Western blot方法检测不同白血病细胞株及其正常人永生化的B淋巴细胞中STIP蛋白的表达情况；图3为采用Western blot检测淋巴细胞白血病患者和单纯性贫血患者骨髓单个核细胞中STIP蛋白的表达情况；图4为采用细胞免疫荧光染色(红色为STIP，蓝色显示细胞核)和Western Blot分析STIP在ARH77细胞中的定位和表达；图5为在ARH-77细胞中采用siRNA干扰STIP蛋白的表达；图6为在ARH-77细胞中采用siRNA干扰STIP表达后细胞死亡率(FL2-M1百分率)明显增加的图片(三次独立实验的代表性结果)；图7为在ARH-77细胞中采用siRNA干扰STIP的表达后细胞增殖速率明显减慢(a)及细胞恶性增殖能力明显减弱的图片(b)；图8为在ARH-77细胞中采用siRNA干扰STIP表达后，S期细胞的百分比例明显上升，表明STIP低表达后，影响细胞周期的运行，使细胞周期阻滞在S期的图片(三次独立实验的代表性结果);图9为siRNA干扰ARH77细胞中STIP的表达后p-ERKl/2的活性降低，p21表达减少的图片。具体实施例方式以下结合实施例旨在进一步说明本专利技术，而非限制本专利技术。实施例1收集临床血液系统疾病患者骨髓标本，用淋巴细胞分离液分离出单个核细胞，提取mRNA，逆转录成cDNA，采用PCR或Real Time RT-PCR方法检测淋巴细胞样品和单纯性贫血骨髓样品中STIP的mRNA表达，以GAPDH作为内对照，数据经2- Δ Ct进行换算后做图(ACt=Ct (STIP)-Ct (GAPDH))ο采用合成的STIP和GAPDH引物序列(见表I )，并按照相应的反应体系(见表2)和反应条件(见表3)进行PCR或Real-time PCR，检测淋巴细胞白血病患者和对照样本的STIP基因表达情况。表1、STIP和GAPDH弓丨物序列本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种淋巴细胞白血病分子标志物的应用方法，其特征在于，该分子标志物用于制备诊断淋巴细胞白血病的制剂，所述的分子标志物为STIP，氨基酸序列为SEQ?ID?NO.1。

【技术特征摘要】
1.一种淋巴细胞白血病分子标志物的应用方法，其特征在于，该分子标志物用于制备诊断淋巴细胞白血病的制剂，所述的分子标志物为STIP，氨基酸序列为SEQ ID N0.1。2.根据权利要求1所述的淋巴细胞白血病分子标志物的应用方法，其特征在于，所述的分子标志物为STIP，基因转录本序列为SEQ ID N0.2或3。3.根据权利要求1所述的淋巴细胞白血病分子标志物的应用方法，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘静，叶茂，方琳，陈慧勇，王梓，
申请(专利权)人：中南大学，
类型：发明
国别省市：