本发明专利技术一种检测人HLA-B*57:01和HCP5等位基因的试剂盒，包括含有检测HLA-B*57:01和HCP5引物的PCR反应液，检测HLA-B*57:01的引物为引物B57F、B57R1、B57R2，引物B57F的序列如SEQIDNO：1所示，引物B57R1的序列如SEQIDNO：2所示、引物B57R2的序列如SEQIDNO：3所示，检测HCP5的引物为引物631R和568GF，引物631R的序列如SEQIDNO：4所示、引物568GF的序列如SEQIDNO：5所示。本发明专利技术的试剂盒检测灵敏度高，特异性好，无需测序就可精确地对其基因型进行分型。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物
，涉及一种基因分型检测试剂盒，特别是一种检测人HLA-B*57:01和HCP5等位基因的试剂盒。
技术介绍
人白细胞抗原(HLA)是细胞表面分子，是调控人体特异性免疫应答的主要基因系统，HLA基因位于第6号染色体短臂，由众多复杂的等位基因构成，是目前所知多态性最复杂的遗传系统。由HLA多态性的基因编码的HLA蛋白对免疫介导或控制的疾病的易感性、个体变异、及药物诱发的副反应中起重要作用。以前往往通过血清学检测进行HLA分型，但结果并不精确。现在一般则是通过HLA的序列来分析HLA的基因型。尽管测序的方法能得到最准确的序列信息，但是这会花费大量的时间，在临床中并不适用。近年的研究表明，HLA-B的基因的多态与药物的不良反应密切相关。一些研究人员发现，在对HIV携带者进行治疗时，一些患者对抗艾滋药物阿巴卡韦(Abacavir，简称ABC)会产生严重的全身过敏性反应，甚至危及生命。进一步研究发现，HLA-B*57:01与ABC产生的严重的全身过敏反应存在密切关系，是目前发现的与药物反应的相关性最好的遗传标记物之一，此耐药项目的研究人员Simon Mallal于2003申请的专利W003/068958A1中公开了使ABC产生药物反应的基因座位置和检测方法。因此，为此艾滋病治疗指南要求患者在使用ABC药物前，必须筛查HLA-B*57:01基因，当检测结果为阴性，即患者不含HLA-B*57:01基因时方可使用ABC药物。HCP5是与HLA_B*57:01基因紧密连锁不平衡的位点rs2395029，表现为单核苷酸多态性(SNP) 568G核苷酸，检测HCP5位点单核苷酸多态性可作为鉴定HLA-B*57:01基因的一种替代标记，HLA_B*57:01与HCP5的联合检测能显著增加HLA-B*57:01基因鉴定的可靠性。 虽然以前的研究证实了 HLA_B*57:01基因与抗艾滋药物阿巴卡韦的过敏反应存在相关性，艾滋病治疗指南也要求患者在使用ABC药物前必须筛查HLA-B*57:01基因，但目前缺乏对HLA-B*57:01基因检测的试剂盒。同时，现在的测序方法虽然能得到精确的序列信息，但并不适合在检测时大规模推广。因此，获得HLA检测结果所需的高额费用和相对长的检测时间就成为有效实施治疗指南的主要障碍。对于能以低费用进行的简单、精确且快速的HLA_B*57:01检测存在巨大的需求。使用PCR序列特异性引物(sequence specificprimer, SSP)分析技术检测，这种方法是使用能够特异识别特定等位基因的引物，以PCR扩增后检测序列多态性。根据决定某等位基因的碱基性质，设计3,端第一个碱基分别与各等位基因的特异性碱基相匹配的序列特异性引物，在PCR反应过程中，只有引物3'端第一个碱基与决定特定等位基因的碱基互补时才能实现DNA片段的完全复制，根据PCR产物的有无进行等位基因的分型。这种方法可使我们目前开展的检测手段的标准化，无需测序，通过序列条带就能分辨特异性的HLA基因。但是，虽然PCR-SSP只需要PCR就可以确定基因型的SNP，简便、廉价，适合于分子标记的要求。但是该技术没有被大量用于检测基因型的SNP，其主要原因是引物的稳定性较差。国内现在尚无HLA-B*57:01基因检测试剂盒，国际上虽然有对HLA_B*57:01基因检测的试剂盒，但是采用通用引物扩增后测序的方法进行HLA-B*57:01基因的检测，导致了样品检测时间较长，检测成本较高。专利技术概述本专利技术所要解决的技术问题是提供一种检测人HLA_B*57:01和HCP5等位基因的试剂盒，所述的这种检测人HLA-B*57:01和HCP5等位基因的试剂盒解决了现有技术中的试剂盒检测HLA-B*57:01基因的时间长，检测成本高的技术问题。本专利技术提供了一种检测人HLA_B*57:01和HCP5等位基因的试剂盒，包括含有检测HLA-B*57:01和HCP5引物的PCR反应液，所述的检测HLA_B*57:01的引物为引物B57F、引物B57R1、引物B57R2，所述的引物B57F的序列如SEQ ID NO:1所示，所述的引物B57R1的序列如SEQ ID NO:2所示，所述的引物B57R2的序列如SEQ ID NO:3所示，所述的检测HCP5的引物为引物631R和引物568GF，所述的引物631R的序列如SEQ ID NO:4所示、所述的引物568GF的序列如SEQ ID NO:5所示，所述的引物B57F、引物B57R1、引物B57R2、引物631R和引物568GF在PCR反应液中的浓度分别为0.5 μ M。进一步的，在所述的PCR反应液中还含有内对照引物，所述的内对照引物为引物HGHF和引物HGHR24，所述的引物HGHF的序列如SEQ ID NO:6所示、所述的引物HGHR24的序列如SEQ ID NO:7所示，所述的内对照引物HGHF和HGHR24在PCR反应液中的浓度分别为 0.2 μ Μ。进一步的，在所述的PCR反应液中还包括染料，dNTPs和PCR缓冲体系。 优选的，所述的染料为甲酚红，浓度为0.01%(wt/vol) ；dNTPs的浓度为0.2mM。优选的，所述的PCR缓冲体系为由Tris-HCl、氯化钾、氯化镁和明胶组成，在所述的缓冲体系中，所述的Tris-HCl的浓度为10mM，所述的氯化钾的浓度为50mM，所述的氯化镁的浓度为1.5mM，所述的明胶的浓度为0.001%(wt/vol)。进一步的，本专利技术试剂盒中还包括Taq酶，所述的Taq酶的最终使用量为0.3单位/微升。本专利技术还提供了用于上述的试剂盒的检测人HLA_B*57:01等位基因的引物，其序列如SEQ ID NO:1所示。本专利技术还提供了用于上述的试剂盒的检测人HLA_B*57:01等位基因的引物，其序列如SEQ ID NO:2所示。本专利技术还提供了用于上述的试剂盒的检测人HLA_B*57:01等位基因的引物，其序列如SEQ ID NO:3所示。本专利技术还提供了用于上述的试剂盒的检测人HCP5等位基因的引物，其序列如SEQID NO:4 所示。本专利技术还提供了用于上述的试剂盒的检测人HCP5等位基因的引物，其序列如SEQID NO:5 所示。具体的，引物B57F (SEQ ID N0:1)，B57R1 (SEQ ID N0:2)，B57R2 (SEQ ID NO: 3)用于检测HLA-B*57:01等位基因，两条反向引物B57R1 (SEQ ID N0:2)和B57R2 (SEQ IDN0:3)能完全涵盖目标的SNP位点，杜绝了对此基因漏检的可能，并在引物的3’端引入了错配碱基以增加引物的特异性。引物631R (SEQ ID NO:4)和引物568GF (SEQ ID N0:5)用于检测HCP5基因，位于染色体rs2395029SNP568G核苷酸和HLA_B*57:01等位基因紧密连锁。在此SNP位点附近设计上下游引物，其中下游引物3’端涵盖此SNP位点，通过检测rs2395029SNP位点，能保证本试剂盒检测结果的准确性。引物HGHF(SEQ ID N0:6)和HGHR(SEQ ID N0:7)是内对照引物，扩增人类生长因子基因片段，扩增片段长度42本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种检测人HLA?B*57:01和HCP5等位基因的试剂盒，其特征在于：包括含有检测HLA?B*57:01和HCP5引物的PCR反应液，所述的检测HLA?B*57:01的引物为引物B57F、引物B57R1、?引物B57R2，所述的引物B57F的序列如?SEQ?ID?NO?：1所示，所述的引物B57R1的序列如?SEQ?ID?NO?：2所示，所述的引物B57R2的序列如?SEQ?ID?NO?：3所示，所述的检测HCP5的引物为引物631R和引物568GF，所述的引物631R的序列如?SEQ?ID?NO?：4所示、所述的引物568GF的序列如?SEQ?ID?NO?：5所示,?所述的引物B57F、引物B57R1、引物B57R2、引物631R和引物568GF在PCR反应液中的浓度分别为0.5μM。
【技术特征摘要】
1.一种检测人HLA-B*57:01和HCP5等位基因的试剂盒，其特征在于:包括含有检测HLA-B*57:01和HCP5引物的PCR反应液，所述的检测HLA_B*57:01的引物为引物B57F、引物B57R1、引物B57R2，所述的引物B57F的序列如SEQ ID NO:1所示，所述的引物B57R1的序列如SEQ ID NO:2所示，所述的引物B57R2的序列如SEQ ID NO:3所示，所述的检测HCP5的引物为引物631R和引物568GF，所述的引物631R的序列如SEQ ID NO:4所示、所述的引物568GF的序列如SEQ ID NO:5所示，所述的引物B57F、引物B57R1、引物B57R2、引物631R和引物568GF在PCR反应液中的浓度分别为0.5μΜ。2.如权利要求1所述的一种检测人HLA-B*57:01和HCP5等位基因的试剂盒，其特征在于:在所述的PCR反应液中还含有内对照引物，所述的内对照引物为引物HGHF和引物HGHR24，所述的引物HGHF的序列如SEQ ID NO:6所示、所述的引物HGHR24的序列如SEQID NO:7所示，所述的内对照引物HGHF和HGHR24在PCR反应液中的浓度分别为0.2μΜ。3.如权利要求1所述的一种检测人HLA-B*57:Ol和HCP5等位基因的试剂盒，其特征在于:所述试剂盒的PCR反应液中还包括染料，dNTPs和PCR缓冲体系。4.如权利要求3所述的一种检...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵桐茂，詹申宏，罗振武，
申请(专利权)人：上海血液生物医药有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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