【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物
中质粒DNA疫苗的制备方法及其专用工程菌及高产发酵培养基，特别是涉及一种黑色素瘤治疗性质粒DNA疫苗pSVK-CAVA的制备方法及其专用工程菌及高产发酵培养基。
技术介绍
质粒DNA疫苗是近年来经研究发现的一种极具发展潜力的新疫苗，从上世纪九十年代初期质粒DNA疫苗受到了科学家的关注，到现在发展近三十年，已经有了长足的发展。质粒DNA疫苗具有高安全性、无载体免疫原性和易于生产等特点，因此，同活病毒和病毒基础的疫苗相比，其具有独特的优势。数百项疫苗进入临床试验阶段，目前已有4种动物用质粒 DNA 疫苗及产品上市(Michele AK, David BW.DNA vaccines:ready for primetime Nature Reviews Genetics, 2008，9:776-788.)，人用质粒 DNA 疫苗及产品呼之欲出。因此，随着质粒DNA疫苗及产品的快速发展，建立符合药用标准的质粒DNA的大规模生产平台成为一个重大的研究课题。本专利技术针对质粒DNA疫苗的发酵工艺进行探索，是质粒DNA疫苗大规模生产发展中的基石，其重要...
【技术保护点】
用于制备黑色素瘤治疗性质粒DNA疫苗pSVK?CAVA的工程菌，是转化有黑色素瘤治疗性质粒DNA?pSVK?CAVA（或称PSCK?2PFcGB）的大肠杆菌XL10?Gold，命名为E.coli?XL10?Gold/CAVA。
【技术特征摘要】
1.用于制备黑色素瘤治疗性质粒DNA疫苗pSVK-CAVA的工程菌，是转化有黑色素瘤治疗性质粒DNA pSVK-CAVA (或称PSCK_2PFcGB)的大肠杆菌XLIO-Gold，命名为E. coliXLIO-Gold/CAVA。2.根据权利要求I所述的工程菌，其特征在于是将黑色素瘤治疗性pSVK-CAVA质粒DNA转化大肠杆菌XLlO-Gold得到，包括但不限于使用Hananhan法、Inoue法、氯化I丐法和电击转化法得到转化菌XLlO-Gold ;再将转化菌XLlO-Gold涂布于LB固体平板培养基，在37°C、200rpm下培养15小时后挑取单克隆菌落；将单克隆菌落接种于5mL LB液体培养基中，在37°C、200rpm下培养12小时后按照1:100进行连续传代培养，12小时转接传代I次，可连续传代30代；单克隆菌株以及传代30代以内历次传代菌株均为转化大肠杆菌XLlO-Gold的工程菌。3.根据权利要求I所述的工程菌，其特征在于为用氯化钙法转化大肠杆菌XLlO-Gold的工程菌，转化方法包括将_70°C保存的100 ill感受态细胞XLlO-Gold于冰浴中解冻10分钟，然后加入pSVK-CAVA质粒DNA25-50ng，轻柔混匀后，置冰浴中30分钟；冰浴结束后，于42°C水浴中热击90秒，后迅速置于冰浴中冷却3-5分钟，加入800 U I无抗性的LB液体培养基，混匀后于37°C，200rpm振荡培养I小时，得到pSVK-CAVA质粒DNA的转化菌XLlO-Gold04.一种用于制备黑色素瘤治疗性质粒DNA疫苗pSVK-CAVA的发酵培养基ITB，每IL培养基含酪蛋白胨 10_14g，酵母提取物 16-20g，甘油 2. 4-4mL, NH4Cl 0. 75_lg，0. 17mol/LKH2PO4 和 0. 72mol/L K2HPO4 混合溶液 75-100mL，MgSO4 0. 168-0. 216g，微量元素 0. 75-lmL。5.根据权利要求4所述的发酵培养基ITB，其特征在于，每IL培养基含酪蛋白胨12g，酵母提取物 16. 61g,甘油 3. 05mL, NH4Cl Ig, 0. 17mol/L KH2PO4 和 0. 72mol/LK2HP04 混合溶液 IOOmL, MgSO4 0. 185g，微量元素 ImL06.根据权利要求4`或5所述发酵培养基ITB，其特征在于，微量元素包括=FeCl3 6H2027g/L、ZnCl2 2g/L、CoCl2 6H20 2g/L、Na2MoO4 2H20 2g/L、C...
【专利技术属性】
技术研发人员：于继云，阎瑾琦，王宇，徐元基，张巍，吴昊，张亮，朱晓明，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所，
类型：发明
国别省市：
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