一株大肠杆菌基因工程菌及利用其生产L‑苏氨酸的方法技术
【技术实现步骤摘要】
一株大肠杆菌基因工程菌及利用其生产L-苏氨酸的方法
：本专利技术属于基因工程
，具体涉及一株大肠杆菌基因工程菌及利用其生产L-苏氨酸的方法。
技术介绍
：启动子为RNA聚合酶特异性识别和结合的DNA序列。启动子是基因的一个组成部分，控制基因表达(转录)的起始时间和表达的程度。启动子就像“开关”，决定基因的活动，但启动子本身并不控制基因活动，而是通过与称为转录因子的这种蛋白质结合而控制基因活动的。启动子位于结构基因5'端上游的一段DNA序列，能够指导全酶(holoenzyme)同模板正确结合，活化RNA聚合酶，启动基因转录。目前常用的启动子类型有组成型启动子(能够使基因在所有细胞中都能启动表达的启动子)和诱导型启动子(在某些特定的物理或化学信号的刺激下，该种类型的启动子可以大幅度地提高基因的转录水平)。组成型启动子不受外界条件的影响，所启动基因的表达具有持续性，但不表现时空特异性；而诱导型启动子可以通过外界的物理化学信号人为地调控结构基因的表达。现有技术中的组成型启动子，表达强度不具有时空特异性，不可以人为地调控；而诱导型启动子需要添加IPTG、乳糖等外源物质...
【技术保护点】
一株大肠杆菌基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌是将出发菌株的磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因的启动子P
【技术特征摘要】
1.一株大肠杆菌基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌是将出发菌株的磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因的启动子Pppc替换为6-磷酸葡萄糖脱氢酶基因的启动子Pzwf，从而达到能通过甜菜碱调节其L-苏氨酸生产能力的目的。2.如权利要求1所述的一株大肠杆菌基因工程菌，其特征在于，所述出发菌株为E.coliTHRD，保藏编号CGMCCNo.11074。3.如权利要求1所述的一株大肠杆菌基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌的构建方法如下：(1)ppc基因启动子Pppc上、下游同源臂(ppc-up和ppc-down)、Cm基因和zwf基因启动子Pzwf的扩增；(2)构建包含上述片段的连接片段ppc-up-Cm-Pzwf-ppc-down；(3)将上述连接片段转化入大肠杆菌THRD感受态细胞，筛选获得ppc基因启动子Pppc被zwf基因启动子Pzwf替换的突变株。4.一种利用权利要求1或2所述菌株生产L-苏氨酸的方法，其特征在于，发酵过程中在发酵体系中添加0.5-1g/L的甜菜碱，从而实现L-苏氨酸产量及糖酸转化率的提高。5.如权利要求4所述的生产L-苏氨酸的方法，其特征在于，摇瓶发酵方法具体如下：(1)将菌株进行斜面培养活化，37℃培养14-16h，转接一次，37℃培养8-10h；(2)将斜面菌种接种到种子培养基中，37℃，200rpm培养至OD600为6-8；(3)按照10％的接种量将种子培养液接种到发酵培养基中，37℃，200rpm培养，发酵过程中，缺糖后开始流加糖，甜菜碱随糖进行流加，所述流加的糖为80％的葡萄糖，含2.5g/L甜菜碱，每次每30mL发酵体系流加1mL，发酵28-32h结束。6.如权利要求4所述的生产L-苏氨酸的方法，其特征在于，发酵罐发酵方法具体如下：(1)将菌株进行斜面活化，37℃培养14-16h，转接一次，37℃培养8-10h；(2)将斜面菌种接种到种子培...
【专利技术属性】
技术研发人员：谢希贤，马明利，陈宁，鄢芳清，徐庆阳，马倩，刘涛，王俊朋，
申请(专利权)人：天津科技大学，
类型：发明
国别省市：天津,12
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