一种降解烟叶中叶绿素的方法技术

本发明专利技术属于烟草制备技术领域，具体涉及一种利用拟南芥叶绿素酶AtCLH1基因降解烟叶中叶绿素方法的专利申请。该方法首先将AtCLH1基因整合进入大肠杆菌基因组中构建重组菌株，然后扩增该重组菌株制备处理菌剂，再将该菌剂喷施于烟叶表面，并适当发酵即可。实验表明，供试烟叶经处理后，烟叶中的叶绿素得以快速降解，叶绿素含量得到了明显降低，降解率可达20%以上，使烟叶化学成分更为协调。由于该处理方法技术较为成熟，处理成本较低，且处理周期较短，而对烟叶质量改善较为明显，能够明显提升烟叶品质（尤其是低次烟叶品质提升较为明显），因而在烟草制备领域具有较好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于烟草制备
，具体涉及一种利用拟南芥叶绿素酶AtCLH1基因降解烟叶中叶绿素方法的专利申请。
技术介绍
叶绿素是高等植物进行光合作用、吸收光能和光能转化的主要色素类物质，包括叶绿素a、叶绿素b、脱镁叶绿素等几种类型；叶绿素也是烟草生长过程中烟叶进行碳氮代谢的基础。一般而言，在烟叶成熟和调制过程中，烟叶中所含叶绿素会大量降解，其降解率可达99%，通常仅以痕量存在。但受限于烟草处理方式的工艺差别，烟叶中叶绿素降解不够充分的现象也偶有存在。当烟叶中叶绿素降解不完全时，烟叶烤后易形成不同程度的“青黄烟”，这种烟叶在燃吸时，会产生明显的青杂气，进而严重影响烟叶的外观品质与内在品质。由于叶绿素降解是否充分对烟草品质具有十分重要的潜在影响，因而极有必要采取适当措施以确保烟叶中叶绿素降解充分。叶绿素酶是一种普遍存在于高等植物中，介导叶绿素降解反应的关键酶之一，主要位于植物叶绿体内膜上，质体外也有所分布。该酶由叶绿素酶基因编码，目前已经克隆出的叶绿素酶基因共有4种，分别是藜叶绿素酶基因CaCLH、柑桔叶绿素酶基因CHLASE1和拟南芥叶绿素酶基因AtCLH1、AtCLH2。但现有研本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种降解烟叶中叶绿素的方法，其特征在于，该方法利用拟南芥叶绿素酶AtCLH1基因进行烟叶中叶绿素的降解，具体包括如下步骤：（1）PCR克隆获得拟南芥叶绿素酶AtCLH1基因，（2）构建重组表达载体pET28a‑AtCLH1；（3）构建重组工程菌，具体为：将步骤（2）中重组表达载体pET28a‑AtCLH1转化大肠杆菌BL21感受态细胞，经筛选、鉴定后获得转化正确的重组工程菌；（4）菌株扩增与诱导表达，具体为：将步骤（3）中构建正确的重组工程菌转接于LB液体培养基中，培养，并加入IPTG诱导表达；诱导表达结束后，离心收集菌体，并加入LB液体培养基进行重悬，以此可作为烟叶处理用菌剂；（5）烟叶处理...

【技术特征摘要】
1.一种降解烟叶中叶绿素的方法，其特征在于，该方法利用拟南芥叶绿素酶AtCLH1基因进行烟叶中叶绿素的降解，具体包括如下步骤：（1）PCR克隆获得拟南芥叶绿素酶AtCLH1基因，（2）构建重组表达载体pET28a-AtCLH1；（3）构建重组工程菌，具体为：将步骤（2）中重组表达载体pET28a-AtCLH1转化大肠杆菌BL21感受态细胞，经筛选、鉴定后获得转化正确的重组工程菌；（4）菌株扩增与诱导表达，具体为：将步骤（3）中构建正确的重组工程菌转接于LB液体培养基中，培养，并加入IPTG诱导表达；诱导表达结束后，离心收集菌体，并加...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨宗灿，张展，马宇平，陈芝飞，于建春，彭玉富，周浩，郝辉，聂聪，
申请(专利权)人：河南中烟工业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：河南;41